動物細(xì)胞培養(yǎng)及核移植

動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、單克隆抗體動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。提問：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交閱讀思考：為什么要進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)？什么是動物細(xì)胞培養(yǎng)？一動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。思考：動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程是怎樣的呢？閱讀思考：2為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)？怎樣分散？3用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？5什么是細(xì)胞貼壁和細(xì)胞接觸抑制？6什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？1.動物細(xì)胞培養(yǎng)室一般取什么樣的組織、器官中的細(xì)胞，為什么？4.胰蛋白酶分解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)嗎？如何處理？3、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶(膠原蛋白酶）10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官剪碎組織分散成單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)無限傳代培養(yǎng)液胰蛋白酶增值減慢討論：多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境知識，思考并討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物資？2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境件？充足的營養(yǎng)氣體無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度和PH動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

4、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長增殖動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清動物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境思考：為什么要加動物學(xué)清？

為什么要加加二氧化碳？含必須氨基酸，激素，其他未知的但動物細(xì)胞生命活動必需的促細(xì)胞生長因子，促貼附生長因子等物質(zhì)維持培養(yǎng)液的PH培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基性質(zhì)原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)、動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞的全能性細(xì)胞群體植物體動物血清植物激素液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基細(xì)胞增殖動物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，下列哪種現(xiàn)象是不可能的（）A．細(xì)胞一直在細(xì)胞懸液中分裂生長B．有少部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限地傳代下去C．有部分細(xì)胞核型會發(fā)生變化D.個(gè)別細(xì)胞會發(fā)生基因突變2、下列過程與細(xì)胞培養(yǎng)無關(guān)的是------------------（）A.檢測有毒物質(zhì)B.生產(chǎn)單克隆抗體C.篩選抗癌藥物D.雜交育種

AD練習(xí)：

我們能否用植物組織培養(yǎng)的方法使動物細(xì)胞發(fā)育成動物個(gè)體？根據(jù)動物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動物細(xì)胞的全能性表達(dá)；把兩種動物的優(yōu)良性狀集合在一塊兒思考：二動物體細(xì)胞核移植技術(shù)

和克隆動物1、概念二、細(xì)胞核移植——將一個(gè)動物的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組發(fā)育成新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動物個(gè)體。2、結(jié)果：3、原理：克隆動物動物細(xì)胞核的全能性4、種類（體）細(xì)胞核移植（胚胎）細(xì)胞核移植（難度較高）5、（體）細(xì)胞核移植的過程Ａ綿羊Ｂ綿羊乳腺細(xì)胞卵細(xì)胞重組胚胎C母綿羊子宮多莉羊克隆羊多利的培育過程細(xì)胞核移植胚胎移植(減Ⅱ中期卵母細(xì)胞)早期核移植技術(shù)過程取供體體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)共體細(xì)胞卵母細(xì)胞（減２中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入電刺激重組細(xì)胞重組胚胎胚胎移植代孕母體新個(gè)體(與母體相同的個(gè)體)電刺激鈣離子載體乙醇蛋白酶抑制劑激活重組細(xì)胞完成細(xì)胞分裂和發(fā)育完成教材P49面討論題應(yīng)用前景1、加快家畜遺傳改良進(jìn)程2、保護(hù)頻危物種3、利用轉(zhuǎn)基因克隆生物反應(yīng)器生產(chǎn)生物蛋白4、克隆器官移植供體此外：對研究胚胎發(fā)育及衰老過程；追蹤疾病的發(fā)展過程及治療都有重要作用前景存在問題成功率低存在健康問題克隆動物食品的安全問題許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。中國自主完成的首批成年體細(xì)胞克隆牛在山東曹縣陸續(xù)降生?？寺∨Ｓ?個(gè)母親,A牛提供細(xì)胞核即供體細(xì)胞,B牛提供去除細(xì)胞核的卵細(xì)胞即受體細(xì)胞,兩種細(xì)胞在電脈沖的刺激下融合之后,通過細(xì)胞分裂形成早期胚胎,再將這個(gè)胚胎植入C牛子宮內(nèi)。請回答下列問題:

(1)培育出的克隆牛幾乎就是 牛復(fù)制品,這是因?yàn)榭刂婆Ｐ誀钸z傳的物質(zhì)主要存在于___________中。(2)克隆牛的培育成功說明了_____________________________。

A(供核牛)細(xì)胞核

體細(xì)胞的細(xì)胞核幾乎具有發(fā)育為新個(gè)體的全部遺傳信息

練習(xí)小結(jié)：

動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)過程培養(yǎng)條件應(yīng)用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)

和克隆動物過程應(yīng)用前景存在問題完成課后思考與討論：P50面練習(xí)：1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)

A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

D4.動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）A.培養(yǎng)基不同；B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行；C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。A2.用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強(qiáng)D3.下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是A.培養(yǎng)基成分不同B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行C.動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能D.動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株A4.在克隆多利羊的過程中，下列哪項(xiàng)技術(shù)沒有運(yùn)用到A.細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)B.細(xì)胞核移植C.胚胎移植技術(shù)D.基因工程技術(shù)D5.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細(xì)看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細(xì)胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實(shí)施細(xì)胞工程ａ時(shí)，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細(xì)胞也具有

。核移植胚胎移植

卵細(xì)胞全能性較高白色遺傳物質(zhì)主要來自白面綿羊全能性為什么細(xì)胞培養(yǎng)要分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)？怎樣分散？1.成塊的組織中細(xì)胞與細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生長和增值。2.從健康動物體內(nèi)取出組織塊，剪碎，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要成分是什么？用胃蛋白酶行嗎？1.在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。2.動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。動物細(xì)胞生長特性：細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？傳代培養(yǎng)的細(xì)胞具有什么特點(diǎn)？原代培養(yǎng)：將動物組織用胰蛋白酶處理成單個(gè)細(xì)胞，配制成一定濃度的懸浮液，放入培養(yǎng)瓶中在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的過程傳代培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞越來越多，用胰蛋白酶處理使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，配制成懸浮液，分瓶培養(yǎng)的過程1．原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念

從機(jī)體上獲取的組織，通過酶或機(jī)械方法分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在首次傳代前的培養(yǎng)一般稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的最大優(yōu)點(diǎn)是：組織細(xì)胞剛脫離機(jī)體，生物性狀尚未發(fā)生較大變化，在一定程度上能夠反映體內(nèi)的狀態(tài)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞在生長、繁殖一定時(shí)間后，由于空間不足或細(xì)胞密度過大導(dǎo)致營養(yǎng)枯竭，會影響細(xì)胞的生長，因此需要進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，即傳代或稱為傳代培養(yǎng)，也就是將細(xì)胞按1：2~1：4的比例傳代。但嚴(yán)格說來，不論在進(jìn)行傳代時(shí)稀釋與否，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另一個(gè)培養(yǎng)瓶即稱為傳代培養(yǎng)。

傳代代數(shù)與細(xì)胞的世代（增殖代數(shù)）并不是同一個(gè)概念。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，所說的“第10代細(xì)胞”，僅指該細(xì)胞已經(jīng)傳代10次；細(xì)胞傳一代后，一般能倍增3~6次，經(jīng)過三個(gè)階段，即潛伏期、指數(shù)生長期和平臺期。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到平臺期時(shí)，就需要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，否則細(xì)胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

贈送精美圖標(biāo)1、字體安裝與設(shè)置如果您對PPT模板中的字體風(fēng)格不滿意，可進(jìn)行批量替換，一次性更改各頁面字體。在“開始”選項(xiàng)卡中，點(diǎn)擊“替換”按鈕右側(cè)箭頭，選擇“替換字體”。（如下圖）在圖“替換”下拉列表中選擇要更改字體。（如下圖）在“替換為”下拉列表中選擇替換字體。點(diǎn)擊“替換”按鈕，完成。402、替換模板中的圖片模板中的圖片展示頁面，您可以根據(jù)需要替換這些圖片，下面介紹兩種替換方法。方法一：更改圖片選中模版中的圖片（有些圖片與其他對象進(jìn)行了組合，選擇時(shí)一定要