第五章沙門氏菌的檢驗(yàn)ppt課件

1、第五章 沙門氏菌的檢驗(yàn),本章重點(diǎn)掌握： 1、食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)原理 2、食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)方法,一、沙門氏菌屬簡介,DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美國獸醫(yī)微生物和病理學(xué)家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學(xué)博士。1884年任美國農(nóng)業(yè)部畜牧局首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學(xué)微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀(jì)念他而以他的名字命名的,沙門氏菌分為三大類群,第一類群：專門對人致病 第二類群：食物中毒沙門氏菌群 第三類群：專門對動物致病,事例,俄亥俄州國王堅果公司生產(chǎn)的磅（2.27千克）重罐裝花生醬中含有沙門氏菌。國王堅果公司日發(fā)表聲明說，接到明尼蘇達(dá)州方

2、面的通報后，公司立即決定全部召回公司及其下屬兩家公司生產(chǎn)的花生醬。 美國疾病控制和預(yù)防中心日發(fā)表的新聞公報又將國王堅果公司推向風(fēng)口浪尖。公報說，自去年月以來，美國共有個州發(fā)現(xiàn)沙門氏菌 疫情，染病人數(shù)達(dá)到人，并有 人被懷疑在感染沙門氏菌后死亡。 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，幾乎所有感染沙門氏菌的 患者都食用過花生醬，并且大多數(shù)人 食用的都是國王堅果公司的磅重罐 裝花生醬,人民網(wǎng)12月7日電 美國牛肉包裝公司日前宣布，將從亞利桑那州和新墨西哥州的多家超市召回大約10噸牛肉餡。據(jù)悉，這些牛肉餡遭一種有抗藥性的沙門氏菌污染，目前已經(jīng)造成多人因食用這批牛肉而生病。這是該公司今年在美國境內(nèi)第二次發(fā)出召回牛肉餡的通知。今年8

3、月，這家牛肉公司也曾召回了將近400噸牛肉餡。當(dāng)時，那批產(chǎn)品造成至少39人生病。對免疫系統(tǒng)虛弱的老年人和幼兒來說，這些被沙門氏菌污染的牛肉餡可能帶來致命后果，其癥狀包括腹瀉、高燒、 肚子疼和嘔吐。由于 這種沙門氏菌具有強(qiáng)抗 藥性，因此更加危險,生物學(xué)特性,形態(tài)染色特征： 革蘭氏陰性，大小為1-30.4-0.9m的兩端鈍圓的短桿菌，無芽孢，一般無莢膜，除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌以外，都有周身鞭毛，運(yùn)動力強(qiáng)，具菌毛,培養(yǎng)特性： 沙門氏菌需氧或兼性， 1042 都可生長，最適生長溫度為37，最適pH為6.87.8。 營養(yǎng)瓊脂平板上：3537培養(yǎng)1824h，其菌落大小一般為23mm，光滑、濕潤、

4、無色、半透明、邊緣整齊。 血平板：中等大小、灰白色菌落,生物學(xué)特性,生物學(xué)特性,生化反應(yīng)： 不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不產(chǎn)生吲哚，不分解尿素，VP試驗(yàn)陰性，大多產(chǎn)生硫化氫。發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和甘露醇，除傷寒桿菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣外，其他沙門氏菌均產(chǎn)酸產(chǎn)氣,抵抗力,不耐熱，551h或者6015-30min即可殺死 普通水中可生存2-3周，糞便中存活1-2月 在牛乳和肉類，存活數(shù)月，腌肉中存活2-3月 冷凍對沙門氏菌無殺滅作用，即使在-25低溫仍可存活10個月左右,沙門氏菌的來源,家畜、家禽的生前感染和宰后污染 乳中沙門氏菌的來源 蛋類沙門氏菌的來源 熟制品中沙門氏菌的來源,沙門氏菌屬流行病學(xué)特點(diǎn),季節(jié)性特點(diǎn)全年

5、皆可發(fā)生，多見于夏、秋兩季，主要癥狀急性腸胃炎 食品種類沙門氏菌食物中毒的食品主要為動物性食品，特別是畜肉類及其制品 沙門氏菌污染肉類食物的幾率很高,發(fā)病率及影響因素,沙門氏菌食物中毒發(fā)病率較高，占總食物中毒的4060，最高可達(dá)90 沙門氏菌致病力強(qiáng)弱與菌型有關(guān) 沙門氏菌致病力強(qiáng)弱與易感人群有關(guān),二、檢驗(yàn),選擇性平板分離,選擇性增菌,前增菌,生化鑒定,血清學(xué)鑒定,檢樣,25g樣品225mLBPW,36 1 8h18h,BS,HE（或XLD、SS,TSI（排除A/A H2S結(jié)果 ），賴氨酸，靛基質(zhì)，尿素，KCN,沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn),H2S 靛 尿 KCN 賴,H2S 靛 尿 KCN 賴,非如左述

6、的各種反應(yīng)結(jié)果,沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn),沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn),非沙門氏菌,36 1 18h24h,36 1 18h24h,36 1 40h48h,36 1 18h24h,中華人民共和國 國家標(biāo)準(zhǔn),GB/T 4789.4-2010,H2S 靛 尿 KCN 賴,報告,沙門氏菌在BS平板上,沙門氏菌在HE平板上,沙門氏菌的TSI試驗(yàn),三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn),本試驗(yàn)可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，

7、所以仍保持黃色,賴氨酸脫羧酶試驗(yàn),試驗(yàn)管,對照管,陽性,陰性,對照管變黃,試驗(yàn)管變黃,靛基質(zhì)（Imdole）試驗(yàn),某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物,尿素酶（Urease）試驗(yàn),有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色,1、未接種 2、尿素酶陽性 3、尿素酶陰性,KCN生長試驗(yàn),右：抑制生長,斜面,底層,產(chǎn)氣,硫化氫,初步判斷,K,A,K,A,A,A,沙門氏菌在TSI和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的結(jié)果,賴氨酸脫羧酶,可疑沙門氏菌屬,可疑沙門氏菌屬,可疑沙門氏菌屬

8、,K,K,非沙門氏菌屬,K:產(chǎn)堿；A：產(chǎn)酸；+（-）：多數(shù)陽性，少數(shù)陰性；+/-：陽性或者陰性,腸桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表,序號,硫化氫,靛基質(zhì),尿素,氰化鉀,賴氨酸脫羧酶,判定菌屬,A1,沙門氏菌屬,A2,A3,A1：沙門氏菌屬；如尿素、氰化鉀、賴氨酸脫羧酶有一項(xiàng)異常；兩項(xiàng)異常：非,腸桿菌科各屬生化反應(yīng)初步鑒別表,pH7.2尿素,氰化鉀（KCN,賴氨酸 脫羧酶,判定結(jié)果,甲型副傷寒沙門氏菌（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果） 沙門氏菌或（要求符合本群生化特性） 沙門氏菌個別變體（要求血清學(xué)鑒定結(jié)果,反應(yīng)序號A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn),甘露醇,山梨醇,判 定 結(jié) 果,沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體 （要求血清

9、學(xué)鑒定結(jié)果） 非沙門菌,反應(yīng)序號A3：補(bǔ)做ONPG,ONPG+為大腸埃希氏菌，ONPG為沙門氏菌。同時，沙門氏菌應(yīng)為賴氨酸+，但甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸-。 ONPG: 鄰硝基酚D半乳糖苷,ONPG試驗(yàn) 陽性（黃） 空白,血清學(xué)鑒定,鞭毛抗原（H,菌體抗原（O,K或Vi抗原,血清學(xué)鑒定,一般采用1.5%瓊脂斜面培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。 用AF多價O血清做玻片凝集試驗(yàn)，同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙形菌株，不能分型,沙門氏菌檢驗(yàn)幾點(diǎn)注意,冷凍樣品解凍需在45以下，有自動調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進(jìn)行15min或在2-8，18小時內(nèi)軟化。 為保證檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，必須在選擇

10、性培養(yǎng)基上挑取足夠數(shù)量的菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定。 進(jìn)行生化反應(yīng)時，應(yīng)以純培養(yǎng)物進(jìn)行試驗(yàn)，如出現(xiàn)血清學(xué)陽性，而生化反應(yīng)特征不符合時，應(yīng)對接種物進(jìn)行純化，用純化后的培養(yǎng)物重新進(jìn)行生化試驗(yàn)。 測試中應(yīng)同時接種陽性對照菌株,沙門菌儀器檢測法,VIDAS（生物梅里埃公司） BAX （杜邦公司,沙門菌儀器檢測法,VIDAS 應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的全自動免疫分析儀 ，用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過激發(fā)光源檢測，即能自動讀出發(fā)光的陽性標(biāo)本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測靈敏度高，速度快，可以在48小時的時間內(nèi)快速鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157：H7、

11、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等,沙門菌儀器檢測法,DUPONT Qualicon BAX System 應(yīng)用DNA分子核酸探針或基因探針技術(shù)制造的全自動PCR分析儀。將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標(biāo)記，加入已變性的被檢DNA樣品中， 在一定條件下即可與該 樣品中有同源序列的 DNA區(qū)段形成雜交雙鏈， 從而達(dá)到鑒定樣品中DNA 的目的,商品化生化鑒定系統(tǒng),VITEK GNI+ 應(yīng)用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進(jìn)行測試，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)。先制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后將菌懸液接種到各種細(xì)菌的小卡上，將其放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)，每隔一定時間，儀器會自動檢測培養(yǎng)基的發(fā)酵情況，并換算成能被計算機(jī)所接受的生物編碼。最后由