GB-T5009.124-2003食品中氨基酸的測定.pdf

I C S 6 7 . 0 4 0C 5 3中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準GB / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 3 代替 （ T B / T 1 4 9 6 5 - 1 9 9 4食品中氨基酸的測定De t e r mi n a t i o n o f a mi n o a c i d s i n f o o d s2 0 0 3 - 0 8 - 1 1 發(fā)布2 0 0 4 - 0 1 - 0 1實施中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部，中 國 國 家 標 準 化 管 理 委 員 會 免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標準最全面免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 3日 j J JM I1青本標準代替 G B / T 1 4 9 6 5 -1 9 9 4 食物中氨基酸的測定方法 。本標準與 G B / T 1 4 9 6 5 -1 9 9 4 相比主要修改如下 ：修改了標準的中文名稱 ， 標準中文名稱改為 食品中氨基酸的測定 ； 一 按 G B / T 2 0 0 0 1 . 4 -2 0 0 1 標準編寫規(guī)則第 4部分； 化學(xué)分析方法 對原標準的結(jié)構(gòu)進行 了修改。本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出并歸口。本標準起草單位 ： 中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院營養(yǎng) 與 食品衛(wèi)生研究所。本標準主要起草人 ： 賈健斌 、 趙熙和。原標準于 1 9 9 4 年首次發(fā)布， 本次為第一次修汀。標準下載網(wǎng)()免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標準最全面免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 - 2 0 0 3食品中氨基酸的測定范圍 本標準規(guī)定 了用氨基酸自動分析儀測定食物中氨基酸的方法。 本標準適用于食品中的天冬氨酸、 蘇氨酸、 絲氨酸、 谷氨酸、 脯氨酸、 甘氨酸、 丙氨酸、 擷氨酸、 蛋氨酸、 異亮氨酸、 亮氨酸、 酪氨酸、 苯丙氨酸、 組氨酸、 賴氨酸和精氨酸等十六種氨基酸的測定 。其最低檢出限為1 0 p m o l o 本標準不適用于蛋白質(zhì)含量低的水果、 蔬菜、 飲料和淀粉類食品中氨基酸測定。2原理 食品中的蛋 白 質(zhì)經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸， 經(jīng)氨基酸分析儀的離子交換柱分離后 ， 與荀三酮溶液產(chǎn)生顏色反應(yīng) ， 再通過分光光度計比色測定氨基酸含量。3 試劑3 . 1 濃鹽酸 ： 優(yōu)級純。3 . 2 6 m o l / I鹽酸： 濃鹽酸與水 1 -x - 1 混合。3 . 3 苯酚： 須重蒸餾。3 . 4 C 0 . 0 0 2 5 m o l / 1 - ） 混合氨基酸標準液（ 儀器制造公司出售） 。3 . 5 緩沖液3 . 5 . 1 p H 2 . 2 的檸檬酸鈉緩沖液： 稱取 1 9 . 6 g檸檬酸鈉（ N a , C 6 H 5 0 , 2H,0） 和 1 6 . 5 m l濃鹽酸加水稀釋到 1 0 0 0 ml ， 用濃鹽酸或 5 0 0 g 工 J 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) p H至 2 . 23 . 5 . 2 p H 3 . 3 的檸檬酸鈉緩沖液： 稱取 1 9 . 6 g 檸檬酸鈉和 1 2 m L濃鹽酸加水稀釋到 1 0 0 0 m l ， 用濃鹽酸或 5 0 0 g / l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) p H至 3 . 3 03 . 5 . 3 p H 4 . 。 的檸檬酸鈉緩沖液： 稱取 1 9 . 6 g 檸檬酸鈉和 9 m l , 濃鹽酸加水稀釋到 1 0 0 0 m l ， 用濃鹽酸或 5 0 0 g / l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) p H至 4 . 0 03 . 5 . 4 p H 3 . 3的檸檬酸鈉緩 沖液 ： 稱取 1 9 . 6 g檸檬 酸鈉 和 4 6 . 8 g氯化鈉 （ 優(yōu)級純） 加水稀釋到1 0 0 0 m l ， 用濃鹽酸或 5 0 0 g / l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) p H至 6 . 4 03 . 6 荀三酮溶液3 . 6 . 1 p H 5 . 2 的乙酸銼溶液： 稱取氫氧化鏗( L i O H H 2 0) 1 6 8 g ， 加入冰乙酸（ 優(yōu)級純） 2 7 9 m l ， 加水稀釋到 1 0 0 0 m l ， 用濃鹽酸或 5 0 0 g / l , 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) p H至 5 . 2 ,3 . 6 . 2 布置酮溶液 ； 取 1 5 0 m l 一 二甲基亞礬 ( C L H , O S ) 和乙酸銼溶液 5 0 m L加人 4 g水合茍三酮C C B H A 0 , H , U ） 和 0 . 1 2 g 還原茍三酮( C a Hio C ) s 2 H 2 0 ） 攪拌至完全溶解。3 . 7 高純氮氣： 純度 9 9 . 9 9 o3 . 8 冷凍劑： 市售食鹽 與 冰按 1 +3 混合。4 儀器和設(shè)備4 . 24 . 34 . 4真空泵 。恒溫干燥箱。水解管： 耐壓螺蓋玻璃管或硬質(zhì)玻璃管 ， 體積 2 0 mL -3 0 m L 。用去離子水沖洗干凈并烘干。真空干燥器（ 溫度可調(diào)節(jié)） 。標準下載網(wǎng)()免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標準最全面免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B / T 5 0 0 9 . 1 2 4 -2 0 0 34 . 5 氨基酸自動分析儀5 試樣 處理 試樣采集后用勻漿機打成勻漿（ 或者將試樣盡量粉碎、 于低溫冰箱中冷凍保存 ， 分析用時將其解凍后使用 。6 分析步驟6 . 1 稱樣 準確稱取一定量均勻性好的試樣如奶粉等， 精確到0 . 0 0 0 1 g , （ 使試樣蛋白質(zhì)含量在 1 0 mg -2 0 m g 范圍內(nèi)） ； 均勻性差的試樣如鮮肉等， 為減少誤差可適當增大稱樣量， 測定前再稀釋。將稱好的試樣放于水解管中6 . 2 水解 在水解管內(nèi)加 6 m o l / l鹽酸 1 0 r r ii . -1 5 ml （ 視試樣蛋自質(zhì)含量而定） ， 含水量高的試樣（ 如牛奶）可加入等體積的濃鹽酸， 加人新蒸餾的苯酚 3 滴-4 滴 ， 再將水解管放人冷凍劑中， 冷凍 3 m i n -5 m i n ,再接到真空泵的抽氣管h， 抽真空（ 接近 0 P a ) ， 然后充人高純氮氣； 再抽真空充氮氣， 重復(fù)二次后， 在充氮氣狀態(tài)下封 口或擰緊螺絲蓋將已封 口的水解管放在 1 1 0 0C + 1 的恒溫千燥箱內(nèi)， 水解 2 2 h 后， 取出冷卻 士 1 開水解管， 將水解液過濾后 用去離子水多次沖洗水解管， 將水解液全部轉(zhuǎn)移到 5 0 n i l - 容量瓶內(nèi)用去離了水定容。吸取濾液 】n i l于 5 m l 、 容量瓶內(nèi)， 用真空十燥器在 4 0 0C一 5 0 干燥 ， 殘 留物用1 m - 2 ml . 水濟解， 再干燥， 反復(fù)進行兩次， 最后蒸千， 用 1 m L p H 2 . 2 的緩沖液溶解， 供儀器測定用。7測 定 準確吸取 。2 0 0 m l - 混合氨蒸酸標準 用 p H 2 . 2的緩沖液稀釋到 5 r n l. ， 此標準稀釋液濃度為5 . 0 0 n m o l, 5 0 v 1 ， 作為上機測定用的氨基酸標準， 用氨基酸 自動分析儀以外標法測定試樣測定液的氨基酸 含星。8 結(jié)果計算按下式 計算 ：X 二乙 X 矗 X 廠 X V 只 M,),n X 1 0 1X 1 0 0 式 中 ： X F 一 V M 7 ） 2 15 01 0 , 一試樣氨基酸的含量， 單位為克每百克（ x / 1 0 0 9 ） ；試樣測定液中氨基酸含量， 單位為納摩爾每5 0 微升（( n m o l / 5 0 川） ；試樣稀釋倍數(shù) ：水解后試樣定容體積， 單位為毫升（ m I ） ；氨笨酸分一 子 一R：試樣質(zhì)V : 1 單位為克（ 9 ） ；折算成杯毫升試樣測定的氨基酸含量， 單位為 微座爾侮升（ fa m o l / I ） ：將試樣含址山納克（( r 1 目折辭成克（ 9 、 的系數(shù)。 f 一 六種氨基酸分 了量 ： 天冬氨酸. 1 3 3 . 1 ; 蘇氮酸: 1 1 9 . 1絲氨酸. i 0 5 . 1 ； 谷氨酸： 1 4 7 . 1 ; 脯氨酸：1 1 5 . 1 ； 甘氨酸: 7 5 . 1 ； 丙氨酸: 8 9 . 1 ； 擷氨酸： 1 1 7 . 2 ； 蛋氨酸： 1 4 9 . 2 ; 異亮氨酸： 1 3 1 . 2 ； 亮氨酸： 1 3 1 . 2 ； 酪氨酸: 1 8 1 . 2 ； 苯丙氨酸： 1 6 5 . 2 : 組氨酸: 1 5 5 . 2 ； 賴氨酸： 1 4 6 . 2 : 精氨酸： 1 7 4 . 2 0標準下載網(wǎng)()免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標準最全面免費標準網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載 計算結(jié)果表示為： 試樣氨基酸含A以 卜 保 留 丁價 右 扮 數(shù) 字 。去 一d卜尸、，八入 、 ，一廣r t成 ， ，一，J漁 ，、1，尹日 島 戶2咬】子， 一1、八了 ，g精存 甭 復(fù) 什 務(wù) 件 下 芬 很 的 兩 沖 種 方 測 寧 結(jié) 集 的維 對 善 佰 不 得 韶 討算 術(shù) 平 均 值 的舊