GB19171-2003雙孢蘑菇菌種.pdf

GB 1 9 1 7 1 - 2 0 0 3前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A、 附錄 B均為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位: 福建省輕工業(yè)研究所、 福建省蘑菇菌種研究推廣站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 王澤生、 廖劍華、 曾輝、 陳軍、 陳美元。GB 1 91 7 1 - 2 0 0 3引言 栽培雙抱落菇使用的菌種是人工培育的純菌絲體及其培養(yǎng)基的混合體。我國(guó)采用三級(jí)擴(kuò)大繁育程序( 即 母種、 原種、 栽培種) 培育雙抱蘑菇菌種。 為了規(guī)范我國(guó)雙抱蘑菇菌種生產(chǎn)、 經(jīng)銷和使用， 確保我國(guó)雙抱蘑菇生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展， 特制定本標(biāo)準(zhǔn)。CB 1 9 1 71 - 2 0 0 3雙 抱 蘑 菇 菌 種1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了 雙抱蘑菇( A g a r i c u s裝、 貯運(yùn)等。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于雙抱蘑菇( A g a r i c u sb i s p o r u s ) 菌種的質(zhì)量要求、 試驗(yàn)方法、 檢驗(yàn)規(guī)則及標(biāo)簽、 標(biāo)志、 包b i s p o r u s ) 菌種的生產(chǎn)、 經(jīng)銷和使用。2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日 期的引用文件， 其隨后所有的修改單( 不包括勘誤的內(nèi)容) 或修訂版均不適于本標(biāo)準(zhǔn)， 然而， 鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 G B / T 1 9 1 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志( G B / T 1 9 1 -2 0 0 0 , e g v I S O 7 8 0 ; 1 9 9 7 ) G B / T 4 7 8 9 . 2 8 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、 培養(yǎng)基和試劑 G B / T 1 2 7 2 8 -1 9 9 1 食用菌術(shù)語(yǔ) G B 1 9 1 7 2 -2 0 0 3 平菇菌種 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語(yǔ)和定義 下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3 . 1 母種s t o c k c u l t u re 經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物， 以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位， 也稱一級(jí)種、 試管種。 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 ， 定義3 . 3 13 . 2 原種 p r e - c u l t u re s p a w n 由母種移植、 擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或1 5 c m X 2 8 c m聚丙烯塑料袋為容器。 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 ， 定義3 . 4 3 . 3 栽培種 s p a w n 由原種移植、 擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培， 不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 ， 定義3 . 5 3 . 4 領(lǐng)頑現(xiàn)象 a n t a g o n i s m 具有不同遺傳基因的菌落間產(chǎn)生不生長(zhǎng)區(qū)帶或形成不同形式線行邊緣的現(xiàn)象。 G B 1 9 1 7 2 -2 0 0 3 ， 定義3 . 4 3 . 5 角變s e c t o r IG日 1 9 1 71 - 2 0 0 3 因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、 生長(zhǎng)緩慢、 菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。 G B 1 9 1 7 2 -2 0 0 3 ， 定義3 . 5 13 . 6 高溫抑制級(jí)h i g h t e m p e r a t u re d l i n e 食用菌菌種在生產(chǎn)過(guò)程中受高溫的不良影響， 培養(yǎng)物出現(xiàn)的圈狀發(fā)黃、 發(fā)暗或菌絲變稀弱的現(xiàn)象 。 G B 1 9 1 7 2 -2 0 0 3 ， 定義3 . 6 13 . 7 同工陣 i s o e n z y m e 催化相同生化反應(yīng)， 而結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)不同的酶分子。通過(guò)凝膠電泳使同工酶分離成遷移率不同的區(qū)帶， 經(jīng)生物化學(xué)染色后顯示出的同工酶譜， 可對(duì)生物品種進(jìn)行酶分子水平的鑒別或鑒定。3 . 8 生物學(xué)效率 b i o l o g i c a l e f f i c i e n c y 單位數(shù)量培養(yǎng)料的干物質(zhì)與所培養(yǎng)產(chǎn)生出的子實(shí)體或菌絲體干重之間的比率。 G B / T 1 2 7 2 8 -1 9 9 1 ， 定義 2 . 1 . 2 0 3 . 9 種性c h a r a c t e r s o f v a r i e t y 食用菌的品種特性是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對(duì)溫度、 濕度、 酸堿度、 光線和氧氣的要求， 抗逆性、 豐產(chǎn)性、 出菇遲早、 出菇潮數(shù)、 栽培周期、 商品質(zhì)量及栽培習(xí)性等農(nóng)藝性狀 。 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 ， 定義3 . 8 4 質(zhì)量要求4 . 1 母種4 . 1 . 1 容器規(guī)格應(yīng)符合 N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2中4 . 7 . 1 . 1 規(guī)定。4 . 1 . 2 感官要求應(yīng)符合表1 規(guī)定。 表 1 母種感官要求項(xiàng)目要求容器完整， 無(wú)損棉塞或無(wú)棉塑料蓋干操、 潔凈， 松緊適度， 能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基滋人i t為試管總?cè)莘e的四分之一至五分之一培養(yǎng)基斜面長(zhǎng)度頂端距棉塞4 0 m m - 5 0 m m接種量( 接種塊大小)( 3 -5 ) mmX( 3 - - 5 ) mm菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿斜面菌絲體特征潔白或米白、 濃密、 羽毛狀或葉脈狀菌絲體表面均勻、 平整、 無(wú)角變菌絲分泌物無(wú)菌落邊緣整齊雜菌菌落無(wú)斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮， 頗色均勻、 無(wú)暗斑、 無(wú)色素氣味有雙泡曹菇菌種特有的香味， 無(wú)酸、 臭、 霉等異味GB 1 91 71 - 2 0 0 34 . 1 . 3 微生物學(xué)要求應(yīng)符合表 2 規(guī)定。表 2 母種徽生物學(xué)要求項(xiàng) 目要求菌絲粗壯雜菌無(wú)4 . 1 . 4 菌絲生長(zhǎng)速度: 在 P D A培養(yǎng)基上， 在適溫( 2 4 士1 0C ) 下， 1 5 天2 0 天長(zhǎng)滿斜面。4 . 1 . 5 母種遺傳和栽培性狀: 供種單位需對(duì)所供母種進(jìn)行醋酶( E s t ) 同工酶類型鑒定， 確認(rèn)其遺傳類型與對(duì)照相同后， 再經(jīng)出菇試驗(yàn)確證農(nóng)藝性狀和商品性狀等種性合格后， 方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。4 . 1 . 5 . 1 菌絲體 E s t 同工酶的板狀聚丙烯酞胺凝膠電泳類型: 包括 G型( 呈現(xiàn) e l , e 3特征帶) , H型( 呈現(xiàn) e 2 , e 4 和e 3 0 -e 3 3 特征帶) 、 H G 1 -H G 2 型( 呈現(xiàn) e l , e 3 , e 3 0 -e 3 3 特征帶) 和 H G 4型( 呈現(xiàn) e l ,e 2 , e 3 , e 4 和e 3 0 -e 3 3 特征帶) 等。以E s t 區(qū)帶向正極泳動(dòng)距離與澳酚藍(lán)指示劑向正極泳動(dòng)距離的比值作為電泳相對(duì)遷移率( R . ) . e l , e 2 , e 3 , e 4 , e 3 0 , e 3 1 , e 3 2和 e 3 3的 R m值分別為 0 . 8 2 0 , 0 . 8 1 0 , 0 . 7 6 0 ,0 . 7 5 0 , 0 . 1 2 8 , 0 . 1 0 0 , 0 . 0 7 0和 0 . 0 1 0 ,4 . 1 . 5 . 2 菌絲萌發(fā)、 定植與生長(zhǎng)能力: 接種到適合的培養(yǎng)基后， 在正常條件下 2 4 h內(nèi)萌發(fā)， 定植迅速、菌絲健壯。4 . 1 . 5 . 3 結(jié)菇轉(zhuǎn)潮能力: 覆土后 1 2天1 6天結(jié)菇， 分布均勻; 1 8天2 2天采菇， 每潮菇間隔7 天一1 0 天。4 . 1 . 5 . 4 生物學(xué)效率: 在正常條件下生物學(xué)效率不低于3 0 a ,4 . 2 原種4 . 2 . 1 容器規(guī)格應(yīng)符合N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2 中4 . 7 . 1 . 2 規(guī)定。4 . 2 . 2 感官要求應(yīng)符合表3 規(guī)定。 表 3 原種感官要求項(xiàng)目要求容器完整， 無(wú)損棉塞或無(wú)棉塑料蓋干燥、 潔凈， 松緊適度， 能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶口的距離5 0 mm士5 mm接種量( 每支母種接原種數(shù)， 接種物大小)( 4 - 6 ) 瓶( 袋) , )1 2 - .X 1 5 m m菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器菌絲體特征潔白濃密、 生長(zhǎng)旺健表面菌絲體生長(zhǎng)均勻， 無(wú)角變， 無(wú)高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶( 袋) 壁， 無(wú)干縮表面分泌物無(wú)雜菌菌落無(wú)靚頑現(xiàn)象無(wú)氣味有雙泡蘑菇菌種特有的香味， 無(wú)酸、 臭、 霉等異味4 . 2 . 3 微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表 2 規(guī)定。4 . 2 . 4 菌絲生長(zhǎng)速度: 在適宜培養(yǎng)基上， 在適溫( 2 4 士1 C) 下菌絲長(zhǎng)滿容器不超過(guò) 4 5 天。4 . 3 栽培種4 . 3 . 1 容器規(guī)格應(yīng)符合N Y / T 5 2 8 -2 0 0 2中4 . 7 . 1 . 3 規(guī)定。GB 1 9 1 7 1 - 2 0 0 34 . 3 . 2 感官要求應(yīng)符合表4 規(guī)定。表 4 栽培種感官要求項(xiàng)目要求容器完整， 無(wú)損棉塞或無(wú)棉塑料蓋干燥、 潔凈， 松緊適度， 能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基面距瓶( 袋) 口的距離5 0 -士5 mm接種量仁 每瓶( 袋) 原種接栽培種數(shù)習(xí)( 3 0 -5 0 ) 瓶( 袋)菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器菌絲體特征潔白濃密、 生長(zhǎng)旺健不同部位菌絲體生長(zhǎng)均勻， 無(wú)角變， 無(wú)高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶( 袋) 壁， 無(wú)干縮表面分泌物無(wú)雜菌菌落無(wú)頗頑現(xiàn)象無(wú)氣味有雙抱蘑菇菌種特有的香味， 無(wú)酸、 臭、 霉等異味4 . 3 . 34 . 3 . 4微生物學(xué)指標(biāo)應(yīng)符合表 2 規(guī)定。菌絲生長(zhǎng)速度: 在適宜培養(yǎng)基上， 在適溫( 2 4 士1 0C) 下菌絲長(zhǎng)滿瓶( 袋) 不超過(guò)4 5 天。5 抽樣5 . 1 質(zhì)檢部門的抽樣應(yīng)具有代表性。5 . 2 母種按品種、 培養(yǎng)條件、 接種時(shí)間分批編號(hào)， 原種、 栽培種按菌種來(lái)源、 制種方法和接種時(shí)間分批編號(hào)。按批隨機(jī)抽取被檢樣品。5 . 3 母種、 原種、 栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的1 0 0/ a , 5 % , 1 0/ a 。 但每批抽樣數(shù)量不得少于1 0 支( 瓶、 袋) ; 超過(guò) 1 0 0 支( 瓶、 袋) 的， 可進(jìn)行兩級(jí)抽樣。6 試驗(yàn)方法6 . 1 感官檢驗(yàn) 按表 5 逐項(xiàng)進(jìn)行。表 5 感官檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)項(xiàng) 目檢驗(yàn)方法檢 驗(yàn) 項(xiàng) 目檢驗(yàn)方法容器肉眼觀察接種量母種 、 原種肉眼觀察栽培種檢查生產(chǎn)記錄棉塞、 無(wú)棉塑料蓋肉眼觀察一 絲 生 長(zhǎng) 肉眼觀察母種培養(yǎng)基灌人量肉眼觀察 菌 種 夕 卜 觀 各 項(xiàng) 雜 菌 菌 落 除 外 ，肉眼觀察母種斜面長(zhǎng)度肉眼觀察一 雜菌菌肉眼觀察， 必要時(shí)用 5 X放大鏡觀察母種斜面正面外觀各項(xiàng)肉眼觀察培養(yǎng)基上表面距瓶 ( 袋) 口的距離肉眼觀察1鼻嗅GB 1 9 1 71 一 2 0 0 362 微生物學(xué)檢驗(yàn)6 . 21 表2中菌絲和雜菌用放大倍數(shù)不低于10x40 的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察， 每一檢樣應(yīng)觀察不少于50 個(gè)視野。6 . 22 細(xì)菌檢驗(yàn): 取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物， 按無(wú)菌操作接種于G B / T4 7 8 9 . 2 8中4 . 8 規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中， 25一28振蕩培養(yǎng) 1 天一2 天， 觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁， 為有細(xì)菌污染;培養(yǎng)液澄清， 為無(wú)細(xì)菌污染。6 . 2 . 3 霉菌檢驗(yàn): 取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物， 按無(wú)菌操作接種于 P D A培養(yǎng)基( 見(jiàn)附錄 A) 中，2528培養(yǎng)3 天4 天， 出現(xiàn)雙抱蘑菇菌落以外的菌落， 或有異味者為霉菌污染物， 必要時(shí)進(jìn)行水封片鏡檢。6 . 3 菌絲生長(zhǎng)速度6 . 3 . 1 母種: P D A培養(yǎng)基， 在24士1 下培養(yǎng)， 計(jì)算長(zhǎng)滿需天數(shù)。6 . 3 . 2 原種和栽培種: 采用第B . 1 章或第B . 2 章規(guī)定的配方之一， 在24士1 下培養(yǎng)， 計(jì)算長(zhǎng)滿需天數(shù) 。6 . 4 母種遺傳和栽培性狀6 . 4 . 1 菌絲體 E st同工酶的板狀聚丙烯酞胺凝膠電泳: 取菌齡為 15天20 天的試管母種， 刮取菌絲，按1 : 3 : 。 . 5 的比 例混合菌絲( 9 ) 、 0 . l m ol / L 磷酸緩沖液( m L)和石英砂( 9 ) ， 研磨成勻漿， 臺(tái)式離心機(jī)1000o r / m i n 離心s m in ， 取上清液， 按5 : 1 : 1 的比 例混合上清液、 40%蔗糖和。 . 01% 嗅酚藍(lán)溶液作為電泳樣品， 4 下冷藏備用。采用聚丙烯酞胺凝膠電泳。用p H S . g T ri s 一 H CI緩沖液配制9 腸分離膠， 用p H S . 3 T r i s 一 甘氨酸作電極緩沖液。 點(diǎn)樣7 5 嚴(yán) L ， 3 下1 2 o V電泳Z o m i n 后穩(wěn)壓Z O O V， 4 h 。用固藍(lán)R R鹽6 o m g ， 0 . l m o l / L磷酸緩沖液( p H 6 . 0 ) s o m L ， a 一 禁乙酷3 8 m g 和民 蔡乙醋3 8 m g 溶于3 m L 丙酮配制的染色液， 染色， 顯現(xiàn)酶譜， 再根據(jù)特征帶分型。6 . 42 栽培性狀: 使用附錄B中B . 2 . 1 培養(yǎng)基按表6 各項(xiàng)觀察記錄。6 . 4 . 2 . 1 菌絲萌發(fā)、 定植與生長(zhǎng)能力: 接種到附錄B中B . 2 . 1 培養(yǎng)基( 含水量提高到68%) 上， 在適溫(24 士1 ) 下培養(yǎng)， 肉眼觀察菌絲萌發(fā)、 定植與生長(zhǎng)情況。6 . 4 . 2 . 2 結(jié)菇轉(zhuǎn)潮能力: 栽培試驗(yàn)， 肉眼觀察， 計(jì)算覆土到出第一潮菇的時(shí)間。6 . 4 . 2 . 3 生物學(xué)效率: 栽培試驗(yàn)， 記錄、 統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量， 按G B/T1 2 7 28一1 9 9 1 中2 . 120規(guī)定計(jì)算。6 . 4 . 2 . 4 栽培試驗(yàn): 將被檢母種制成原種。采用附錄B中B . 2 . 1 的培養(yǎng)基配方( 含水量提高到68%) ，配制3 60 k g 培養(yǎng)基， 接種后分三組( 每組2 m 2 ) 進(jìn)行常規(guī)管理， 根據(jù)表6 所列項(xiàng)目， 做好栽培記錄， 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果。同時(shí)將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對(duì)照， 亦做同樣處理。對(duì)比二者的檢驗(yàn)結(jié)果， 以時(shí)間計(jì)的檢驗(yàn)項(xiàng)目中， 被檢母種的任何一項(xiàng)時(shí)間較對(duì)照菌株推遲 5 天以上( 含 5 天) 者， 為不合格; 產(chǎn)量顯著低于對(duì)照菌株者， 為不合格; 菇體外觀形態(tài)與對(duì)照明顯不同或畸形者， 為不合格。 裹 6 母種栽培中農(nóng)藝性狀和商品性狀檢驗(yàn)記錄檢 驗(yàn) 項(xiàng) 目檢 驗(yàn) 結(jié) 果檢 驗(yàn) 項(xiàng) 目檢驗(yàn)結(jié)果母種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/ 天一原種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/ 天一栽培種長(zhǎng)滿所需時(shí)間/ 天一菌種萌發(fā)所需時(shí)間/ 天一菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基所需時(shí)間/ 天一覆土至扭結(jié)所需時(shí)間/ 天覆土至采菇所需時(shí)間/ 天一菇 蓋 直 徑 、厚 度 、柄長(zhǎng)、 柄 粗 ( 直 徑 )/ m mCB 1 91 71 - 2 0 0 36 . 5 留樣 各級(jí)菌種都要留樣備查， 留樣的數(shù)量應(yīng)每個(gè)批號(hào)菌種( 3 - 5 ) 支( 瓶、 袋) ， 于4 0 C - 6 下貯存， 母種5 個(gè)月， 原種 4 個(gè)月， 栽培種 2 個(gè)月。7 檢驗(yàn)規(guī)則 判定規(guī)則按質(zhì)量要求進(jìn)行。檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合質(zhì)量要求時(shí)， 為合格菌種， 其中任何一項(xiàng)不符合要求， 均為不合格菌種。8 標(biāo)簽、 標(biāo)志、 包裝、 運(yùn)輸、 貯存8 . 1 標(biāo)簽、 標(biāo)志8 . 1 . ， 產(chǎn)品標(biāo)簽 每支( 瓶、 袋) 菌種必須貼有清晰注明以下要素的標(biāo)簽: a ) 產(chǎn)品名稱( 如: 雙抱蘑菇母種) ; b ) 品種名稱( 如: A s 2 7 9 6 ) ; c ) 生產(chǎn)單位( XXX菌種廠) ; d ) 接種日期( 如: 2 0 0 0 . XX. XX) ; e ) 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。8 . 1 . 2 包裝標(biāo)簽 每箱菌種必須貼有清晰注明以下要素的包裝標(biāo)簽: a ) 產(chǎn)品名稱、 品種名稱; b ) 廠名、 廠址、 聯(lián)系電話; c ) 出廠日期; d 保質(zhì)期、 貯存條件; e ) 數(shù)量 ; f ) 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。8 . 1 . 3 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示 按G B / T 1 9 1 規(guī)定， 應(yīng)注明以下圖示標(biāo)志: a ) 小心輕放標(biāo)志; b ) 防水、 防潮、 防凍標(biāo)志; c ) 防曬、 防高溫標(biāo)志; d ) 防止倒置標(biāo)志; e ) 防止重壓標(biāo)志。8 . 2 包裝8 . 2 . 1 母種外包裝采用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱， 內(nèi)部用棉花、 碎紙、 報(bào)紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。8 . 2 . 2 原種、 栽培種外包裝采用有足夠強(qiáng)度的紙材制做的紙箱， 菌種間用碎紙、 報(bào)紙等具有緩沖作用的輕質(zhì)材料填滿。紙箱上部和底部用8 c m寬的膠帶封口， 并用打包帶捆扎兩道， 箱內(nèi)附產(chǎn)品合格證書(shū)和使用說(shuō)明( 包括菌種種性、 培養(yǎng)基配方及適用范圍) 。8 . 3 運(yùn)輸8 . 3 . 1 不得與有毒物品混裝。8 . 3 . 2 氣溫達(dá)3 0 以上時(shí)， 需用 2 0C -2 0 的冷藏車運(yùn)輸。8 . 3 . 3 運(yùn)輸中必須有防震、