人感染H7N9禽流感病毒培訓ppt課件.ppt

人感染H7N9禽流感 實驗室采樣與檢測技術,1,H7N9禽流感病毒介紹,2,病原學特征,禽流感病毒屬正粘病毒科 流感病毒按照病毒核蛋白（NP）和基質蛋白（MP）的差異可以分成甲、乙、丙型流感病毒 甲型流感根據(jù)病毒血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)的差異可以分成不同的亞型，目前可分為16個H亞型（H1H16）和9個N亞型（N1N9）。 禽甲型流感病毒除感染禽外，還可感染人、豬、馬、水貂和海洋哺乳動物?？筛腥救说那萘鞲胁《緛喰蜑镠5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次報道的為H7N9禽流感病毒。該病毒為新型重配病毒，其內部基因來自于H9N2禽流感病毒。,3,病原學特征,病毒基因組結構 甲、乙型病毒分為8節(jié)段 丙型病毒分為7個節(jié)段（缺少編碼NA的節(jié)段） 單鏈、負鏈RNA 單純的病毒RNA不具感染性,4,6個內部片段來源于H9N2 最新的研究表明，該病毒可能是 H7N3（鴨） H7N9（野禽） H9N2 中國科學院研究顯示，H7N9禽流感病毒基因來自于東亞地區(qū)野鳥和中國上海、浙江、江蘇雞群的基因重配。,病毒基因組特征,5,理化特征,禽流感病毒普遍對熱敏感，對低溫抵抗力較強，65加熱30分鐘或煮沸（100）2分鐘以上可滅活。病毒在較低溫度糞便中可存活1周，在4水中可存活1個月，對酸性環(huán)境有一定抵抗力，在pH4.0的條件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情況下可保持活力1年以上。,6,人感染H7N9禽流感病毒 標本采集運輸及實驗室檢測,7,臨床樣本的選擇,采樣對象：不明原因肺炎、人禽流感待查病例 最佳采集時間：發(fā)病后3天內，一般不超過7天 要有醫(yī)院專家組的會診記錄,8,病例定義,不明原因肺炎病例應同時具備以下4條，不能明確診斷為其它疾病的肺炎病例： 發(fā)熱（腋溫38）； 具有肺炎的影像學特征； 發(fā)病早期白細胞總數(shù)降低或正常、淋巴細胞分類計數(shù)減少； 經規(guī)范抗菌藥物治療35天 監(jiān)測病例（同時具備以下4項）： 發(fā)熱(腋下體溫38) 具有肺炎的影像學特征 發(fā)病早期白細胞總數(shù)降低或正常,或淋巴細胞分類計數(shù)減少 不能從臨床或實驗室角度診斷為常見病原所致肺炎,9,病例定義,疑似病例： 符合臨床癥狀及血常規(guī)/生化及胸部影像學特征 甲型流感病毒通用引物陽性并排除季節(jié)性流感 可以有流行病學接觸史 確診病例： 符合疑似病例診斷標準 呼吸道標本中分離出H7N9禽流感病毒 呼吸道標本中H7N9禽流感病毒核酸檢測陽性 動態(tài)檢測雙份血清H7N9禽流感病毒特異性抗體水平呈4倍或以上升高,10,標本類型,上呼吸道標本 咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液等 下呼吸道標本 氣管吸取物、肺洗液、肺組織標本等 血清標本 急性期血清：發(fā)病7天內，盡量采集 恢復期血清：間隔2-4周的 尸檢組織標本 肺組織、氣管、支氣管組織等,11,采樣液要求,常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hanks液，Eagels培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液或不加抗菌素的生理鹽水（漱口液）。 為防止采樣液生長細菌和真菌，在采樣液中需加入抗菌素，加入慶大霉素（終濃度0.1mg/ml可高至0.5mg/ml ）、抗真菌藥物（終濃度2ug/ml）。加入抗菌素以后重新調節(jié)pH值為7.4， 配制好的采樣液，分裝每個采樣管3-4ml，-20凍存。 慶大霉素:80mg（萬單位）2ml,12,Eagels基礎培養(yǎng)基,13,咽拭子 用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去,14,15,采咽拭子的器材和容器,16,17,標本采集要求,同時采集 呼吸道標本：34ml 血清標本：12ml 盡量采集 病例發(fā)病早期的呼吸道標本 特別是下呼吸道標本 填寫標本采集登記表 務必填寫清楚，不要缺漏項目 復印一份交收樣單位，簽字蓋章,18,19,20,標本送檢,送檢單位 縣級疾控中心/臨床醫(yī)院 送檢時限 在24小時內送達 接受單位 流感監(jiān)測網絡實驗室（設區(qū)市疾控中心）,21,標本的運送要求 新鮮的臨床采集標本 應在4條件下24小時內運送至全國流感監(jiān)測網絡實驗室; 未能24小時內送至實驗室的，應置-70或以下保存 凍存的臨床采集標本 應在凍存的條件下，低溫送至實驗室,22,生物安全,23,傳播風險及管理,病毒特征分析表明存在人間傳染的風險 暫時按“高致病性禽流感病毒”類型管理 參考人間傳染的病原微生物名錄 需重點考慮生物安全 標本采集 標本運輸 實驗室活動,24,標本采集和運輸,標本采集 重點做好采樣人員的個人防護 必須佩帶N95口罩、防護服、手套等防護用品 采樣后器材高壓消毒 標本運輸 經過行政審批 包裝 臨床樣品：B類， UN3373包裝 病毒分離物： A類， UN2814包裝 專人專車運輸并注意防護,25,感染性物質包裝分類,航空運輸B類包裝（ UN號3373,26,A類、 B類包裝的區(qū)別,27,檢測活動,標本分裝、滅活和核酸提取 BSL-2+生物安全柜 核酸擴增 BSL-2 病毒培養(yǎng) BSL-3：細胞及雞胚的接種 ABSL-3：動物感染實驗 活動需要行政審批、報備 個人防護 BSL-2：N95口罩、眼鏡、防護服等 BSL-3：按相關要求,28,病原學檢測,核酸檢測 Real-time RT-P