GB5009.120-2016食品安全國家標準食品中丙酸鈉、丙酸鈣的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 6食品安全國家標準食品中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā) 布G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 6 前 言 本標準代替G B/T5 0 0 9.1 2 02 0 0 3 食品中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定 、G B/T2 3 3 8 22 0 0 9 食品中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定 高效液相色譜法 。本標準與G B/T5 0 0 9.1 2 02 0 0 3相比, 主要變化如下: 標準名稱修改為“ 食品安全國家標準 食品中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定”; 增加了液相色譜法; 氣相色譜柱由填充柱改為毛細管柱, 色譜條件也相應(yīng)變動。G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 61 食品安全國家標準食品中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定1 范圍本標準規(guī)定了豆類制品、 生濕面制品、 面包、 糕點、 醋、 醬油中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定方法。本標準適用于豆類制品、 生濕面制品、 面包、 糕點、 醋、 醬油中丙酸鈉、 丙酸鈣的測定。第一法 液相色譜法2 原理試樣中的丙酸鹽通過酸化轉(zhuǎn)化為丙酸, 經(jīng)超聲波水浴提取或水蒸汽蒸餾, 收集后調(diào)p H, 經(jīng)高效液相色譜測定, 外標法定量其中丙酸的含量。樣品中的丙酸鈉和丙酸鈣以丙酸計, 需要時可根據(jù)相應(yīng)參數(shù)分別計算丙酸鈉和丙酸鈣的含量。3 試劑與材料除非另有說明, 所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 磷酸(H3P O4) 。3.1.2 磷酸氫二銨 (NH4)2H P O4 。3.1.3 硅油。3.2 試劑配制3.2.1 磷酸溶液(1m o l/L) : 在5 0m L水中加入5 3.5m L磷酸, 混勻后, 加水定容至10 0 0m L。3.2.2 磷酸氫二銨溶液(1.5g/L) : 稱取磷酸氫二銨1.5g, 加水溶解定容至10 0 0m L。3.3 標準品3.3.1 丙酸標準品(C3H6O2) ,C A S:7 9 - 0 9 - 4, 純度9 7.0%。3.3.2 丙酸標準貯備液(1 0m g/m L) : 精確稱取2 5 0.0m g丙酸標準品于2 5m L容量瓶中, 加水至刻度,4冰箱中保存, 有效期為6個月。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜(H P L C) 儀: 配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。4.2 天平: 感量0.0 0 01g和0.0 1g。4.3 超聲波水浴。G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 62 4.4 離心機: 轉(zhuǎn)速不低于40 0 0r/m i n。4.5 組織搗碎機。4.6 具塞塑料離心管:5 0m L。4.7 水蒸汽蒸餾裝置:5 0 0m L。4.8 鼓風干燥箱。4.9 p H計。5 分析步驟5.1 樣品制備固體樣品經(jīng)組織搗碎機搗碎混勻后備用( 面包樣品需運用鼓風干燥箱,3 7下干燥2h3h進行風干, 置于組織搗碎機中磨碎) ; 液體樣品搖勻后備用。5.2 試樣處理5.2.1 蒸餾法( 適用于豆類制品、 生濕面制品、 醋、 醬油等樣品) : 樣品均質(zhì)后, 準確稱取2 5g( 精確至0.0 1g) , 置于5 0 0m L蒸餾瓶中, 加入1 0 0m L水, 再用5 0m L水沖洗容器, 轉(zhuǎn)移到蒸餾瓶中, 加1m o l/L磷酸溶液2 0m L,2滴3滴硅油, 進行水蒸氣蒸餾, 將2 5 0m L容量瓶置于冰浴中作為吸收液裝置, 待蒸餾至約2 4 0m L時取出, 在室溫下放置3 0m i n, 用1m o l/L磷酸溶液調(diào)p H為3左右, 加水定容至刻度, 搖勻, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾后, 待液相色譜測定。5.2.2 直接浸提法( 適用于面包、 糕點) : 準確稱取5g( 精確至0.0 1g) 試樣至1 0 0m L燒杯中, 加水2 0m L, 加入1m o l/L磷酸溶液0.5m L, 混勻, 經(jīng)超聲浸提1 0m i n后, 用1m o l/L磷酸溶液調(diào)p H為3左右, 轉(zhuǎn)移試樣至5 0m L容量瓶中, 用水定容至刻度, 搖勻。將試樣全部轉(zhuǎn)移至5 0m L具塞塑料離心管中, 以不低于40 0 0r/m i n離心1 0m i n, 取上清液, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾后, 待液相色譜測定。6 儀器參考條件6.1 色譜柱:C1 8柱,4.6mm2 5 0mm,5m或等效色譜柱。6.2 流動相:1.5g/L磷酸氫二銨溶液, 用1 m o l/L磷酸溶液調(diào)p H為2.73.5( 使用時配制) ; 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾。6.3 流速:1.0m L/m i n。6.4 柱溫:2 5。6.5 進樣量:2 0L。6.6 波長:2 1 4n m。6.7 色譜柱清洗參考條件: 實驗結(jié)束后, 用1 0%甲醇清洗1h, 再用1 0 0%甲醇清洗1h。7 標準曲線繪制7.1 蒸餾法: 準確吸取標準儲備液0.5m L、1.0m L、2.5m L、5.0m L、7.5m L、1 0.0m L、1 2.5m L置于5 0 0m L蒸餾瓶中, 其他操作同5.2.1樣品前處理, 其丙酸標準溶液的最終濃度分別為0.0 2m g/m L、0.0 4m g/m L、0.1m g/m L、0.2m g/m L、0.3m g/m L、0.4m g/m L、0.5 m g/m L, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾, 濃度由低到高進樣, 以濃度為橫坐標, 以峰面積為縱坐標, 繪制標準曲線。7.2 直接浸提法: 準確吸取5.0m L標準儲備液于5 0m L容量瓶中, 用水稀釋至刻度, 配制成濃度為G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 63 1.0m g/m L標準工作液。再準確吸取標準工作液0.2m L、0.5m L、1.0m L、2.0m L、3.0m L、4.0m L、5.0m L至1 0m L容量瓶中, 分別加入1m o l/L磷酸0.2m L, 用水定容至1 0m L, 混勻。其丙酸標準溶液的最終濃度分別為0.0 2m g/m L、0.0 5m g/m L、0. 1m g/m L、0. 2m g/m L、0. 3m g/m L、0. 4m g/m L、0. 5m g/m L, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾, 濃度由低到高進樣, 以濃度為橫坐標, 以峰面積為縱坐標, 繪制標準曲線。8 試樣溶液的測定處理后的樣液同標準系列同樣進機測試。根據(jù)標準曲線計算樣品中的丙酸濃度。待測樣液中丙酸響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線線性范圍內(nèi), 超出濃度線性范圍則應(yīng)稀釋后再進樣分析。9 分析結(jié)果的表述樣品中丙酸鈉( 鈣) 含量( 以丙酸計) , 按式(1) 計算:X=cV10 0 0m10 0 0f(1) 式中:X 樣品中丙酸鈉( 鈣) 含量( 以丙酸計) , 單位為克每千克(g/k g) ;c 由標準曲線得出的樣液中丙酸的濃度, 單位為毫克每毫升(m g/m L) ;V 樣液最后定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 樣品質(zhì)量, 單位為克(g) ;f 稀釋倍數(shù)。試樣中測得的丙酸含量乘以換算系數(shù)1.2 9 67, 即得丙酸鈉的含量;試樣中測得的丙酸含量乘以換算系數(shù)1.2 5 69, 即得丙酸鈣含量。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。1 0 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的1 0%。1 1 其他取樣為2 5g, 定容體積為2 5 0m L時, 丙酸的檢出限為0.0 3g/k g, 定量限為0.1 0g/k g。第二法 氣相色譜法1 2 原理試樣中的丙酸鹽通過酸化轉(zhuǎn)化為丙酸, 經(jīng)水蒸氣蒸餾收集后直接進氣相色譜, 用氫火焰離子化檢測器檢測, 以保留時間定性, 外標法定量其中丙酸的含量。樣品中的丙酸鈉和丙酸鈣以丙酸計, 需要時, 可根據(jù)相應(yīng)參數(shù)分別計算丙酸鈉和丙酸鈣的含量。G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 64 1 3 試劑和材料注:除非另有說明, 所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。1 3.1 試劑1 3.1.1 磷酸(H3P O4) 。1 3.1.2 甲酸(CH2O2) 。1 3.1.3 硅油。1 3.2 試劑配制1 3.2.1 磷酸溶液(1 0+9 0) : 取1 0m L磷酸加水至1 0 0m L。1 3.2.2 甲酸溶液(2+9 8) : 取1m L甲酸加水至5 0m L。1 3.3 標準品丙酸標準品(C3H6O2) ,C A S:7 9 - 0 9 - 4, 純度9 7.0%。1 3.4 標準溶液配制1 3.4.1 丙酸標準貯備液(1 0m g/m L) : 精確稱取2 5 0.0m g丙酸標準品于2 5m L容量瓶中, 加水至刻度,4冰箱中保存, 有效期為6個月。1 3.4.2 丙酸標準使用液: 將貯備液用水稀釋成1 0g/m L2 5 0g/m L的標準系列, 臨用現(xiàn)配。1 4 儀器和設(shè)備1 4.1 氣相色譜儀: 帶氫火焰離子化檢測器。1 4.2 天平: 感量為0.0 0 01g和感量為0.0 1g。1 4.3 水蒸氣蒸餾裝置。1 4.4 鼓風干燥箱。1 5 分析步驟1 5.1 樣品制備同5.1。1 5.2 試樣處理樣品均質(zhì)后, 準確稱取2 5g, ( 面包樣品需運用鼓風干燥箱,3 7下干燥2h3h進行風干, 置于研缽中磨碎) , 置于5 0 0m L蒸餾瓶中, 加入1 0 0m L水, 再用5 0 m L水沖洗容器, 轉(zhuǎn)移到蒸餾瓶中, 加1 0m L磷酸溶液,2滴3滴硅油, 進行水蒸氣蒸餾, 蒸餾速度為2滴/s 3滴/s, 將2 5 0m L容量瓶置于冰浴中作為吸收液裝置, 待蒸餾近2 5 0m L時取出, 在室溫下放置3 0m i n, 加水至刻度?；靹? 供氣相色譜分析用。1 5.3 儀器參考條件1 5.3.1 色譜柱: 聚乙二醇(P E G) 石英毛細管柱, 柱長3 0m, 內(nèi)徑0.2 5mm, 膜厚度0.5m或同等性能G B5 0 0 9.1 2 02 0 1 65 的色譜柱。1 5.3.2 載氣: 氮氣, 純度9 9.9 9%。1 5.3.3 載氣流速:1m L/m i n。1 5.3.4 進樣口溫度:2 5 0。1 5.3.5 分流比:1 01。1 5.3.6 檢測器溫度:2 5 0。1 5.3.7 柱溫箱溫度:1 2 5保持5m i n, 然后以1 5/m i n的速率升到1 8 0, 保持3m i n。1 5.3.8 進樣量:1L。1 5.4 標準曲線的制作取標準系列中各種濃度的標準使用液1 0m L, 加0.5m L甲酸溶液, 混勻。將其分別注入氣相色譜儀中, 測定相應(yīng)的峰面積或峰高, 以標準工作液的濃度為橫坐標, 以響應(yīng)值( 峰面積或峰高) 為縱坐標, 繪制標準曲線。1 5.5 試樣溶液的測定吸取1 0m L制備的試樣溶液(1 5.1) 于試管中, 加入0.5m L甲酸溶液, 混勻, 同標準系列同樣進機測試。根據(jù)標準曲線計算樣品中的丙酸濃度。1 6 分析結(jié)果的表述樣品中丙酸鈉( 鈣) 含量( 以丙酸計) , 按式(2) 計算:X=cmV10 0 0(2) 式中:X 樣品中丙酸鈉( 鈣) 含量( 以丙酸計) , 單位為克每千克(g/k g) ;c 由標準曲線得出的樣液中丙酸的濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;m 樣品質(zhì)量, 單位為克(g) ;V 樣液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;10 0 0 g/g換算至g/k g的系數(shù)。試樣中測得的丙酸含量乘以換算系數(shù)1.2 9 67, 即得丙酸鈉的含量;試樣中測得的丙酸含量乘以換算系數(shù)1.2 5 69, 即得丙酸鈣含量。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留