（藥物分析學(xué)專業(yè)論文）分子印跡聚合物毛細(xì)管涂層的制備及電色譜評(píng)價(jià).pdf

學(xué)位論文原創(chuàng)性聲 本人鄭重聲明 所呈交的論文是我個(gè)人在 研究工作取得的研究成果 除了文中特別加以 謝的地方外 論文中不包含任何其他個(gè)人或集 的研究成果 與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在 論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意 學(xué)位論文作者簽名 日期 叫戶年f 月乙夕日 學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū) 本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留 使用學(xué)位論 文的規(guī)定 即 學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù) k 據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索 并采用影印 縮印或掃描等復(fù)制手段保存 匯編以 供查閱和借閱 同意學(xué)校向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文 并編入 有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù) 保密 u 在 年解密后適用本授權(quán)書(shū) 本論文屬于 不保密圈 請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打 4 作者簽名 疊遺邀日期 矽卜年戶月護(hù)日 導(dǎo)師簽名 壟 塾i 圣日期 矽f c 7 年期切e l 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 分子印跡 m o l e c u l a r l yi m p r i n t e dp o l y m e r s m i p 是合成預(yù)定選擇性固定相的 新興技術(shù) 電色譜 c a p i l l a r ye l e e t r o e h r o m a t o g r a p h y c e c 是一種新型的高效微分 離技術(shù) 因此c e c 與m p 的結(jié)合是c e c 的高效率及m 的高選擇性集成 更 有助于充分發(fā)揮各自的特點(diǎn) 是當(dāng)前的前沿課題之一 本文的第一部分我們發(fā)展了新型的三元致孔劑 甲苯 異辛烷 d m s o 解 決了傳統(tǒng)的一元和二元致孔劑無(wú)法克服的極性分子溶解問(wèn)題 我們利用原位熱 引發(fā)聚合的方法 一步反應(yīng)合成了小佐匹克隆印跡毛細(xì)管涂層柱 在電色譜分 離模式下實(shí)現(xiàn)了佐匹克隆對(duì)映異構(gòu)體的分離 系統(tǒng)考察了合成條件以及電色譜 操作參數(shù)對(duì)分子識(shí)別和手性分離的影響 在優(yōu)化電色譜條件下 佐匹克隆外消 旋體達(dá)到了基線分離 最大分離度r s 5 3 9 d 佐匹克隆的最高柱效達(dá)到了2 1 4 0 0 p l a t c s m 本文的第二部分我們以 一萘普生為模板分子 一單體 2 甲基丙烯酰胺丙基 丙烯酸酯 為功能單體 偶氮二異丁腈 a i b n 為引發(fā)劑 利用原位熱引發(fā)聚合 進(jìn)行一單體分子印跡毛細(xì)管薄層的制備研究 所得的分子印跡毛細(xì)管用電色譜 模式考察其柱效及不同p h 值 不同進(jìn)樣濃度等色譜條件對(duì)手性分離效果的影響 并考察了各種電色譜操作參數(shù)對(duì)電滲流 e o f 的影響 在優(yōu)化電色譜條件下 萘普生外消旋體達(dá)到了基線分離 最大分離度r s 4 1 6 s 一萘普生的最高柱效 達(dá)到了1 3 7 0 0p l a t e s m 結(jié)果顯示 新型一單體分子印跡聚合物與傳統(tǒng)的二單體 分子印跡聚合物相比 不但有效的簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 并且證明一單體分子印跡 聚合物對(duì)印跡分子有更強(qiáng)的分子識(shí)別能力 是非常有前途的新型功能單體 關(guān)鍵詞 分子印跡 電色譜 涂層柱 一單體 a b s t ra c t m 0 1 e c u l a r l vi m p r i n t e dp o l y m e r m i p i san e wt e c h n i q u ef o rs y n t h e s i z i n gt h e s t a f f o n a r yp h a s e w i t ht h ea b i l i t yo fp r e d e t e r m i n e ds e l e c t i v i t y c 印i l l 叫 e l e c t r o c h r o m a t o 鯽h y c e c i sa n e ws e p a r a t i o nt e c h n i q u ew i t hh i g he f f i c i e n c y t h e c e c b a s e dm i pi s 也ec o m b i n a t i o no ft h eh i g he f f i c i e n c yo fc e ca n dt h e h i g h s e l e c t i v i t yo fm i p w h i c h i sap r o m i s i n gm e t h o d i n 也e 龜 s tp a r to ft h i sp a p e r i no r d e rt op r e p a r em i pc a p i l l a r yc o a t i n g sf o r ap o l a r t e m p l a t e an e wt e r n a r yp o r o g e nw a sd e v e l o p e d t o l u e n e i s o o c t a n e d m s o t h e d z o p i c l o n e i m p r i n t e dc o a t i n g s w a ss y n t h e s i z e db ya l l i n s i t ut h e r m o m a t c d p o l y i i l d z a t i o nm e t h o da n de v a l u a t e db yc e c t h es y n t h e s i sc o n d i t i o n sa n d t h ec e c s 印嬲吐0 np a r a m e t e r st h a ti n f l u e n c e dt h em o l e c u l a rr e c o g n i t i o n a n dc h i r a ls 印a r a t l o n w e r e 咖d i e ds y s t e m a t i c a l l y t h eb a s e l i n es e p a r a t i o n o fr a c e m i cz o p i e l o n ew a u s 0 b t a i n e d u n d e rt h e0 p t i m i z e dc o n d i t i o n s t h er sv a l u ew a s5 3 9 a n dt h ec o l u m n e f f i c i e n c yo f d z o p i e l o n ew a su p t o2 1 4 0 0p l a t e s m i np 撕t 7 舊 o n em o n o m e r 2 m e t h a e r y l a m i d o p o p y lm a t h a e r y l a t e m o l e c u l a r l y i m 研n t c dp o l y m e rc o a t i n g s w e r es y n t h e s i z e db y a l li n s i r et h e r m o i m t i8 眥 p o l 皿耐z a t i o nm e t h o d o nt h er e s u l t a n tm i p sc o a t i n g s t h ec o l u m ne 伍c l e n c y t h e v a l u eo fp ha n dt h es a m p l ec o n c e n t r a t i o nw o r ei n v e s t i g a t e d t h ee f f e c t s o fc e c p a r 鋤e 儲(chǔ)so ne o fw e r ea l s oi n v e s t i g a t e d t h eb a s e l i n e s e p a r a t i o n o fr a c e m l c n a p r o x e nw 嬲a c h i e v e d u n d e rt h eo p t i m i z e dc o n d i t i o n s t h er s v a l u ew a s4 16a n d m ec 0 l 啪ne 伍c i e n c yo f s n a p w a su pt o13 7 0 0p l a t e s m r e s u l t ss u g g e s t e dt h a t o n em o n o m e rm o l e c u l a d yi m p r i n t e dp o l y m e r c a l le f f e c t i v e l ys i m p l i f y t h e e p 甜m a 刪d e s i g n w i t hh i g h e l s e l e c t i v i t y a n dr e s o l u t i o nt h a n仃礎(chǔ)t i o n 甜 m o l e c u l a r l yi m p r i n t e dp o l y m e r k e y w o rd s m o l e c u l a r l yi m p r i n t e dp o l y m e r s m i p s c a p i l l a r yd e c t r o c h r o m a t o g r a p h y c e c c o a t i n g s o n em o n o m e r 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 目錄 中文摘要 i a b s t r a c t i i 符號(hào)說(shuō)明 v 前言 1日u 舌 l 研究現(xiàn)狀 成果 1 研究目的 方法 1 3 第一章d 一佐匹克隆印跡涂層柱的制備以及電色譜研究 1 5 1 1 試劑及儀器 1 5 1 2d 一佐匹克隆印跡涂層柱的制備和表征 1 6 1 2 1 毛細(xì)管的預(yù)處理 1 6 1 2 2d 一佐匹克隆印跡涂層柱的制備 1 6 1 3 結(jié)果與討論 1 8 1 3 1 致孔劑 1 9 1 3 2 預(yù)聚合混合物中模板濃度對(duì)手性分離的影響 3 0 1 3 3 單體交聯(lián)劑比例對(duì)手性分離的影響 3 4 1 3 4 毛細(xì)管印跡涂層中電滲流 e o f 的表征 3 7 1 4 小結(jié) 4 0 第二章一單體分子印跡涂層柱的制備以及表征 4 2 2 1 s 一萘普生分子印跡聚合物的制備 4 3 2 1 1 儀器與試劑 4 3 2 1 2 毛細(xì)管內(nèi)壁的預(yù)處理 4 4 2 1 3 一單體分子印跡涂層柱制備方案 4 4 2 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4 5 2 2 1 合成條件對(duì)印跡涂層柱制備的影響 4 5 2 2 2 電色譜條件對(duì)分子印跡效果的影響 4 9 2 2 3p h 值及分離電壓對(duì)電滲流的影響 5 5 2 2 4 一單體印跡電色譜涂層柱的柱效研究 5 9 2 3 討論 6 2 2 3 1p h 值對(duì)印跡識(shí)別效果的影響機(jī)理 6 2 i i i 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 3 2p h 對(duì)一單體聚合物電滲流的影響與m 從單體聚合物的對(duì)比 6 2 2 4 小結(jié) 6 3 結(jié)論 6 4 參考文獻(xiàn) 6 5 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明 7 3 綜述 7 4 分子印跡聚合物毛細(xì)管電色譜整體柱的研究進(jìn)展 7 4 綜述參考文獻(xiàn) 9 1 致謝 9 4 i v 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 m i p s c e c 正z o p 二 z o p r a c z o p e d m a m a a a i b n s e m d m s o 足 n a p s 忒a p r a c n 心 m p s 符號(hào)說(shuō)明 m o l e c u l a r l yi m p r i n t e dp o l y m e r s c a p i l l a r ye l e e t r o c h r o m a t o g r a p h y d z o p i c l o n e l z o p i e l o n e r a c z o p i e l o n e e t h y l e n eg l y c o ld i m e t h a c r y l a t e m e t h a c r y l i ea c i d 2 2 a z o b i s 2 一i s o b u t y r o n i t r i l e s c a ne l e c t r o nm i c r o s c o p e d i m e t h y ls u l p h o x i d e r n a p r o x e n s n a p r o x e n r a c n a p r o x e n y m e t h a c r y l o x y p r o p y l t r i m e t h o x y s i l a n e o m n i m i p so n em o n o m e rm o l e c u l a r l yi m p r i n t e d p o l y m e r s v 分子印跡聚合物 毛細(xì)管電相色譜 左旋佐匹克隆 右旋佐匹克隆 混旋佐匹克隆 二甲基丙烯酸乙二醇酯 甲基丙烯酸 偶氮二異丁腈 掃描電鏡 二甲基亞砜 右旋萘普生 左旋萘普生 外旋萘普生 產(chǎn)甲基丙烯酸氧丙基三甲 氧基硅烷 一單體分子印跡聚合物 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 研究現(xiàn)狀 成果 上 一 刖吾 毛細(xì)管電色譜的基本原理 毛細(xì)管電色譜 c a p i l l a r ye l e c t r o c h r o m a t p h y c e c 是近十幾年來(lái)綜合了高效 液相色譜 h i g hl i q u i dp e r f o r m a n c ec h r o m a t o g r a p h y h p l c 和毛細(xì)管電泳 c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s c e 的優(yōu)勢(shì)而發(fā)展起來(lái)的一種新型高效微分離技術(shù) 毛細(xì)管電色譜是在毛細(xì)管中填充或在毛細(xì)管壁涂布 鍵合色譜固定相 用高壓 直流電源 或輔加一定的壓力 代替高壓泵 即依靠電滲流 e o f 來(lái)推動(dòng)流動(dòng)相 使中性和帶電荷的樣品分子根據(jù)它們?cè)谏V固定相和流動(dòng)相間分配系數(shù)的不 同 和自身電泳淌度的差異而達(dá)到分離分析的一種電分離模式 毛細(xì)管電色譜 相對(duì)于常規(guī)的液相色譜而言 不僅克服了高效液相色譜中壓力流本身流速不均 勻引起的峰擴(kuò)展 而且柱內(nèi)無(wú)壓降 使得峰擴(kuò)展只與溶質(zhì)擴(kuò)散系數(shù)有關(guān) 因而 使毛細(xì)管電色譜的理論塔板數(shù)大幅高于高效液相色譜 能達(dá)到接近于毛細(xì)管電 泳的高理論塔板數(shù) 同時(shí)由于引入了高效液相色譜固定相 使毛細(xì)管電色譜具 備了其選擇性 使它不僅能分離帶電物質(zhì) 也能分離中性化合物 另外 毛細(xì) 管電色譜是微柱分離分析技術(shù) 很容易實(shí)現(xiàn)與其他分析技術(shù)的聯(lián)用 如c e c m s c e c i r 和c e c n m r 的聯(lián)用 因此 概括的說(shuō) c e c 具有以下優(yōu)點(diǎn) 1 高靈 敏度 高分辨率 高速度 2 所需樣品少 運(yùn)行成本低 3 應(yīng)用范圍廣 毛細(xì)管電色譜的發(fā)展 毛細(xì)管電色譜的發(fā)展可追溯到2 0 世紀(jì)5 0 年代 m u o l d 等將電場(chǎng)引入薄層色 譜系統(tǒng) 成功分離了膠棉中的多糖成分 l p r e t o r i u s 等將電場(chǎng)引入到h p l c 中 顯示了以電滲流作為流動(dòng)相的推動(dòng)力進(jìn)行分離的巨大優(yōu)勢(shì) 2 但由于采用的柱直 徑較大 未能將毛細(xì)管電色譜的優(yōu)越性充分發(fā)揮 j o g e n s o n 等發(fā)表了在毛細(xì)管電 泳史上具有里程碑意義的論文 在1 7 0 1 x m 內(nèi)徑的毛細(xì)管中填充1 0 1 a m 粒徑的 p a r t i s i lo d s 2 成功地分離了9 甲基葸等多環(huán)芳烴 獲得了3 1 0 0 0p l a t e sm 以的 柱效 第一次向世人展示了毛細(xì)管電色譜的巨大潛力 3 t s u d a 等采用3 0 p r o 內(nèi) 徑o d s 鍵合的開(kāi)管柱 在1 3 k v 電壓下成功分離了毛細(xì)管區(qū)帶電泳難以分離的 苯 萘 聯(lián)苯 葸等芳香化合物 4 隨后 m a r t i n 等研究了開(kāi)管柱電色譜的軸向 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 擴(kuò)展及峰展寬 從理論上證實(shí)了用電滲流推動(dòng)流動(dòng)相的優(yōu)越性 5 k n o x 等進(jìn)一 步研究了大量有關(guān)填充柱電色譜的理論問(wèn)題 弄清了填充柱電色譜中峰展寬的 影響因素 從理論和試驗(yàn)上證明了c e c 的分離效率明顯高于h p l c t f 丌 b a y e r 等首次實(shí)現(xiàn)了毛細(xì)管電色譜與核磁共振的聯(lián)用 8 閻超等研制了世界上第一臺(tái)專 用梯度加壓電色譜儀 c h e l a 等實(shí)現(xiàn)了毛細(xì)管電色譜與電感耦合等離子體 質(zhì)譜的 聯(lián)用 9 盡管毛細(xì)管電色譜的發(fā)展歷史并不很長(zhǎng) 但在理論 技術(shù)和應(yīng)用方面均 已取得長(zhǎng)足發(fā)展 毛細(xì)管電色譜柱 在c e c 系統(tǒng)中 最重要的組成部分是c e c 毛細(xì)管柱 根據(jù)固定相的存在形 式 c e c 毛細(xì)管柱可分為填充柱 開(kāi)管柱和整體柱三類 1 0 d 1 1 c e c 填充柱就是 在各種不同孔徑的毛細(xì)管內(nèi)填充高效液相色譜常用填料 并以此為分離基質(zhì) 用電滲流或電滲流結(jié)合壓力推動(dòng)流動(dòng)相 進(jìn)而實(shí)現(xiàn)樣品分離 目前最常用的填 料為多孔o(hù) d s 其粒徑為3 岬或5i t r n e l 2 開(kāi)管柱模式是用各種硅烷化試劑對(duì) 毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行修飾 形成一層硅烷化的涂層 分析物通過(guò)在涂層上的分配 用電滲流或電滲流與壓力一起驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相進(jìn)行分離 如果不加壓力驅(qū)動(dòng) 在普 通毛細(xì)管電泳儀上就可以進(jìn)行開(kāi)管柱毛細(xì)管電色譜操作 整體柱毛細(xì)管電色譜 是通過(guò)原位聚合在毛細(xì)管中形成連續(xù) 多孔的固定相的一種電色譜模式 1 3 1 該 柱模式不僅避免了填充柱中封口的制各 同時(shí)又可以克服開(kāi)管柱相比較小的不 足 因此 在近幾年頗為引人注目 毛細(xì)管電色譜的應(yīng)用 從目前文獻(xiàn)報(bào)道的情況看 毛細(xì)管電色譜的應(yīng)用研究主要圍繞以下幾個(gè)方 面 多環(huán)芳烴及藥物中間體的分離分析 氨基酸 肽 蛋白質(zhì) 核酸及相關(guān)化 合物等的分離分析 當(dāng)采用梯度洗脫技術(shù) 與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 新型檢測(cè)器以及 無(wú)孔o(hù) d s 快速分析等方法時(shí) 毛細(xì)管電色譜可成功地實(shí)現(xiàn)氨基酸分析 毛細(xì)管 電色譜還被應(yīng)用于手性對(duì)映體拆分 樣品富集和預(yù)濃縮等 例如 電色譜的手 性拆分主要有兩種模式 手性固定相一非手性流動(dòng)相和手性流動(dòng)相一非手性固定 相 目前常用的手性固定相有環(huán)糊精 分子印跡固定相 c h i r a s i l d e x 涂層或修 飾的固定相 奎寧修飾的固定相 大環(huán)抗生素固定相 聚丙烯酰胺和多糖衍生 的手性固定相 纖維素涂層 聚合物固定相和蛋白質(zhì) 常用的流動(dòng)相手性添加 2 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 劑有環(huán)糊精和奎寧氨基甲酸鹽等 除選擇適當(dāng)?shù)氖中怨潭ㄏ嗷蛱砑觿┩?各類 操作參數(shù) 如電壓 流動(dòng)相中有機(jī)相改性劑含量 電解質(zhì)濃度等都會(huì)對(duì)對(duì)映體 的分離度產(chǎn)生影響 此外 毛細(xì)管電色譜還在離子分析 染料分析 食品分析 中得到了應(yīng)用 柱效和分離度均達(dá)到令人滿意的效果 毛細(xì)管電色譜技術(shù)所存在的問(wèn)題及展望 盡管c e c 的研究與應(yīng)用飛速發(fā)展 但還存在著諸如氣泡產(chǎn)生 柱子易斷 檢測(cè)靈敏度低 填料種類有限等問(wèn)題 特別是在分離生物大分子樣品 如d n a 蛋白質(zhì)時(shí) 尚存在方法匱乏 重現(xiàn)性差等問(wèn)題 而這恰是c e h p l c 的優(yōu)勢(shì) 因此 預(yù)計(jì)在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi) 三種方法將呈互相補(bǔ)充及相互驗(yàn)證的關(guān)系 c e c 能否成為一種實(shí)用的分離分析技術(shù)主要取決于c e c 試驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展 目前來(lái)看 c e c 技術(shù)還有很大的改進(jìn)和發(fā)展空間 目前 隨著填充柱技術(shù) 聯(lián)用技術(shù) 梯 度洗脫技術(shù)等的發(fā)展和完善 毛細(xì)管電色譜研究已進(jìn)入實(shí)際分析應(yīng)用研究階段 分子印跡聚合物研究進(jìn)展 分子印跡技術(shù)是合成具有預(yù)定選擇性的固定相的新興技術(shù) 它將要分析的 目標(biāo)分子 印跡分子 作為模板 與功能單體 交聯(lián)劑 引發(fā)劑等混合 在一定 條件下發(fā)生聚合反應(yīng) 形成聚合物后再將印跡分子從中洗脫出來(lái) 制得分子印 跡聚合物 分子印跡聚合物是根據(jù)印跡分子定做的 它具有特殊的分子結(jié)構(gòu)和 官能團(tuán) 能選擇性的識(shí)別印跡分子 另外 它與天然的分子識(shí)別系統(tǒng)如酶與底 物 抗體與抗原 受體與激素相比 具有抗惡劣環(huán)境的能力 此外 它對(duì)印跡 分子的立體結(jié)構(gòu)具有 記憶 功能 當(dāng)印跡分子為d 一或三 構(gòu)型對(duì)映體時(shí) m m 便 具備了對(duì)預(yù)定對(duì)映體的選擇性 并可預(yù)示其洗出順序 這一特性是一般手性固 定相所不具備的 早在1 9 4 0 年 p a u l i n g 就提出了可利用抗原作為模板 來(lái)構(gòu)造抗體的空間結(jié) 合位點(diǎn)理論 1 9 4 9 年 d i c k e y 首次提出了 分子印跡 這一概念 但在很長(zhǎng)時(shí)間 并沒(méi)有引起人們的重視 直到1 9 7 2 年 德國(guó)的w u l f f 研究小組首先報(bào)道了人工 合成的有機(jī)分子印跡聚合物 這項(xiàng)技術(shù)才逐漸為人們所認(rèn)識(shí) 尤其是1 9 9 3 年 m o s b a c h 1 4 等在 n a t u r e 上發(fā)表有關(guān)茶堿分子的印跡聚合物的報(bào)道后 這一技 術(shù)開(kāi)始飛速發(fā)展起來(lái) 如今在制備方法 印跡機(jī)理及在各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用等方 面的研究都有了很大的進(jìn)展 每年公開(kāi)發(fā)表的論文幾乎呈直線上升 包括環(huán)境 3 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 o s 醫(yī)藥 1 6 1 食品分析 1 刀等 其具體應(yīng)用如圖1 1 8 所示 圖1 分子印跡聚合物的應(yīng)用示意圖 分子印跡聚合物的基本原理 分子印跡聚合物是指在模板分子存在下 功能單體和交聯(lián)劑在模板分子周 圍發(fā)生聚合反應(yīng) 印跡分子與一個(gè)或幾個(gè)功能單體復(fù)合 形成一種空間固定的 具有預(yù)定選擇性的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高度交聯(lián)的 交聯(lián)度通常高達(dá)8 0 以上 固 體聚合物 然后除去模板分子 其在形狀 大小和功能基團(tuán)上與模板分子相匹 配 對(duì)模板分子有永久記憶力 可以從混合物中與模板分子選擇性的重新結(jié)合 其合成過(guò)程一般分為三步 首先以具有適當(dāng)功能基團(tuán)的功能單體與模板分子相 結(jié)合 形成模板一單體復(fù)合物 然后加入交聯(lián)劑 在一定條件下經(jīng)引發(fā)劑引發(fā) 發(fā)生聚合反應(yīng) 形成高度交聯(lián)的聚合物 最后 通過(guò)一定的方法 如水解或者 溫和萃取 把模板分子洗脫下來(lái) 這樣便制得分子印跡聚合物 其制備過(guò)程如 圖2 1 9 所示 根據(jù)印跡分子與功能單體形成復(fù)合物時(shí)作用力性質(zhì)的不同 分子 印跡分為共價(jià)型和非共價(jià)型兩種 合成方法也可分為兩類 1 共價(jià)法又稱為預(yù)組織法 p r e o r g a n i z e da p p r o a c h 主要由w u l f f 等創(chuàng)立 模板分子與功能單體通過(guò)可逆的共價(jià)鍵 如形成可逆的酯 2 0 1 縮醛 酮 2 1 2 3 1 希 夫堿 2 4 2 s 金屬配合物 2 6 0 1 等 形成復(fù)合物 形成的復(fù)合物在交聯(lián)劑的作用下聚 4 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 合形成聚合物 它主要通過(guò)化學(xué)作用力 如水解等 斷開(kāi)共價(jià)鍵才能除去印跡 分子 目前該方法已被用于制備各種具有識(shí)別功能的聚合物 如糖類及其衍生 物 甘油酸及其衍生物 氨基酸及其衍生物 扁桃酸 芳香酮 二醛 三醛 鐵轉(zhuǎn)移蛋白 聯(lián)輔酶及甾醇類物質(zhì) 但是由于該方法難以尋找合適的功能單體 并且過(guò)程復(fù)雜 洗脫印跡分子也較困難 使得該方法缺乏普遍性 a 圖1 2 分子印跡聚合物的制備示意圖 2 非共價(jià)法又稱為自組織法 s e l f a s s e m b l ya p p r o a c h 該方法研究工作 的代表是瑞典的m o s b a c h e l 4 d 組 單體與模板分子之間是通過(guò)弱的相互作用力 如氫鍵 偶極 離子作用 金屬螯合 靜電作用 p p 作用 疏水作用 范德華 力等形成單體一模板復(fù)合物 而且是在聚合前在溶液中自發(fā)形成的 聚合反應(yīng) 完成后 用適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行溫和萃取 除去模板分子 此法已被用于下列物質(zhì) 印跡聚合物的制備中 染料 二胺 維生素 氨基酸衍生物 多肽 腎上腺素 功能藥物阻抑劑 茶堿 二氮雜苯 核苷酸堿基 非甾醇類抗感染藥萘普生和 芐胺等 由于非共價(jià)型印跡聚合技術(shù)具有較廣泛的目標(biāo)分子的范圍 分子間作 用力形 印跡技 的m 口則依據(jù)靜電引力 氫鍵作用等弱的作用力對(duì)物質(zhì)進(jìn)行識(shí)別 更接近天然 的分子識(shí)別系統(tǒng) 如酶與底物 但以共價(jià)方式制得的m p 穩(wěn)定性好 為了將兩 種方式的優(yōu)點(diǎn)全部結(jié)合起來(lái)加以利用 w h i t e c o m b e 3 l 等巧妙的將共價(jià)印跡與非 共價(jià)印跡兩種技術(shù)結(jié)合起來(lái) 用4 一乙烯基苯基碳酸酯作單體 首先通過(guò)共價(jià)作 用使印跡分子與單體形成碳酸酯的共價(jià)復(fù)合物 聚合反應(yīng)完成后 用堿水解除 去印跡分子 隨著羰基的水解 打開(kāi)了單體和印跡分子之間的共價(jià)鍵 此m m 上就產(chǎn)生了一個(gè)非共價(jià)型的分子識(shí)別位 識(shí)別位點(diǎn)上的酚羥基可以通過(guò)氫鍵進(jìn) 行分子識(shí)別 這一種印跡聚合物既具有了共價(jià)型m m 的穩(wěn)定性 也具有了非共 價(jià)型m 口的分子識(shí)別性能 分子印跡聚合物的制備 模板分子 模板分子也叫目標(biāo)分子 印跡分子或烙印分子 目前研究較多的印跡分子 有糖類 甘露糖 半乳糖 果糖 氨基酸及其衍生物 3 2 1 蛋白劇3 3 1 核苷酸及其 衍生物 嘌呤 嘧啶等生物堿 羧酸 二醛 膽固醇 維生素 酶 抗原 神 經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿 殺蟲(chóng)劑 除草劑 染料 藥物等 功能單體 共價(jià)型分子印跡中可選用的功能單體有限 目前常用的有硼酸 二醇 含 硼酸酯的硅烷混合物等 如4 乙烯基苯硼酸 4 乙烯基苯甲醛 4 乙烯基苯胺和 4 乙烯基苯酚等 非共價(jià)型印跡中常用的單體較多 如甲基丙烯酸 m a a 丙 烯酸 三氟甲基丙烯酸 t f m a a 甲基丙烯酸甲酯 m m a 甲基丙烯酸丁 酯 b m a 甲基丙烯酰胺 丙烯酰胺 1 一乙烯基咪唑 4 乙烯基吡啶 4 一v p y 2 乙烯基吡啶 2 v p y 和氨基甲酸乙酯等 最常用的單體是甲基丙烯酸 m a a m a a 主要通過(guò)羧基與印跡分子發(fā)生作用 可以與胺類發(fā)生離子作用 同酰胺和 羧基發(fā)生氫鍵作用 常用于極性較低的溶劑中 而t f m a a 有很強(qiáng)的吸電子效 應(yīng) 羧基酸性較強(qiáng) 有利于和堿性印跡分子形成離子作用復(fù)合物 2 v p y 4 v p y 因可以和底物中的羧基發(fā)生離子作用而受到重視 6 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 交聯(lián)劑 交聯(lián)劑的作用是使模板分子和功能單體形成高度交聯(lián)的剛性聚合物 固化 單體的功能基團(tuán)在模板分子周圍特定的位置上 目前應(yīng)用較多的交聯(lián)劑有二甲 基丙烯酸乙二醇酯 e d m a 三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯 t r j m 季戊四 醇三丙烯酸酯 p e t i 認(rèn) 季戊四醇四丙烯酸酯 p e t e a n n 一亞甲基雙 丙烯酰胺 二乙烯基苯 d v b 等 因?yàn)檫@些交聯(lián)劑穩(wěn)定性好 容易除去 有 高選擇性而被廣泛應(yīng)用 它們?cè)谟袡C(jī)溶劑和親水溶劑中均可使用 并按照 e d m a t r i m p e t r a p e t e a 的順序 對(duì)映異構(gòu)體的分離能力下降 e d m a 有較強(qiáng)的對(duì)映異構(gòu)體選擇性 矧 以e d m a 為交聯(lián)劑時(shí) 模板與功能單體及交聯(lián) 劑的比例為l 4 2 0 時(shí) 可達(dá)到最佳識(shí)別分離效剁3 5 1 以t r i m 為交聯(lián)劑時(shí) 模 板與功能單體及交聯(lián)劑的比例為1 4 1 6 時(shí) 可達(dá)最佳識(shí)別分離效果 3 6 1 色譜研 究表明 選用p e t r a 和t r i m 作交聯(lián)劑制備的m 印跡分子氨基酸衍生物和 肽的柱容量及選擇性優(yōu)于e d m a 3 6 致孔劑 致孔劑的選擇在分子印跡手性整體柱的制備中尤為重要 選擇的致孔劑要 滿足以下三個(gè)要求 1 能溶解模板分子和功能單體 2 能形成大的流通孔 從而保證流動(dòng)相能在較低的壓力下流過(guò)色譜柱 3 對(duì)模板分子和功能單體之 間的相互作用干擾小 一般情況下 在與致孔劑一致的溶劑中合成的m 口具有 最佳的選擇性 因?yàn)榫酆蠒r(shí)致孔劑有可能影響模板與單體之間的相互作用 常 用的致孔劑有乙腈 氯仿 異辛烷 甲苯等 也有一些極性溶劑如四氫呋喃 t h f 甲醇 環(huán)己醇 1 一十二醇等 但極性溶劑對(duì)非共價(jià)印跡不利 聚合方法 常用的聚合方法為自由基引發(fā)聚合 常用的引發(fā)劑為偶氮二異丁腈 a i b n 也可用偶氮二異庚腈 a i h n 引發(fā)形式有高溫?zé)嵋l(fā)聚合和低溫光引發(fā)聚合 兩種形式 熱引發(fā)聚合一般在高溫下 3 5 8 0 進(jìn)行 形成一種較密的聚 合物 而光引發(fā)聚合則在低溫下 2 0 4 進(jìn)行紫外光 3 5 0n m 3 6 6a m 范圍內(nèi)照射下引發(fā) s h a n n e s y 3 9 等認(rèn)為低溫光引發(fā)具有下述特點(diǎn) 1 一般光引 發(fā)所得印跡聚合物有更高的印跡能力 定印跡分子與單體可形成的穩(wěn)定的聚合 物 2 它可對(duì)熱不穩(wěn)定的化合物進(jìn)行印跡 3 并可以改變聚合物的物理性 7 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 質(zhì)以獲得更好的選擇性 因此 低溫光引發(fā)獲得了更廣泛的應(yīng)用 一般情況下 光聚合的m p 的分離因子高于熱引發(fā)聚合的 這與熱聚合方式下聚合速度快且 受熱不均勻 模板分子與單體形成的配合物不穩(wěn)定 造成印跡孔穴有所失真有 關(guān) 對(duì)于那些易熱分解的物質(zhì) 光聚合的方式更為合適 另外 也可利用弘輻射 聚合的方式 如利用少射線引發(fā)制備了以薄荷醇為模板分子的m i p 1 6 1 該方法 的優(yōu)點(diǎn)是不需要使用引發(fā)劑 并且可在適當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行聚合反應(yīng) 制備方式 分子印跡聚合物的制備方法主要有 1 本體聚合法 b u l kp o l y m e r i z a t i o n 4 0 4 1 1 在分子印跡技術(shù)發(fā)展之初 大多數(shù)m 口采用這種本體聚合法 其優(yōu)點(diǎn)在于其對(duì)印跡分子具有良好的選擇性 和識(shí)別性 而且合成操作條件易于控制 實(shí)驗(yàn)裝置簡(jiǎn)單 便于普及 迄今仍為 m p 的主要制備方法 但此法制備的聚合物 必須經(jīng)過(guò)研磨 篩分等處理 因 此 該方法不但操作手續(xù)繁瑣 而且損失嚴(yán)重 一般只有5 0 的收率 且其不 規(guī)則的形狀還會(huì)影響色譜分離的效果 使柱效降低 2 另外又發(fā)展了球形聚合物的制備方法 主要有四種 即懸浮聚合法 s u s p e n s i o np o l y m e r i z a t i o n 4 2 多步溶脹法 m u l t i s t e ps w e l l i n gp o l y m e r i z a t i o n 4 3 4 6 1 沉淀聚合法 p r e c i p i t a t i o np o l y m e r i z a t i o n 4 3 和表面印跡聚合法 s u r f a c e i m p r i n t i n gp o l y m e r i z a t i o n 4 4 采用這幾種方法制得的m i p 球形聚合 物 主要用作柱色譜和毛細(xì)管色譜固定相的填充材料以及免疫分析的吸附材料 3 最近又發(fā)展了一種新的聚合方法 原位聚合法 i n s i t up o l y m e r i z a t i o n 4 5 刪 1 9 9 3 年 m a t s u i 4 7 1 等首先將原位聚合法引入m i p 的制備中 在色譜柱的 管內(nèi)直接合成m p 固定相 原位聚合是將印跡分子 功能單體 交聯(lián)劑和致孔 劑放在某些容器 如不銹鋼管 毛細(xì)管 p e e k 管 中或固體表面上直接聚合的 方法 該方法所得聚合物不需研磨 篩分等手續(xù) 可直接用于分析 該方法具 有直接 簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn) 分子印跡技術(shù)在毛細(xì)管電色譜手性分離中的應(yīng)用 實(shí)驗(yàn)證明分子印跡聚合物對(duì)印跡分子有顯著的選擇性 并且m i p s 具有低成 本 良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性的優(yōu)勢(shì) 近年來(lái) m i p s 被廣泛的應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域 例如 酶催化 4 8 1 生物傳感器 4 9 1 生物抗體剛 固定相提取 5 1 1 藥物載體圈和色譜 8 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 5 3 m i p s 的這些優(yōu)勢(shì)促使其廣泛的被用于手性分離的固定相 5 4 5 5 尤其是在 h p l c 中應(yīng)用較多 與傳統(tǒng)的手性固定相相比 m i p s 有更高的對(duì)映異構(gòu)體分離 能力和預(yù)選擇性 5 7 然而 印跡分子在色譜應(yīng)用中存在嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象 并且 其柱效也比較低 這使m i p s 的應(yīng)用收到了很大限制 鑒于c e c 的優(yōu)點(diǎn) 近年 來(lái) 研究者把更多的精力放在了把m i p 應(yīng)用于c e c 5 6 5 刀的研究上來(lái) 而之前人 們關(guān)注的是如何將m 口應(yīng)用到液相色譜中 5 8 5 9 在過(guò)去的1 0 年中 大量關(guān)于c e c 的研究顯示 這種技術(shù)作為分析分離的手 段具有良好的發(fā)展前景 c e c 被認(rèn)為結(jié)合了c e 的高分離效率和h p l c 的高度 選擇性兩者的優(yōu)點(diǎn) 許多研究表明 基于c e c 的m i p s 比基于h p l c 的m i p s 有更高的效率 除此之外 鑒于c e c 具有低消耗的特點(diǎn) 當(dāng)印跡分子比較昂貴 時(shí) 使用這種方法只需要消耗極少量的模板分子或單體 m i p c e c 固定相類型 對(duì)m 口 c e c 的應(yīng)用提出的第一個(gè)要求是 要有適用于分子印跡技術(shù)的毛細(xì) 管形式 這并不是一項(xiàng)簡(jiǎn)單的任務(wù) 我們不能直接將應(yīng)用于h p l c 中的m i p s 作 為毛細(xì)管電色譜的固定相 在毛細(xì)管柱的應(yīng)用中尚存在一些問(wèn)題 比如如何將 不規(guī)則的m p 粒子填充到毛細(xì)管中 另外毛細(xì)管材質(zhì)本身帶來(lái)的一些問(wèn)題 如 毛細(xì)管比較脆弱 易產(chǎn)生氣泡等 這些都是c e c 中常見(jiàn)的問(wèn)題 然而 近期一 系列的報(bào)道說(shuō)明 人們?cè)诳朔@些困難的過(guò)程中取得了重大進(jìn)步 對(duì)c e c 來(lái)說(shuō) 有以下幾種不同的m i p 形式 1 填充柱 2 作為流動(dòng)相顆粒添加劑 3 m i p 整體柱和 4 m i p 涂層柱 填充毛細(xì)管柱 l i n 等唧 采用傳統(tǒng)方法制備印跡聚合物 經(jīng)過(guò)研磨和篩分后 得到m i p 粒 子 隨后通過(guò)勻漿法將m p 粒子填充進(jìn)毛細(xì)管中 并用聚丙烯酰胺凝膠塞確保 固定相不流失 這種方法最大的局限性在于需要柱塞 尤其是使用聚丙烯酰胺 凝膠可能為以后的分析帶來(lái)不確定的干擾 另外 m i p s 粒子外形的不規(guī)則性以 及在粉碎 篩分過(guò)程中造成的尺寸不均勻進(jìn)一步降低了整個(gè)系統(tǒng)的效率 吸附m 口色譜柱是通過(guò)固定劑將m p 微粒固定在毛細(xì)管內(nèi)或者在毛細(xì)管內(nèi) 形成聚合物網(wǎng)絡(luò) 從而避免了制作 使用柱塞 6 1 1 這種方法最明顯的優(yōu)點(diǎn)是消 除了柱塞存在的必要性 9 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 作為流動(dòng)相顆粒添加劑 對(duì)基于m 口的c e c 分離來(lái)說(shuō) 將m p 作為流動(dòng)相添加劑是一種可行的方 案 這種方案最吸引人的特點(diǎn)是擺脫了極其耗時(shí)的毛細(xì)管填充過(guò)程 并且不需 要柱塞 具體方法是 m 口粒子被添加到電解液中 m p 粒子一電解液混合物被 填充到了開(kāi)管毛細(xì)管中并得到了一種基本穩(wěn)定的相 因此為了得到穩(wěn)定的混懸 液 m m 粒子的量就非常關(guān)鍵 在電解液中加入過(guò)多的m 口粒子會(huì)導(dǎo)致沉降的 發(fā)生 而這種情況很可能使實(shí)際引入毛細(xì)管中的m 口粒子的量發(fā)生變化甚至可 能使毛細(xì)管發(fā)生堵塞 另外 這種填充方法降低了分析的靈敏度并且限制了聚 合物可以使用的濃度 為了得到一個(gè)m 口粒子在高濃度溶液中仍然穩(wěn)定懸浮的 系統(tǒng) 通過(guò)沉淀聚合法合成了納米級(jí)的m i p 粒子 6 2 捌1 圖3 圖4 口畔圈一 婦 嘁 圖3 粒子填充技術(shù)方案 其中納米級(jí)m i p 粒子作為添加劑 a 注入納米m i p 粒子塞 b 進(jìn)樣 c 當(dāng)電壓穩(wěn)定后 m i p 納米粒子 不發(fā)生改變 m i p 納米粒子向陽(yáng)極移動(dòng) 被分析物 相對(duì)發(fā)生變化 向陰極移動(dòng) e o f 也向陰極移動(dòng) d 被 分析物流過(guò)納米粒子塞并被分離 e 被分析物先于m i p 塞到達(dá)檢測(cè)器 1 0 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 毒 耋 圖4 微乳聚合制備m i p 納米粒子的c e c 分析 a r a c 一心得安 b s 一心得安的印跡效果和識(shí)別峰 納米粒子水溶液 1 0m g m l 在o 5p s i 下進(jìn)樣1 0s 樣品在6k v 電壓下進(jìn)樣38 磷酸鹽電解液佗o v v 乙腈 p h7 0 分離電 壓1 6k v 柱溫3 0o c 整體柱 顧名思意 整體柱是柱中連續(xù)的 多孔的柱狀固定相 不像其他方法 這 種柱子的固定相是在毛細(xì)管中的原位進(jìn)行聚合的 這樣就避免了費(fèi)力的填充過(guò) 程和塞子的制備 同樣也省略了后來(lái)的粉碎和篩分的步驟 該技術(shù)優(yōu)點(diǎn)如下 一 該柱制備方法簡(jiǎn)單 只需將單體 交聯(lián)劑 致孔劑和引發(fā)劑等混合物裝入 空色譜柱內(nèi) 聚合完成后即可 二 由于可在聚合時(shí)引入各種所需的作用基團(tuán) 因而制備具有靈活性 三 與常規(guī)裝填的色譜柱相比 整體色譜柱最大的特點(diǎn) 是具有良好的多孔性和滲透性 具有灌注色譜的特點(diǎn) 整體柱中既有流動(dòng)相的 流通孔 接近1 9 r a 又有便于溶質(zhì)進(jìn)行傳質(zhì)的中孔 幾十個(gè)納米 而且柱中的 微孔已經(jīng)短到不對(duì)傳質(zhì)構(gòu)成明顯的阻力 流通孔內(nèi)的線速度正比于柱子中流動(dòng) 相的速度 這種結(jié)構(gòu)可使分子在其內(nèi)的傳質(zhì) 由通常的較慢的擴(kuò)散傳質(zhì) 變成 較快的對(duì)流傳質(zhì) 因此 整體柱技術(shù)與分子印跡相結(jié)合 可改善m i p 的慢傳質(zhì) 問(wèn)題 n i l s s o n 等人 6 5 首先報(bào)道了用于c e c 的m i p s 原位整體柱 盡管得到的整體 柱上r a c 苯丙氨酸苯胺高達(dá)1 5 0 0 0 0p l a t e s m 但無(wú)法對(duì)r a c 一苯丙氨酸實(shí)現(xiàn)對(duì)映異 構(gòu)體拆分 這可能是由于像環(huán)己醇和1 十二醇這樣的極性溶劑導(dǎo)致的 因?yàn)檫@ 寒蠢耋 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 些溶劑會(huì)干擾模板分子和單體之間的氫鍵 l i n 及其合作者 6 6 6 7 通過(guò)使用亞硫酰 氯和格氏試劑處理過(guò)的乙烯基化的毛細(xì)管 并用這種毛細(xì)管制備了以卜苯丙氨 酸苯胺為模板的m i p c e c 柱 但這種整體柱仍然有柱效低 阻力大的缺點(diǎn) 因 此 要逐步增加電場(chǎng)進(jìn)行電泳使電解液逐漸替換掉聚合液 這種柱在電色譜操 作中一旦形成氣泡 那么將無(wú)法進(jìn)行再生 因此這種方案在實(shí)際中很難應(yīng)用 最成功的印跡電色譜整體柱是由s c h w e i t z 等人嘟 發(fā)展的 該柱有大的貫通 孔 因此允許在低壓下進(jìn)行沖洗 柱子的再生以及反應(yīng)液和電解液之間的交換 更加容易 可有效地進(jìn)行對(duì)映異構(gòu)體的手性分離 分離度分別為r s 1 2 6 和 1 1 7 并且能進(jìn)行外消旋化合物的定量分析 該法的成功吸引了很多研究者 目前印跡電色譜整體柱主要是在這種方法的基礎(chǔ)上不斷發(fā)展的 涂層柱 這種m 口柱是以原位合成方式在毛細(xì)管內(nèi)壁上共價(jià)鍵結(jié)合一薄層m i p 6 0 6 1 l 這一方式的優(yōu)點(diǎn)是毛細(xì)管柱的制備比較簡(jiǎn)單 具有較高的柱效 但同時(shí)也存在 樣品容量較低的缺點(diǎn) 由此給檢測(cè)帶來(lái)一定的困難 另外 采用的毛細(xì)管柱 1 9 0 c m 較長(zhǎng) 又由于通過(guò)內(nèi)表面涂層引起e o f 的損失 而使遷移時(shí)間增長(zhǎng) 優(yōu)點(diǎn)是 由于柱內(nèi)沒(méi)有阻力 因此容易再生 不易堵塞 也無(wú)需擔(dān)心c e c 運(yùn)行中的氣泡 問(wèn)題 第一個(gè)做這方面工作的是b r f i g g e r m a n n 等人 6 9 他們通過(guò)共價(jià)鍵將m i p 涂布在經(jīng)過(guò)甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷處理過(guò)內(nèi)表面的毛細(xì)管中 在6 5 下反應(yīng)4 8h 熱引發(fā)聚合制備得到了1 0 0 阻涂層毛細(xì)管柱 通過(guò)調(diào)整交聯(lián)劑和 制孔劑的濃度等聚合條件 可以控制m m 涂層的厚度 t a n 等人 7 0 摸索出了另 一種在2 5 岬毛細(xì)管中合成m 口涂層的方法 在處理過(guò)毛細(xì)管內(nèi)表面后 將預(yù) 聚合混合物填充在毛細(xì)管內(nèi) 在7 5 下進(jìn)行聚合反應(yīng) 然后將毛細(xì)管的一端連 接在一個(gè)真空泵上 使未反應(yīng)的反應(yīng)物抽出 使反應(yīng)的聚合物成為薄膜 使用 這種方法制備的柱子 可以成功分離丹磺酰苯基丙氨酸的對(duì)映異構(gòu)體 s c h w e i t z 等 7 l 近來(lái)報(bào)道了一種利用接枝的方法制備涂層m 口 該方法先將毛細(xì)管內(nèi)壁衍 生化 室溫下在緩沖液中使引發(fā)劑與內(nèi)壁衍生化試劑共價(jià)結(jié)合 含孓萘心胺的 單體溶液通入毛細(xì)管 光引發(fā)聚合3h 后 即可在電泳儀上沖洗使用 該法制備 簡(jiǎn)單 可用以進(jìn)行迅速的m p 篩分 他們發(fā)現(xiàn)分別用三種不同的溶劑甲苯 二 氯甲烷和乙腈 生成的聚合物膜的形態(tài)和表面都有很明顯的區(qū)別 手性識(shí)別能 1 2 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 力差別較大 見(jiàn)圖5 圖5 用不同溶劑制備的m 口涂層分離r a c j 凸得安 a 甲苯 a 氯甲烷 c 乙腈 毛細(xì)管直徑5 0 岫 長(zhǎng)3 5c m 有效長(zhǎng)度2 6 5c m 分離 1 5k v 溫度 6 0 分離順序 一i 得安 俾 心得安 c e c 操作電壓1 5k v 壓力1 2b a r 電解液組成為乙腈 乙酸鹽 p h 3 0 2 m 8 0 2 0 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)2 1 5n n l 研究目的 方法 電色譜作為一種新型高效的微分離技術(shù) 具有非常美好的發(fā)展前景 電色 譜核心部件是色譜柱的問(wèn)題 毛細(xì)管涂層柱由于制備簡(jiǎn)易 堅(jiān)固耐用不易損壞 理論塔板數(shù)高 不容易產(chǎn)生氣泡和易再生的特點(diǎn) 使其成為非常有前途的新型 色譜固定相 分子印跡是合成具有預(yù)選擇性固定相的新興技術(shù) 它對(duì)于研究酶的結(jié)構(gòu) 認(rèn)識(shí)受體 抗體作用機(jī)理及在分析化學(xué)等方面有重要的意義 該技術(shù)用于色譜固 定相可進(jìn)行手性分離 但其色譜行為較差 峰展寬和拖尾現(xiàn)象較嚴(yán)重 主要因 為h p l c m i p 的柱效太低的緣故 這不僅導(dǎo)致較長(zhǎng)的分離時(shí)間 而且也給定性 和定量分析帶來(lái)了困難 電色譜具有比h p l c 更高的效率 因此c e c 與m p 的 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)合是c e c 的高效率及m m 的高選擇性集成 更有助于充分發(fā)揮各自的特點(diǎn) 是當(dāng)前的前沿課題之一 c e c m 口的研究正處在發(fā)展階段 尚缺乏系統(tǒng)深入的研究 與其他成熟的 分離手段相比 其類型尚不夠豐富 還不能滿足實(shí)際工作中分離復(fù)雜體系的需 要 因此 結(jié)合國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 本課題在該方向進(jìn)行了以下兩方 面的研究工作 一 利用原位熱引發(fā)聚合的方法 一步反應(yīng)合成了正佐匹克隆印跡涂層柱 在毛細(xì)管電色譜分離模式下 系統(tǒng)考察了合成條件以及電色譜操作參數(shù)對(duì)分子 識(shí)別和手性分離的影響 實(shí)驗(yàn)中我們考察了一種由傳統(tǒng)甲苯 異辛烷體系改良而 來(lái)的新致孔劑體系 甲苯 異辛烷 二甲基亞砜 較好的解決了極性分子難溶與 傳統(tǒng)致孔劑體系的問(wèn)題 并考察了這種新的致孔劑體系對(duì)分子印跡聚合物手性 識(shí)別能力的影響 另外我們初步考察了功能單體與印跡分子的比例 反應(yīng)時(shí)間 溶劑類型等對(duì)手性分離的影響 并系統(tǒng)考察了各種電色譜條件 如p h 值 乙腈 含量 鹽濃度 電壓及溫度等因素對(duì)分子識(shí)別和手性分離度的影響 在優(yōu)化的 電色譜條件下 實(shí)現(xiàn)了佐匹克隆對(duì)映異構(gòu)體的基線分離 r s 5 3 9 印跡分子的 柱效可達(dá)到2 1 4 0 0p l a t e s m 二 以具有交聯(lián)劑功能的新型單體一單體為基礎(chǔ) 在毛細(xì)管內(nèi)采用原位熱 引發(fā)方式 探索了一單體 兩 萘普生印跡涂層柱的合成條件 并以電色譜模式表 征其手性分離性能 與以前的m a a e d m a 二單體印跡體系比較發(fā)現(xiàn) 兩種體 系的電滲流產(chǎn)生機(jī)制以及電色譜條件對(duì)于兩種體系的影響并不完全相同 新型 一單體涂層柱的分離時(shí)間與m a a e d m a 二單體體系相當(dāng) 但選擇性提高 分 離度也從過(guò)去的1 5 增加到5 6 6 而且還簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)工作 顯示了一單體 涂層柱的優(yōu)越性 1 4 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文一 薩佐匹克隆印跡涂層柱的制備以及電色譜研究 一 d 一佐匹克隆印跡涂層柱的制備以及電色譜研究 分子印跡電色譜涂層柱由于其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn) 是當(dāng)前電色譜研究的前沿課題 之一 m 口涂層柱是以