泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解

1、泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解,2013-10-07,2004年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng),2004年10月6日，兩名以色列科學(xué)家阿龍切哈諾沃 （Aaron Ciechanover）、阿夫拉姆赫什科 （Avram Hershko）和一位美國(guó)科學(xué)家歐文羅 斯（Irwin Rose因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)了泛素（Ub）調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解，而授予他們諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，以表彰他們的 成果和努力。,生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的兩種降解過(guò)程:,一種：溶酶體，不需要能量，無(wú)選擇性的降解。主要是降解細(xì)胞通過(guò)胞吞作用攝取的外源蛋白質(zhì)。 另一種：需要能量，高效率、指向性很強(qiáng)的降解過(guò)程。比如多數(shù)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解。這個(gè)過(guò)程需要泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解，即泛素蛋白酶體途徑( UP

2、P )介導(dǎo)的蛋白水解過(guò)程,泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解概述,蛋白質(zhì)的降解是一個(gè)精細(xì)控制的過(guò)程，首先有待降解的蛋白質(zhì)被一種多肽（稱之為泛素）所標(biāo)記（蛋白質(zhì)的泛素化），接著這些泛素化的蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的蛋白酶復(fù)合體的活性位點(diǎn)，蛋白質(zhì)被降解成79個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的短肽片段后，從蛋白酶體的另一段被釋放。,泛素蛋白酶體途徑( upp )的組成,泛素蛋白酶體途徑( upp )由泛素( ubiquitin, ub)以及一系列相關(guān)的酶組成。除泛素以外還包括4 種酶家族:泛素活化酶( E1 ) 、泛素偶連酶(E2)也稱泛素載體蛋白( ) 、泛素-蛋白連接酶( , E3)和蛋白酶體(proteasome) 。,泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降

3、解的發(fā)現(xiàn)史,1953年，當(dāng)時(shí)Simpson 利用放射性同位素標(biāo)記法進(jìn)行蛋白質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn)，并隨后發(fā)表了名為“生物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)分解中需要代謝能量即需要ATP的加水分解”的論文，但是，這個(gè)驚人的研究發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有引起科學(xué)界的廣泛重視，甚至為人們所忽略。在當(dāng)時(shí)的熱力學(xué)研究中，水分解反應(yīng)是產(chǎn)能反應(yīng)，與合成反應(yīng)需要能量的過(guò)程是截然不同的。,泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解的發(fā)現(xiàn)史 在1960年，人們發(fā)現(xiàn)了溶酶體這個(gè)及其重要的細(xì)胞器，他被認(rèn)為是蛋白質(zhì)降解的重要場(chǎng)所。后來(lái)人們發(fā)現(xiàn)了溶酶體抑制劑，經(jīng)過(guò)細(xì)胞溶酶體機(jī)能抑制劑的作用后，細(xì)胞內(nèi)任然存在部分蛋白質(zhì)的分解難以抑制。表明在細(xì)胞內(nèi)存在與溶酶體不同的蛋白分解系統(tǒng)。,在1975年，

4、就有人從牛胸腺中分離出一種含76個(gè)氨基酸殘基的多肽，相對(duì)分子質(zhì)量為8.45ku,后來(lái)被證實(shí)具有標(biāo)記待降解蛋白質(zhì)的作用，由于它廣泛存在于生命體，因此被命名為“泛素”。 1977年，Goldberg等發(fā)表一篇“他們?cè)谠嚬軆?nèi)再次發(fā)現(xiàn)Simpson所觀察到的現(xiàn)象”的論文。這篇論文引起了科學(xué)界對(duì)Simpson的發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)烈關(guān)注。Goldberg等報(bào)道網(wǎng)織紅細(xì)胞(未發(fā)育成熟的紅細(xì)胞）的提取液中加入ATP顯著促進(jìn)了蛋白質(zhì)的分解，也就是說(shuō)蛋白分解伴隨著能量的消耗，在細(xì)胞外，蛋白質(zhì)在蛋白酶的催化下水解釋放能量，蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)被降解卻需要能量，給科學(xué)家們?cè)斐闪撕艽蟮睦_。,1977年開(kāi)始Avram Hershko致

5、力于研究網(wǎng)狀細(xì)胞提取物。在試圖利用色譜法除去血紅蛋白的過(guò)程中，Aaron Ciechanover和Avram Hershko發(fā)現(xiàn)此提取物可被分為兩個(gè)部分，當(dāng)兩部分融合在一起時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生ATP依賴性的蛋白質(zhì)降解。1978年，他們認(rèn)為這種活性來(lái)源于一個(gè)多肽。這種多肽（APF-1）分子量只有9000，即為泛素。,1980年發(fā)表了兩篇文章，第一篇指出APF-1可以與提取物中的許多蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵的形式結(jié)合。第二篇文章中，作者進(jìn)一步闡述一個(gè)蛋白質(zhì)分子能夠與多個(gè)APF-1分子結(jié)合的現(xiàn)象，這種現(xiàn)象被稱為多泛素化。蛋白質(zhì)底物的多泛素化是引導(dǎo)其降解的信號(hào)。研究者們推測(cè)，細(xì)胞正是通過(guò)對(duì)以ATP形式儲(chǔ)存的能量的需求，

6、控制泛素引導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解過(guò)程的特異性的。,“多步泛素引發(fā)”學(xué)說(shuō),在后來(lái)的研究中，三位科學(xué)家及其成員們發(fā)現(xiàn)了與此相關(guān)的3種酶，分別命名為E1、E2、E3，并且在據(jù)此提出了“多步泛素引發(fā)”假說(shuō)，即在人體細(xì)胞中含有多種E1酶、E2酶、E3酶。蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的降解的過(guò)程： （1）E1酶激活泛素分子，此過(guò)程需要消耗能量； （2）泛素分子被轉(zhuǎn)移到E2酶上； 此上過(guò)程被稱為泛素活化 （3）E3酶識(shí)別待降解的目標(biāo)蛋白質(zhì)（靶蛋白），E2-泛素復(fù)合物結(jié)合到目標(biāo)蛋白質(zhì)附近，泛素標(biāo)記物從E2酶轉(zhuǎn)移到目標(biāo)蛋白質(zhì)上； （蛋白質(zhì)的泛素化） （4）E3酶釋放已被泛素標(biāo)記的蛋白；,多步泛素引發(fā)學(xué)說(shuō),（5）重復(fù)最后一步，直至蛋白

7、質(zhì)上連接的多個(gè)泛素形成一條短鏈； （6）泛素短鏈在蛋白酶體開(kāi)口處被識(shí)別，泛素標(biāo)記物被切除，蛋白質(zhì)被切割成小片段。,視頻,蛋白質(zhì)的泛素化,E1與ATP結(jié)合后，催化泛素羧基末端腺嘌呤化，同時(shí)釋放無(wú)機(jī)焦磷酸（PPi）。E1活化位點(diǎn)的半胱氨酸硫醇激活泛素腺嘌呤核苷酸中間產(chǎn)物上的羧基，形成一個(gè)泛素硫酯鍵。 E2激活的重要條件是位于UBC結(jié)構(gòu)域的一個(gè)保守半胱氨酸催化位點(diǎn)與泛素羧基端形成一個(gè)硫酯鍵。 E3催化被E2活化的泛素C-端甘氨酸與底物或下一個(gè)泛素的賴氨酸間形成泛素異肽鍵 (Isopeptide bond)。,蛋白質(zhì)泛素化,返回,蛋白酶體,每個(gè)人體細(xì)胞中含有30000個(gè)呈桶狀的大小約為20S蛋白酶體，

8、他們能夠?qū)缀跛械牡鞍踪|(zhì)降解成7到9個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的肽鏈。蛋白酶體降解蛋白質(zhì)的活性中心位于桶狀結(jié)構(gòu)的中心，與細(xì)胞中其他部分隔絕。進(jìn)入活性部位的唯一通路是“鎖”（lock，一種19S的復(fù)合物），它能夠識(shí)別被泛素化的蛋白質(zhì)，破壞其折疊結(jié)構(gòu)，并輔助蛋白質(zhì)穿過(guò)蛋白酶體的狹窄通道，進(jìn)入位于桶狀結(jié)構(gòu)中心的活性位點(diǎn)。,蛋白酶體,在活性位點(diǎn)目標(biāo)蛋白質(zhì)被降解成79個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的短肽片段后，從蛋白酶體的另一段被釋放。此外，19S復(fù)合物上還含有一種異肽酶，能夠?qū)⒎核貜牡孜锏鞍踪|(zhì)上除去（去泛素化）。因此，蛋白酶體本身對(duì)蛋白質(zhì)并沒(méi)有選擇性，具有選擇性的是E3酶，它只對(duì)待降解的蛋白質(zhì)進(jìn)行泛素化標(biāo)記。,蛋白酶復(fù)合體,蛋白質(zhì)

9、的去泛素化,去泛素化作用是泛素化過(guò)程的逆轉(zhuǎn)。在真核細(xì)胞內(nèi) 已發(fā)現(xiàn)多種去泛素化酶,它們能夠水解泛素和底物蛋 白之間的硫酯鍵,還能把錯(cuò)誤識(shí)別的底物從泛素化復(fù) 合體中釋放出來(lái)。它們又可以分為兩類: （1）泛素羧端水解酶( ubiquitin C - terminal hydrolases (UCHs) )：分子量為2030 KD,水解去除和泛素C末端連接的小肽,也參與泛素多聚體產(chǎn)生泛素單體的過(guò)程,促進(jìn)泛素再循環(huán),對(duì)泛素系統(tǒng)的正常運(yùn)行是很有必要的。 （2）泛素特異性加工酶( ubiquitin - spicific prote2ases - UBPs/USPs)：分子量大約為100 KD,參與去除和解

10、聚底物蛋白質(zhì)上的多聚泛素鍵,從而防止多聚泛素在底物蛋白的聚集。,研究的進(jìn)展,一、泛素樣蛋白的來(lái)源 蛋白質(zhì)與泛素蛋白或泛素樣蛋白（UBL）相結(jié)合，UBL 蛋白可以控制被修飾蛋白與其它生物大分子（比如蛋白酶 體或染色質(zhì)）間的相互作用。有越來(lái)越多的證據(jù)表明這種 UBL修飾途徑來(lái)自原核生物的硫轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)及相關(guān)酶類。 而且，在真核生物的共同祖先中，類似于UBL連接酶和 UBL去連接酶的蛋白也是廣泛存在的，這些證據(jù)都說(shuō)明 UBL修飾系統(tǒng)不是起源于真核生物。,研究的進(jìn)展,二、 泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解與人體免疫 泛素化修飾過(guò)程是一種可逆的共價(jià)修飾過(guò)程，它 能夠調(diào)節(jié)被修飾蛋白的穩(wěn)定性、功能活性狀態(tài)以 及細(xì)胞內(nèi)定位

11、等情況。 泛素化修飾作用在人體免疫系統(tǒng)的發(fā)育以及免 疫反應(yīng)的各個(gè)階段，比如免疫反應(yīng)的起始、發(fā)展 和結(jié)束等過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。最近的研究結(jié) 果顯示，有好幾種泛素連接酶都參與了防止免疫 系統(tǒng)攻擊自體組織的過(guò)程。,二、 泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解與人體免疫,1、泛素蛋白在天然免疫（天然免疫是我們與生俱來(lái)的一種非常有效的免疫機(jī)制，它是人體抵御外來(lái)侵襲的第一道防線。）中的作用。 2、泛素化修飾途徑在獲得性免疫機(jī)制（獲得性免疫機(jī)制是受到能表達(dá)各種抗原受體的T細(xì)胞和B細(xì)胞調(diào)控的一種機(jī)體免疫機(jī)制）中的作用 3、泛素修飾系統(tǒng)在自身免疫機(jī)制中的作用,泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解的研究展望,對(duì)此項(xiàng)內(nèi)容的研究可以幫助我們從分子水

12、平來(lái)理解一些重要的生化過(guò)程, *細(xì)胞分裂 *DNA 的修復(fù) *基因復(fù)制 *新生蛋白質(zhì)的質(zhì)量控制 *解釋免疫系統(tǒng)的工作方式, *探索一些疾病的發(fā)生機(jī)理,（癌癥）,泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解的研究展望,泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解過(guò)程在生物體內(nèi)的作 用非常重要。細(xì)胞內(nèi)無(wú)用的蛋白質(zhì)，細(xì)胞本身合 成的錯(cuò)誤的蛋白質(zhì),都要通過(guò)此途徑來(lái)降解。另外 對(duì)癌細(xì)胞蛋白質(zhì)的降解也有很大的作用。目前,在 世界各地的很多實(shí)驗(yàn)室中,科學(xué)家在艱苦不懈地發(fā) 現(xiàn)和研究與這一降解過(guò)程相關(guān)的新功能。未來(lái)癌 癥的克服或許要用到泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解過(guò)程中 的去泛素化這一生理機(jī)能。,走你,泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解與癌癥,MCL1是維持祖細(xì)胞和干細(xì)胞多能性的重要

13、基因，并且在泛素化的過(guò)程中MCL1對(duì)BCL2(與細(xì)胞凋亡有關(guān))前體存活也具有重要的意義。過(guò)高的MCL1表達(dá)量會(huì)促進(jìn)癌癥細(xì)胞對(duì)化療產(chǎn)生抗藥性，并且能促使癌癥復(fù)發(fā)。而關(guān)于MCL1過(guò)量表達(dá)的機(jī)制卻了解不多。在本研究中，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)去泛素化酶USP9X具有穩(wěn)定MCL1表達(dá)，維持癌細(xì)胞穩(wěn)定的功效。USP9X能結(jié)合在MCL1上，并停止Lys48連接的多聚泛素化鏈反應(yīng)。,泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解與癌癥,在淋巴瘤和B細(xì)胞淋巴瘤中，增加USP9X的表達(dá)量可促進(jìn)MCL1蛋白的表達(dá)量。USP9X為廣泛表達(dá)的一個(gè)基因，其編碼蛋白為泛素水解酶。此外，研究發(fā)現(xiàn)USP9X過(guò)量表達(dá)的患者往往預(yù)后不良，敲除USP9X可增加MCL1

14、的泛素化活性，可有效改變MCL1的表達(dá)。這些結(jié)果都表明，USP9X是癌癥患者預(yù)后的評(píng)價(jià)標(biāo)志，也可能是一個(gè)新的癌癥治療靶位。去泛素化可能是癌細(xì)胞維持穩(wěn)定的機(jī)制。（摘自nature ）,針對(duì)泛素修飾系統(tǒng)的腫瘤治療方案,1. 泛素連接系統(tǒng)是致癌信號(hào)通路的重要治療靶標(biāo) 2. 針對(duì)泛素連接酶的治療方法 3. E3連接酶與腫瘤血管形成之間的關(guān)系 4. 針對(duì)抗凋亡蛋白 5. 去泛素化酶在腫瘤進(jìn)展中的作用 6. 針對(duì)腫瘤細(xì)胞的蛋白酶體 7. 非降解途徑的泛素化修飾作用與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系 8. 干擾泛素蛋白識(shí)別過(guò)程 9. SUMO修飾過(guò)程與癌癥的關(guān)系 10. 未來(lái)還將面臨的挑戰(zhàn),參考文獻(xiàn),1、化學(xué)教育2004

15、 年第 11 期泛素調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)降解 2004 年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)簡(jiǎn)介 李炎武 譚衛(wèi)兵 鄺雪英 張偉 2 、臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志 2008 Dec; 24 (6) 去泛素化酶的研究及其進(jìn)展 王素霞 ,劉 媛 ,吳慧娟 ,張志剛 3、生命奧妙泛素化途徑與人體免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié) Sep 21, 2010 2 4、 Ubiquitin-Mediated Proteolysis in Learning and Memory Daniel G. Chain, James H. Schwartz* and Ashok N. Hegde CommentsMolecular Neurobiology Copyright

16、 5、The Ubiquitin-Proteasome System: Death of Proteins is Required for Life of Cells 6、BULL ETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY第 24 卷 第 1 期 2008 年 1 月泛素2蛋白酶體系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)、 作用和調(diào)控機(jī)制 金偉軍,姚祥春,呂美巧,張禮星 (,參考文獻(xiàn),7、Progress in modern biomedicine 2008 vol.8 No.9 泛素-蛋白酶體途徑及其生物學(xué)作用的研究進(jìn)展 郭 卉 張雪竹 8、Journal of International Pharm

17、aceutical Research 2009 Oct；36(5) 蛋白酶體抑制劑的研究進(jìn)展 牟科，付翌秋，徐萍 9、藥學(xué)學(xué)報(bào) Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44 (12): 13131319 泛素-蛋白酶體及其抑制劑的分類與合成 李 景, 張大永 吳曉明 10、遺 傳 HEREDITAS (Beijing) 28(12): 15911596, 2006 專論與綜述 DOI: 10.1360/yc-006-1591 泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解與腫瘤發(fā)生 李艷鳳, 張 強(qiáng), 朱大海,參考文獻(xiàn),11、/wiki/%E6%B3%9B%E7%B4%A0 12、 13、Mark Hochstrasser. (2009) Orig