酶提取桑葚渣中花色苷的提取

1、桑葚渣中花色苷的提取摘要：以提高花色苷的提取率為目的。探索果膠酶提取桑葚渣中花色苷的工藝條件?？疾煊绊懱崛⌒Ч闹饕蛩兀好赣昧浚附鈺r(shí)間，酶解溫度，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化桑葚花色苷提取工藝。1. 材料與方法1.1材料 釀桑葚酒后的桑葚渣1.2主要儀器 紫外可見(jiàn)光光度計(jì) TU-1800PC 電熱恒溫振蕩水槽 DKZ-2 電子分析天平 BS-210S 高速組織攪碎機(jī) DS-1 電子PH計(jì) PP-15 超濾裝置 納濾裝置1.3主要試劑 果膠酶 30000U/g 檸檬酸 分析純 磷酸氫二鈉 分析純 鹽酸 分析純 無(wú)水乙醇 分析純1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)1.4.1 提取液的配制磷酸緩沖液的配制；

2、配制0.1mol/L的檸檬酸溶液；配制0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液；0.1mol/L的檸檬酸溶液398ml，加入0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液102ml。稀釋1000ml。2.桑葚中花色苷提取2.1用果膠酶酶解桑葚渣稱取10g的桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入一定量的去氧水，加入酶進(jìn)行酶解。2.2粗提取花色苷（1） 將上述各酶解后的溶液進(jìn)行滅酶處理，（2） 過(guò)濾提取上清液。（3） 在提取液中加入聚合硫酸鐵，并進(jìn)行過(guò)濾，除去絮凝沉淀物，得初級(jí)濾液（4） 用石油醚對(duì)初級(jí)濾液萃取3次除去脂類（5） 最后再真空抽濾，保證提取液無(wú)顆粒雜質(zhì)。最終得到桑葚花苷素粗提取液。2.3純化花色苷（1） 用大孔樹(shù)脂

3、對(duì)粗提取液進(jìn)行吸附，然后采用45%的乙醇水溶液對(duì)已經(jīng)吸附在大孔樹(shù)脂上的花色苷有效成分進(jìn)行洗脫，得洗脫液；（2） 采用納濾裝置對(duì)（1）所得洗脫液進(jìn)行過(guò)濾處理，得到透過(guò)液和截留液，實(shí)現(xiàn)對(duì)所需溶液和洗脫溶劑的分離；（3） 將所需溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后裝入 培養(yǎng)皿中 , 冷藏 于 - 8 0 冰箱冷凍 2 后放入冷凍干燥機(jī)凍成干粉 。（4） 所得干粉即為純化后的花色苷2.4稱量干粉的重量3. 花色苷理論測(cè)定指標(biāo)花色苷含量：采用消光系數(shù)法計(jì)算花色苷含量，用分光光度計(jì)，于1cm比色皿中，波長(zhǎng)為530nm處測(cè)定吸光度。消光系數(shù)法：用9mL酸化乙醇（95%乙醇和1.5N鹽酸，體積比85：15）于1cm比色皿中，在波長(zhǎng)

4、為530處測(cè)定吸光值。總花色苷含量計(jì)算公式如下：總花色苷含量式中：E-530nm處直接測(cè)定的吸光度值（)V-萃取液測(cè)定時(shí)稀釋的總體積數(shù)（mL)M-樣品重量（g)98.2-1%de1花色苷1mol消光系數(shù) 4.桑葚渣中花色苷酶提取法單因素實(shí)驗(yàn)4.1.1果膠酶用量對(duì)花色苷提取量的影響稱取 10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，在溫度50，PH3.0，酶解時(shí)間1h條件下，酶用量分別為0，3，6，9，12和15mg/g果渣酶解后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。果膠酶（mg/g）03691215花色苷提取率畫(huà)出折線圖：由圖可知：4.1.2果膠酶酶解PH對(duì)花色苷提取率的影響稱取 10g

5、桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解時(shí)間1.5h，溫度50。分別在PH為2，3，4，5，6，7的條件下進(jìn)行酶解，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。PH234567花色苷提取率畫(huà)出折線圖：由圖可知：4.1.3果膠酶酶解溫度對(duì)花色苷提取率的影響稱取 10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解時(shí)間1.5h，PH3.0，分別在溫度為20，30，40，50，60和70的條件下進(jìn)行酶解后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。酶解溫度/203040506070花色苷提取率畫(huà)出折線圖：由圖可知：4.1.4果膠酶酶解時(shí)間對(duì)花色苷提取率的影響稱取 10g桑葚渣于具塞的錐形瓶中，加入9ml磷酸緩沖溶液，酶用量40mg/g果渣，在溫度50，PH3.0，酶解0，0.5，1，1.5，2和2.5h后，移取上清液1ml，測(cè)定花色苷含量。酶解時(shí)間/h00.511.52.02.5花色苷提取率 畫(huà)出折線圖： 由圖可知：4.2花色苷酶法提取的條件優(yōu)化 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以酶用量，酶解時(shí)間，酶解溫度為考察因素，按正交法對(duì)酶法提取工藝進(jìn)行研究，優(yōu)化花色苷酶法提取的最佳工藝條件。4.2.1正交實(shí)驗(yàn)提取花色苷 選用4因素3水平正交設(shè)計(jì)法,見(jiàn)下表水平因素果膠酶用量PH提取溫度/提取時(shí)間/h133401264501.5395