2010年版藥典附錄無菌檢查和微生物限度檢查方法增修定內(nèi)容課件

2010年版藥典附錄無菌檢查和微生物

限度檢查方法增修定內(nèi)容2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

起草的指導(dǎo)思想

一、以科學(xué)發(fā)展觀為統(tǒng)領(lǐng)，服務(wù)于資源節(jié)約型社會、環(huán)境友好型社會的要求；落實科學(xué)監(jiān)管理念，著力解決發(fā)展中的問題。二、與時俱進(jìn)，廣泛吸納先進(jìn)技術(shù)與成果；堅持自主與創(chuàng)新；積極推進(jìn)藥品標(biāo)準(zhǔn)化戰(zhàn)略，提高我國藥品標(biāo)準(zhǔn)總體水平，著力提升《中國藥典》在國際社會中的地位和作用，提高綜合競爭力，促進(jìn)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，為構(gòu)建社會主義和諧社會作出貢獻(xiàn)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

2010年版無菌檢查法增修訂內(nèi)容2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

一、進(jìn)一步確定了無菌檢查法的定義：無菌檢查法系用于檢查要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。

二、進(jìn)一步明確了無菌檢查保障

1、檢驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染

，但采用的措施不得影響微生物的生長。2、無菌檢查要進(jìn)行環(huán)境檢測增加了日常檢驗還需進(jìn)行環(huán)境檢測。

2、無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

三、培養(yǎng)基增修訂內(nèi)容⒈刪去硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的使用范圍(用于培養(yǎng)好氧菌、厭氧菌及用于培養(yǎng)真菌)

⒉刪去選擇性培養(yǎng)基使用的表面活性劑種類對氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等。理由經(jīng)驗證試驗選擇適宜的中和劑、滅活劑和表面活性劑

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培養(yǎng)基適用性檢查增修訂內(nèi)容

3、培養(yǎng)基靈敏度試驗

⑴刪除菌懸液制備中黑曲霉菌懸液的制備“（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細(xì)吸管）”

修改為“用適宜的方法吸出孢子懸液”。

⑵增加在稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。

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四、試驗稀釋液、沖洗液增修訂為

⒈

增加根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。⒉試驗中使用的中和劑、滅活劑和表面活性劑除證明其有效性外還應(yīng)證明對污染的微生物無影響修改為無毒性。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂五、方法驗證試驗增修訂內(nèi)容⒈試驗菌株

刪除銅綠假單胞菌增加大腸埃希菌及大腸埃希菌菌液的制備(同金黃色葡萄球菌)。⒉薄膜過濾法供試品用量將規(guī)定量供試品按薄膜過濾法過濾

修改為取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂六、供試品的無菌檢查增修訂內(nèi)容⒈檢驗量

直接接種法除另有規(guī)定外，每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定刪除采用直接接種法時的規(guī)定。⒉陰性對照

無菌試驗中若使用表面活性劑等應(yīng)證明其有效性且對微生物生長無影響修改為無毒性。

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⒊薄膜過濾法

①增加了抗生素供試品濾膜選擇的指導(dǎo)應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。②若需要沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且沖洗量不宜過大修改為總沖洗量不得超過1000ml。

⑴水溶液供試品含抑菌成分需用適量的沖洗液沖洗膜修改為所用的沖洗量、沖洗方法同方法驗證試驗.

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⑵裝有藥物的注射器供試品取規(guī)定量，刪去裝上無菌針頭….修改為排出注射器中的內(nèi)容物至無菌容器中，若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解，或非水溶性制劑供試品項下方法操作。

⑶無菌氣霧劑供試品供試液的制備將供試品置冰室修改為置至少-20℃的冷凍室約1小時。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⒋直接接種法刪除β－內(nèi)酰胺類或磺氨類供試品。

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表1、表2、表3增修訂表1（第3列）接種每種培養(yǎng)基改為所需的最少檢驗數(shù)量

表2

（表題）上市抽驗樣品（液體制劑）的最少檢驗數(shù)量修改為液體制劑最少檢驗量及上市抽驗樣品的最少檢驗數(shù)量第二列每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量修改為每支供試品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量第三列最少檢驗數(shù)量（瓶或支）≤1全量２0①

修改為供試品最少檢驗數(shù)量（瓶或支）１0①

注①每種培養(yǎng)基各接種１０支供試品修改為若供試品每個容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的最少檢驗數(shù)量加倍。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

表3（表題）將上市抽驗樣品（固體制劑）的最少檢驗量

修改為固體制劑最少檢驗量及上市抽驗樣品的最少檢驗數(shù)量”第三列最少檢驗數(shù)量、≤1全量２0①

修改為供試品最少檢驗數(shù)量（瓶或支）

１0①

注①每種培養(yǎng)基接種１０支培養(yǎng)基修改為若供試品每個容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，那么表中的最少檢驗數(shù)量加倍。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

微生物限度檢查增修定內(nèi)容2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

修改內(nèi)容

1、培養(yǎng)條件控制菌培養(yǎng)溫度35℃～37℃修改為30℃～35℃(細(xì)菌、控制菌培養(yǎng)溫度相同)。

修改理由此溫度適于所有中溫菌生長，一些高溫菌在該溫度下也可以生長。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

增修訂內(nèi)容

2、結(jié)果報告特殊品種可以最小包裝單位報告特殊品種包括∶藥典規(guī)定微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。還有一些貴重藥品也應(yīng)考慮檢驗量。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂3、檢驗量增修訂內(nèi)容

⑴中藥膜劑檢驗量50cm2

修改為100cm2

。

⑵沙門菌檢驗量修改為檢驗量為20g或20ml并注明（其中10g用于陽性對照）。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

4、供試液的制備增修訂內(nèi)容

⑴供試品檢查時使用表面活性劑應(yīng)證明其對微生物生長和存活無影響修改為無毒性。⑵供試液的制備若需加溫時，可采用其他經(jīng)驗證的方法，但應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑶新增貼劑供試液制備

供試液的制備

⑴經(jīng)驗證方法制備成供試液在無菌環(huán)境進(jìn)行。⑵避免粘貼面粘合在一起。⑶置于含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀釋劑中，制成供試液。⑷充分振搖。⑸也可采用以其他適宜的方法制備成供試液。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⑷具抑菌活性的供試品增修訂內(nèi)容

刪除應(yīng)消除供試液的抑菌活性修改為當(dāng)供試品具有抑菌活性時，應(yīng)盡量選擇操作簡便、快速的方法，應(yīng)避免損傷供試品中污染的微生物。在供試品溶液性狀允許的情況下，應(yīng)盡量選用薄膜過濾法。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

①離心沉淀集菌法

兩次離心修改為一次離心；500轉(zhuǎn)/分離心，不超過3分鐘，取全部上清液用于檢查。

影響因素

供試品污染菌特性

適用范圍

⒈僅使用于微生物限度檢查供試液的制備。⒉盡量避免使用，不可使用快速離心。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)增修訂內(nèi)容

⒈新增計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查⑴菌種

大腸埃希菌（Escherichiacoli）〔CMCC（B）44102〕

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕

枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕

白色念珠菌（Candidaalbicans）〔CMCC（F）98001〕

黑曲霉（Aspergillusniger）〔CMCC（F）98003〕

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂①

增加了菌懸液的制備及保存條件。菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2～8℃可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，按規(guī)定條件培養(yǎng)計數(shù)，同時用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗。

②增加了對照培養(yǎng)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

2.新增常見干擾物的中和劑和滅活方法參見表1常見干擾物的中和劑或滅活方法

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6、供試品檢查增修訂內(nèi)容

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑴平皿法刪去采用平皿法進(jìn)行菌數(shù)測定時，連續(xù)2～3個稀釋級的供試液。

修改為按計數(shù)方法的驗證試驗確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備。

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⑵培養(yǎng)時間修改內(nèi)容除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng)48小時改為3天，霉菌、酵母菌培養(yǎng)72小時改為5天，必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至7天進(jìn)行菌落計數(shù)并報告。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂菌數(shù)報告規(guī)則增修訂內(nèi)容

⒈若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。⒉細(xì)菌、酵母菌和霉菌平均菌落數(shù)在30～300、30～100之間的稀釋級修改為選取菌落數(shù)小于300cfu和100cfu的稀釋級作為菌數(shù)報告的依據(jù)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑶薄膜過濾法增修訂內(nèi)容

新增內(nèi)容采用其它直徑的濾膜，沖洗量應(yīng)相應(yīng)的進(jìn)行調(diào)整（如使用膜直徑增大沖洗液量也應(yīng)相應(yīng)增加，可保證沖洗液覆蓋整個濾膜）。

刪去每片濾膜的總過濾量不宜過大，修改為總沖洗量不得超過1000ml。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

7、控制菌檢查增修訂

⑴增加控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查；檢查項目包括促生長、抑制及指示能力檢查參照表2

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⑵新增培養(yǎng)基適用性檢查方法①液體培養(yǎng)基促生長能力檢查。②固體培養(yǎng)基促生長能力檢查。③培養(yǎng)基抑制能力檢查。④液體培養(yǎng)基指示能力檢查。⑤固體培養(yǎng)基指示能力檢查。

試驗結(jié)果與對照培養(yǎng)基比較2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長、抑制及指示能力檢查控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗菌株大腸埃希菌膽鹽乳糖促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌

MUG促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌大腸菌群乳糖膽鹽促生長能力大腸埃希菌抑制能力金黃色葡萄球菌乳糖發(fā)酵促生長能力+指示能力大腸埃希菌曙紅亞甲藍(lán)或麥康凱促生長能力+指示能力大腸埃希菌

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂沙門菌營養(yǎng)肉湯促生長能力乙型付傷寒沙門菌四硫磺酸鈉亮綠促生長能力乙型付傷寒沙門菌抑制能力金黃色葡萄球菌膽鹽硫乳瓊脂或沙門、志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基促生長能力+指示能力乙型付傷寒沙門菌三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基指示能力乙型付傷寒沙門菌銅綠假單膽鹽乳糖促生長能力銅綠假單胞菌胞菌抑制能力金黃色葡萄球菌溴化十六烷基三促生長能力銅綠假單胞菌甲銨瓊脂抑制能力大腸埃希菌綠膿菌素測定用培養(yǎng)基促生長能力+指示能力銅綠假單胞菌金黃色葡亞碲酸鹽肉湯促生長能力金黃色葡萄球菌萄球菌抑制能力大腸埃希菌卵黃氯化鈉瓊脂促生長能力+指示能力金黃色葡萄球菌或甘露醇鹽瓊脂抑制能力大腸埃希菌梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長能力生孢梭菌哥倫比亞瓊脂促生長能力生孢梭菌白色念沙氏葡萄糖肉湯促生長能力白色念珠菌珠菌沙氏葡萄糖瓊脂促生長能力+指示能力白色念珠菌念珠菌顯色培養(yǎng)基促生長能力+指示能力白色念珠菌吐溫80玉米瓊脂促生長能力+指示能力白色念珠菌2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⑶控制菌檢查法增修訂內(nèi)容

①疑似致病菌的確證微生物控制菌檢查中沒有規(guī)定進(jìn)一步確證疑似致病菌的方法。選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法。如《伯杰氏細(xì)菌鑒定手》。

②控制菌檢查方法驗證刪去陰性菌對照組。

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③大腸菌群檢查用膽鹽乳糖培養(yǎng)基改為乳糖膽鹽。

④改梭菌檢查用庖肉培養(yǎng)基為梭菌增菌培養(yǎng)基。⑤改梭菌培養(yǎng)時間72～96小時為48小時。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

增加了白色念珠菌檢驗方法

增菌培養(yǎng)沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基。分離培養(yǎng)劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

鑒定試驗

典型菌落⒈沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基菌落呈乳白色偶見淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，時間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。⒉念珠菌顯色培養(yǎng)基

菌落呈綠色或翠綠色菌落生長。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⒋確認(rèn)試驗取1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)物進(jìn)行染色，鏡檢及芽管試驗。

結(jié)果判斷非革蘭陽性菌，顯微鏡下未見厚膜孢子、假菌絲、芽管判未檢出白色念珠菌。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

新增微生物限度檢查法指導(dǎo)原則一、抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則二、藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則三、微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則四、藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂一、抑菌劑效力檢查法指導(dǎo)原則⒈指導(dǎo)原則的目的⑴是為測定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評價最終產(chǎn)品的抑菌效力及生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑的確定提供指導(dǎo)。⑵為防止藥品由于微生物污染而引起變質(zhì)，對服用者造成不良反應(yīng)，在藥品生產(chǎn)過程中加入一定劑量的抑菌劑。⑶抑菌劑不能用于替代藥品生產(chǎn)的GMP管理，不能作為非滅菌制劑降低微生物污染的唯一途徑，也不能作為控制多劑量包裝制劑滅菌前的生物負(fù)載的手段。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⒉使用范圍及原則

⑴使用范圍如果藥物本身不具有充分的抗菌活性，應(yīng)根據(jù)制劑特性添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在正常貯藏和使用過程中可能發(fā)生的微生物污染和繁殖，對患者造成傷害。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑵使用原則

所有抑菌劑都具有一定的毒性，添加抑菌劑時應(yīng)注意以下原則:

①抑菌劑的用量應(yīng)為最低有效量。②具有抗菌活性的制劑應(yīng)確認(rèn)其抗菌效力。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

③應(yīng)驗證最終容器中的抑菌劑效力在效期內(nèi)不因貯藏條件而降低。④本試驗方法和抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)用于包裝未啟開的成品制劑。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⒊抑菌劑抑菌效力的測定

⑴供試品的分類分為四類，但對于一些抗酸性制劑和含活生物制劑應(yīng)考慮會降低有益菌的生物活性。見表12010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂表1產(chǎn)品分類

類別藥品

1類注射劑、其他非腸道制劑，包括乳劑、耳用制劑、無菌鼻用制劑及眼用制劑

2類局部給藥制劑、非滅菌鼻用制劑及用于黏膜的乳劑

3類口服非固體制劑（非抗酸制劑）

4類非固體抗酸制劑2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑵培養(yǎng)基①培養(yǎng)基的制備胰酪胨大豆肉湯瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

②培養(yǎng)基的適用性檢查同控制菌培養(yǎng)基的適用性檢查

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑶抑菌劑效力測定方法

①菌種菌液制備

菌種

同培養(yǎng)基適用性檢查，制劑中常見的污染微生物也可作為試驗菌。

菌液制備

制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu的菌懸液。

②供試品接種影響因素給予指導(dǎo)

容器的材質(zhì)、形狀、體積、封口方式及容器的PH等分別給予了指導(dǎo)。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

③接種菌量接種菌液的體積不得超過供試品體積的0.5%～1%。

④放置

20～25℃，避光貯存，貯存溫度的變化應(yīng)盡可能控制在最小范圍，并防止被污染。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑷存活菌數(shù)測定

采用經(jīng)驗證的方法進(jìn)行試驗，計算1ml(g)供試品各試驗菌所得的菌數(shù)及各間隔時間的菌數(shù)，并換算成lg值。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑸結(jié)果判斷結(jié)果符合表3要求，可判斷該產(chǎn)品抑菌效力符合規(guī)定。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

表3抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)

1類供試品

細(xì)菌7天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天菌數(shù)下降不少于

3.0lg,14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，7、14、28天菌數(shù)均不增加。

2類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于2.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

3類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于1.0lg，14天到28天菌數(shù)不增加。真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

4類供試品細(xì)菌，真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。

注：1、表中“不增加”是指對前一個測定時間，試驗菌增加的數(shù)量不超過0.5lg。

2、0時菌數(shù)(初試值)供試品加入試驗菌，搖勻，立即取樣檢查，培養(yǎng)，計數(shù)，為0時菌數(shù)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂二、藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則⒈目的

⑴是為所采用的試驗方法能否替代藥典規(guī)定的方法用于藥品微生物的檢驗提供指導(dǎo)。⑵在控制藥品微生物質(zhì)量中，需要采用替代方法時，應(yīng)進(jìn)行方法的驗證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⒉微生物檢驗的類型及驗證參數(shù)

藥品微生物檢驗方法主要分兩種類型

定性試驗定量試驗⒊生物試驗的特殊性抽樣誤差操作誤差稀釋誤差培養(yǎng)誤差計量誤差計數(shù)誤差藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則不完全宜于微生物替代方法的驗證。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

表1、不同微生物檢驗類型驗證參數(shù)表參數(shù)定性檢驗定量檢驗準(zhǔn)確度－＋精密度－＋專屬性＋＋檢測限＋－定量限－＋線性－＋范圍－＋耐用性＋＋重現(xiàn)性＋＋注：＋表示需要驗證的參數(shù)－表示不需要驗證的參數(shù)逐項按替代方法驗證的要求進(jìn)行驗證和評價以便操作者了解方法的關(guān)鍵操作點2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⒋替代方法驗證的一般要求

⑴適用性驗證前，對替代方法有一個全面的了解；

由替代方法的研發(fā)者提供，或由方法使用者完成。⑵驗證應(yīng)至少使用2個批號的樣品，每批樣品應(yīng)平行進(jìn)行至少3次獨立實驗。⑶在開展各參數(shù)驗證時，除規(guī)定的菌株外，還應(yīng)根據(jù)替代方法及樣品的特點增加相應(yīng)的菌株。

2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂三、藥品微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則目的為更好的應(yīng)用微生物限度檢查法及限度標(biāo)準(zhǔn)的合理執(zhí)行提供指導(dǎo)。

用途用于判斷非規(guī)定滅菌制劑及原料、輔料是否符合藥典的規(guī)定，也可用于指導(dǎo)制劑、原料、輔料的微生物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，及指導(dǎo)生產(chǎn)過程中間產(chǎn)品微生物質(zhì)量的監(jiān)控。本指導(dǎo)原則將對標(biāo)準(zhǔn)和方法中的特定內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用做進(jìn)一步的說明。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

1.微生物限度檢查過程中，如需要使用表面活性劑、滅活劑及中和劑，應(yīng)對其用量、有效性、無毒性進(jìn)行確認(rèn)，無毒性確認(rèn)，試驗的菌株應(yīng)包括產(chǎn)品中可能污染的微生物。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

2.檢驗方法的選擇

供試液制備應(yīng)盡量選擇微生物限度檢查法中操作簡便、快速的方法，且應(yīng)避免損傷供試品中污染的微生物。對于抑菌作用較強的供試品，在供試品溶液性狀允許的情況下，應(yīng)盡量選用薄膜過濾法進(jìn)行試驗。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂3.供試液制備

本指導(dǎo)原則對離心沉淀法使用范圍、方法及對檢驗結(jié)果影響的因素進(jìn)行了分析和指導(dǎo)

4.驗證試驗存在的問題及處理方法自藥典收載方法驗證以來在實施過程中存在一些具體問題，對這些存在問題進(jìn)行了指導(dǎo)；進(jìn)行驗證試驗時，因沒有適宜的方法消除供試品中的抑菌作用而導(dǎo)致微生物回收的失敗。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑴處理方法

①應(yīng)采用能使微生物生長的更高稀釋級供試液進(jìn)行方法驗證試驗。②若采用允許的最高稀釋級供試液進(jìn)行驗證試驗還存在一株或多株試驗菌的回收率達(dá)不到要求。

處理方法

應(yīng)選擇回收情況最接近要求的方法進(jìn)行供試品的檢測。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂③在以上情況下，生產(chǎn)單位或研制單位應(yīng)進(jìn)行全面的風(fēng)險評估以保證檢驗方法的可靠性，從而保證產(chǎn)品質(zhì)量。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂５.控制菌的確證沒有規(guī)定進(jìn)一步確證疑似致病菌的方法。僅規(guī)定若供試品檢出疑似致病菌，確證的方法應(yīng)選擇已被認(rèn)可的菌種鑒定方法。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⒍微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

該指導(dǎo)原則對標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行中存在的問題進(jìn)行了分析和指導(dǎo)；

⑴明確了微生物限度標(biāo)準(zhǔn)使用范圍

⑵標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行①必檢項目②原則性要求（丸劑、口服片劑、膠囊劑、顆粒劑），應(yīng)對其被微生物污染的風(fēng)險進(jìn)行評估。

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⑶用于手術(shù)、燒傷及嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑應(yīng)符合無菌檢查法要求。

⑷用于創(chuàng)傷程度難以判斷的局部給藥制劑，若沒有證據(jù)證明藥品不存在安全性風(fēng)險則應(yīng)符合無菌檢查法要求。⑸眼用制劑應(yīng)符合無菌檢查法要求。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⑹含動物類原藥材粉的口服中藥制劑要求不得檢出沙門菌。其中的動物類原藥材粉是指除蜂蜜、王漿、動物角、阿膠外的所有動物類原藥材粉，如牡蠣、珍珠等貝類，海蜇、冬蟲夏草、人工牛黃等。

⑺制定合理、安全和嚴(yán)格的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)

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四、藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則

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⒈目的該指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗實驗室的質(zhì)量控制。

⒉藥品微生物的檢驗的對象具特殊性；活的生物、分布不均勻、重現(xiàn)性差必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實驗室規(guī)范要求進(jìn)行試驗。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂⒊藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設(shè)備、文件、實驗記錄、結(jié)果的判斷等。⑴人員從事藥品微生物試驗工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景

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①檢驗人員和管理人員培訓(xùn)

進(jìn)行崗前培訓(xùn)檢驗人員技能培訓(xùn)熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

管理人員

①其專業(yè)技能和經(jīng)驗水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符。不斷接受系統(tǒng)的教育與職責(zé)范圍相關(guān)的培訓(xùn)。②客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評估。

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⒉培養(yǎng)基

培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

該指導(dǎo)原則對培養(yǎng)基的制備、儲存、滅菌及質(zhì)量控制進(jìn)行了指導(dǎo)。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂

⒊菌種

實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，⑴使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。⑵按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。2010年版中國藥典中對無菌和微生物限度的修訂該指導(dǎo)原則對菌種