熒光酶素報(bào)告基因檢測試劑盒

關(guān)鍵詞：雙熒光素酶,RNA,靶基因干貨|小小螢火蟲點(diǎn)亮的科學(xué)奧秘——雙熒光素酶報(bào)告基因家人們，雙熒光素酶真的有這么神奇嗎？想驗(yàn)證miRNA與靶基因的作用?——雙螢光素酶報(bào)告基因檢測想了解miRNA和lncRNA/circRNA的靶向互作?——雙螢光素酶報(bào)告基因檢測想知道轉(zhuǎn)錄因子對下游基因的作用?——雙螢光素酶報(bào)告基因檢測沒錯(cuò)，雙螢光素酶體系就是這么的強(qiáng)大!雙熒光素酶報(bào)告基因通常以螢火蟲熒光素酶為報(bào)告基因，以海腎熒光素酶為內(nèi)參基因。所構(gòu)成的報(bào)告系統(tǒng)具有檢測迅速、靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍廣、無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于基因調(diào)控、非編碼RNA靶向互作等研究領(lǐng)域。今天，我們就來重點(diǎn)聊聊這個(gè)話題。首先，帶大家來了解一下熒光霉素的背景知識。熒光素酶（Luciferase）自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱；通過氧化底物螢光素，產(chǎn)生熒光。螢火蟲熒光素酶來源于北美螢火蟲。海腎熒光素酶來源于海腎。雖然熒火蟲和海腎熒光素酶都具有具有完全不同的進(jìn)化起源，因而其酶結(jié)構(gòu)和底物要求完全不同。在ATP，鎂，及氧存在時(shí)，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于腔腸素。雙熒光素酶檢測目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的原理是什么呢？將報(bào)告質(zhì)粒與相應(yīng)的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞，適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞。加入螢火蟲熒光素酶檢測試劑時(shí)產(chǎn)生螢火蟲熒光信號，代表螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因(“實(shí)驗(yàn)”報(bào)告基因)。再加入海腎熒光素酶檢測試劑，將上述反應(yīng)淬滅，同時(shí)激活海腎熒光素酶的熒光反應(yīng)(“對照”報(bào)告基因的活性)，同時(shí)進(jìn)行第二次測量。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對感興趣的調(diào)控元件的影響。該試劑盒具有優(yōu)勢特點(diǎn)如下：檢測迅速：從樣本裂解到檢測完成，只需10-15分鐘；靈敏度高：基于化學(xué)發(fā)光法原理，通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達(dá)。檢測范圍廣：對不同表達(dá)量的細(xì)胞樣本均可以檢測。無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾等特點(diǎn)。小編經(jīng)過沙里淘金，不斷傾聽用戶的聲音，為大家收集了一批雙熒光素酶報(bào)告基因的常見問題，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。Q1：請問該產(chǎn)品對酶標(biāo)儀的靈敏度有要求嗎？一般用輝光還是閃光？ A1：該產(chǎn)品對酶標(biāo)儀的靈敏度沒有要求，用的是輝光型。Q2：加完螢火蟲熒光試劑檢測到值之后，海腎熒光素酶檢測試劑加入到螢火蟲檢測試劑的孔里嗎？還是將海腎熒光素酶檢測試劑加入新的只加細(xì)胞裂解液的孔里呢? A2：在同一個(gè)孔內(nèi)檢測，即先檢測螢火蟲熒光素酶活性，后檢測海腎熒光素酶活性。Q3：如果只想測海腎熒光素水平，裂解后能不能跳過熒光素酶的步驟直接加海腎熒光素酶工作液？ A3：可以的。Q4：海腎螢光素酶檢測底物的作用是什么？ A4：該底物的作用不但抑制螢火蟲螢光素酶活性，還能檢測海腎熒光素酶活性。Q5：樣品裂解后，加入96孔板中的步驟，需要在冰上操作嗎？ A5：不需要在冰上操作的，建議常溫操作即可。Q6：Luminometer和熒光分光光度計(jì)有何不同？A6：熒光分光光度計(jì)檢測的樣品本身不能發(fā)光，樣品需要由特定波長的激發(fā)光激發(fā)，然后才能產(chǎn)生熒光并被熒光分光光度計(jì)檢測。Luminometer檢測的樣品本身可以發(fā)光，不需要激發(fā)光進(jìn)行激發(fā)。也就是說luminometer是檢測化學(xué)發(fā)光(螢光)的儀器。有些型號的熒光分光光度計(jì)也具有l(wèi)uminometer的功能，即也可以檢測化學(xué)發(fā)光。您所使用的熒光分光光度計(jì)能否用于化學(xué)發(fā)光的測定請仔細(xì)閱讀該儀器的說明書。相關(guān)產(chǎn)品推薦產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格雙螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒KTA8010100T/1000TSuperKine?Lipo3.0高效轉(zhuǎn)染試劑BMU111-CN0.5mL/1.5mL/1.5mL×5歡迎廣大“蝌蚪”們多多關(guān)注Abbkine公眾號，還會有更多科研驚喜等著大家喲。同時(shí)，Abbkine的技術(shù)專家為了給廣大讀者提供學(xué)習(xí)生物知識的平臺，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實(shí)驗(yàn)的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學(xué)的讀者持續(xù)關(guān)注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學(xué)和細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學(xué)研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推動(dòng)者。我們?yōu)槟峁┑鞍缀兔庖哐芯坑脩糇钕矏鄣漠a(chǎn)品，從免疫學(xué)基礎(chǔ)產(chǎn)品，如蛋白提取定量，到免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參標(biāo)簽抗體、一抗及二抗等；細(xì)胞研究用戶最喜愛的產(chǎn)品，從用于檢測