《畜禽產(chǎn)品中獸藥多殘留高通量篩選檢測(cè) 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》

ICS67.120

X04

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/SZSXXXX—2020

畜禽產(chǎn)品中獸藥多殘留高通量篩選檢測(cè)

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

Highthroughputscreeningdetectionofveterinarydrugresiduesin

livestockandpoultryproductsbyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

（征求意見稿）

2020-XX-XX發(fā)布2020-XX-XX實(shí)施

深圳市深圳標(biāo)準(zhǔn)促進(jìn)會(huì)發(fā)布

T/SZSXXXX-2020

畜禽產(chǎn)品中獸藥多殘留高通量篩選檢測(cè)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了畜禽產(chǎn)品中132種獸藥（磺胺及菌增效劑類22種、氟喹諾酮類19種、苯并咪唑類

17種、大環(huán)內(nèi)酯類9種、β-受體激動(dòng)劑類15種、精神控制類10種、解熱鎮(zhèn)痛類17種、硝基咪唑類6

種、氨苯砜、抗球蟲藥類8種、抗病毒類5種、酰胺醇類抗生素3種）殘留的液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜檢

測(cè)方法。

本文件適用于豬肉、雞肉、牛奶、雞蛋中132種獸藥殘留量的篩查檢測(cè),其他動(dòng)物源性食品可參照

執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)則和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4原理

樣品經(jīng)EDTA和乙腈提取，再用MAS-Q鹽包凈化，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)。

5試劑和材料

注：以下所用的試劑，除特別注明者外均為分析純?cè)噭?；水符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

5.1試劑

5.1.1甲醇，色譜純。

5.1.2乙腈，色譜純。

5.1.3甲酸，色譜純。

5.1.4乙腈。

5.1.5乙二胺四乙酸二鈉。

5.1.6檸檬酸。

5.1.7磷酸氫二鈉。

1

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5.1.8鹽酸。

5.1.9氫氧化鈉。

5.1.10乙酸銨，色譜純。

5.2溶液配制

5.2.10.1mol/L檸檬酸溶液：稱取21.01g檸檬酸（5.1.6），用水溶解，定容至1000mL。

5.2.20.2mol/L磷酸氫二鈉溶液：稱取28.41g磷酸氫二鈉（5.1.7），用水溶解，定容至1000mL。

5.2.3Mcllvaine緩沖溶液：將1000mL0.1mol/L檸檬酸溶液（5.2.1）與625mL0.2mol/L磷酸氫

二鈉溶液（5.2.2）混合，必要時(shí)用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)pH=4.0±0.05。

5.2.40.1mol/LNa2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液：稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉（5.1.5）放入1625mL

Mcllvaine緩沖溶液（5.2.3）中，使其溶解，搖勻。

5.2.5乙腈水溶液：移取30mL乙腈（5.1.2），加入70mL水，混合均勻。

5.2.65mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.385g乙酸銨（5.1.10），用水溶解，定容至1000mL。

5.3獸藥及相關(guān)化學(xué)品標(biāo)準(zhǔn)溶液

5.3.1按照獸藥及相關(guān)化學(xué)品的性質(zhì)，將132種獸藥及相關(guān)化學(xué)品標(biāo)準(zhǔn)品分成A磺胺及菌增效劑類、B

氟喹諾酮類、C苯并咪唑類、D大環(huán)內(nèi)酯類、Eβ-受體激動(dòng)劑類、F精神控制類、G解熱鎮(zhèn)痛類、H硝基

咪唑類、I氨苯砜、J抗球蟲藥類、K抗病毒類、L酰胺醇類抗生素共12組，本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)132種獸藥及相

關(guān)化學(xué)品標(biāo)準(zhǔn)品分組及詳細(xì)化合物信息見附錄A。

5.3.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配置：取適量單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.1），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的溶解度選擇甲醇、乙腈等適宜

溶劑溶解并定容至終濃度為1.00mg/mL，-18℃冷凍保存，有效期為12個(gè)月。

5.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：根據(jù)每種獸藥及相關(guān)化學(xué)品的篩查限，確定其在混合標(biāo)準(zhǔn)中間液中的濃度，

再按獸藥及相關(guān)化學(xué)品組別分別配置12組混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。移取一定量的單個(gè)獸藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.3.2）

于100mL容量瓶中，用甲醇、乙腈等適宜溶劑定容至刻度。混合標(biāo)準(zhǔn)中間液-18℃冷凍保存，有效期

為3個(gè)月。

5.3.4混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)每種獸藥及相關(guān)化學(xué)品的篩查限，確定其在基混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中的濃度。

移取一定量的獸藥混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.3.3），用乙腈水溶液（5.2.5）配成不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

5.4材料

5.4.1凈化鹽包[CleanertMAS-Q（MS-9PA0228）]。1

5.4.2微孔濾膜：0.22μm，通用型。

6儀器和設(shè)備

1)1CleanertMAS-Q是Agela公司產(chǎn)品的商品名稱，給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不是表示對(duì)該

產(chǎn)品的認(rèn)可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。

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6.1液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源(ESI)。

6.2渦旋振蕩器。

6.3高速離心機(jī)。

6.4氮吹儀。

6.5分析天平：感量0.1mg和10mg。

6.6超聲波清洗儀。

7試樣制備與貯存

7.1豬肉、雞肉

從原始樣品取出有代表性樣品約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密

封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于-18℃冷凍避光保存。

7.2牛奶

從原始樣品取出有代表性樣品約500g，充分混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。

將試樣置于0℃～4℃冷藏避光保存。

7.3雞蛋

從原始樣品取出有代表性樣品約500g，去殼后用組織搗碎機(jī)攪拌充分混勻，裝入潔凈容器作為試

樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。將試樣置于0℃～4℃冷藏避光保存。

8分析步驟

8.1提取

準(zhǔn)確稱取勻漿試樣2.5g（精確至0.01g）于50ml具塞離心管中，加入1ml0.1mol/LNa2EDTA-

Mcllvaine緩沖溶液（5.2.4），渦旋15s，再加入9ml乙腈（5.1.4），振蕩10分鐘，超聲20min，9000

r/min離心5min。

8.2凈化

移取5ml上清液，加入凈化鹽包（5.4.1），振搖5min，9000r/min離心5min。移取4ml上清液

于刻度試管中，40℃氮吹至0.5mL以下，用乙腈水溶液（5.2.5）定容至1ml，過0.22μm濾膜（5.4.2），

供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

8.3測(cè)定

8.3.1液相色譜參考條件

液相色譜參考條件如下：

a)色譜柱：BEHC18，1.7μm，100×3.0mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)者；

b)流動(dòng)相：正離子模式：A相：0.05％甲酸5mmol/L乙酸銨溶液；B相：甲醇；

負(fù)離子模式：A相：水；B相：甲醇；

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c)柱溫：40℃；

d)進(jìn)樣量：5.0μL；

e)流動(dòng)相洗脫梯度如表1所示。

表1流動(dòng)相洗脫梯度

正離子模式負(fù)離子模式

時(shí)間/minA(%)B(%)流速mL/min時(shí)間/minA(%)B(%)流速mL/min

0.009730.30.009550.3

0.5080200.30.509550.3

7.0050500.32.505950.3

11.005950.34.505950.3

12.505950.34.609550.3

12.609730.36.009550.3

14.509730.3----

8.3.2質(zhì)譜參考條件

質(zhì)譜參考條件如下所示：

a)離子源：電噴霧離子源；

b)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；

c)質(zhì)譜儀器參數(shù)如表2所示。

表2質(zhì)譜儀器參數(shù)

離子源/氮?dú)庹x子負(fù)離子

電噴霧電壓（IS）5500V-4500V

氣簾氣壓力（CUR）30psi30psi

離子源霧化器溫（TEM）600℃600℃

霧化氣壓力（GS1）50psi50psi

輔助氣壓力（GS2）60psi60psi

d)定性定量離子對(duì)及錐孔電壓（DP）、碰撞能量（CE）見附錄A，典型譜圖見附錄B。

8.4定性檢測(cè)

a)試樣溶液中目標(biāo)化合物色譜峰保留時(shí)間與同批次標(biāo)準(zhǔn)溶液中該目標(biāo)化合物的保留時(shí)間偏差在

±2.5%之內(nèi)，則可以初步判斷試樣中存在該獸藥殘留。

b)試樣溶液中目標(biāo)化合物所監(jiān)測(cè)定性離子均出現(xiàn)，且信噪比大于等于3；試樣溶液中的離子相對(duì)

豐度與空白添加標(biāo)準(zhǔn)溶液中的離子相對(duì)豐度相比，符合表3的要求，則可判定為試樣中存在該種化合物；

試樣溶液中目標(biāo)化合物檢測(cè)濃度大于等于方法篩查限時(shí)判定為陽(yáng)性結(jié)果。

表3試樣溶液中離子相對(duì)豐度的允許偏差范圍

相對(duì)豐度允許偏差（％）

?50±20

?20～50±25

?10～20±30

≤10±50

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9靈敏度

132種獸藥的篩查限見附錄A。

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附錄A

（資料性）

132種化合物基本信息、質(zhì)譜參數(shù)及方法篩查限

132種化合物基本信息、質(zhì)譜參數(shù)及方法篩查限如表A.1所示。

表A.1132種化合物基本信息、質(zhì)譜參數(shù)及方法篩查限

保留時(shí)間方法篩查限

類別序號(hào)藥物名稱英文名稱CAS號(hào)母離子子離子DP/VCE/eV掃描模式

（min）μg/kg

251.1156.0*4022

1磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-93.69ESI+10

251.1924038

256156.0*4022

2磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-03.9ESI+10

2561084032

250.1156.1*4023

3磺胺吡啶Sulfapyridine144-83-24.23ESI+10

250.11084032

265.2156.1*8225

4磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine127-79-74.47ESI+10

265.2172.18225

A.磺胺類及

279.1186.1*6023

抗菌增效劑5磺胺二甲基嘧啶Sulfamethazine57-68-13.76ESI+10

279.11566027

281.1156.0*7525

6磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine1220-83-36.12ESI+10

281.1126.17530

271156.1*6521

7磺胺甲噻二唑Sulfamethizole144-82-15.01ESI+10

2711086536

281.1156.1*7025

8磺胺對(duì)甲氧嘧啶Sulfameter651-06-94.91ESI+10

281.1108.17035

9磺胺氯噠嗪Sulfachloropyridazine80-32-0285.1156.0*5.786522ESI+10

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保留時(shí)間方法篩查限

類別序號(hào)藥物名稱英文名稱CAS號(hào)母離子子離子DP/VCE/eV掃描模式

（min）μg/kg

285.1108.16537

281156.0*7525

10磺胺甲氧噠嗪Sulfamethoxypyridazine80-35-35.4ESI+10

281126.17527

磺胺鄰二甲氧嘧311.1156.1*7030

11Sulfadoxine2447-57-66.33ESI+10

啶311.1108.27037

磺胺間二甲氧嘧311.1156.1*7028

12Sulfadimethoxine122-11-27.92ESI+10

啶311.12187028

254.1156.0*6522

13磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole723-46-65.93ESI+10

254.11086536

268.1156.1*8222

14磺胺二甲異噁唑Sulfisoxazole127-69-56.3ESI+10

268.1113.28225

A.磺胺類及

277.1156.0*6019

抗菌增效劑15苯甲酰磺胺Sulfabenzamide127-71-96.78ESI+10

277.11086032

301.1156.0*8024

16磺胺喹惡啉Sulfaquinoxaline59-40-58.32ESI+10

301.11088036

215156.0*5217

17磺胺醋酰Sulfacetamide144-80-93.31ESI+10

2151085229

291.1230.1*9533

18甲氧芐氨嘧啶Trimethoprim738-70-54.85ESI+10

291.1123.19534

315156.0*9027

19磺胺苯吡唑Sulfaphenazole526-08-97.32ESI+10

3151089040

278.6156.0*11027

20磺胺二甲異嘧啶Sulfisomidine515-64-05.29ESI+10

278.6186.211023

7

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保留時(shí)間方法篩查限

類別序號(hào)藥物名稱英文名稱CAS號(hào)母離子子離子DP/VCE/eV掃描模式

（min）μg/kg

268156.0*5022

21磺胺噁唑Sulfamoxole729-99-74.9ESI+10

2681085046

285156.0*5022

22磺胺氯吡嗪Sulfaclozina102-65-87.56ESI+10

2851085046

360316.1*8025

23恩諾沙星Enrofloxacin93106-60-65.63ESI+5

360245.18035

320.1276.1*8026

24諾氟沙星Norfloxacin70458-96-75.28ESI+5

320.1233.18035

334.1316.1*8027

25培氟沙星Pefloxacin70458-92-35.13ESI+5

334.1290.28025

332.1288.1*8025

26環(huán)丙沙星Ciprofloxacin85721-33-15.47ESI+5

332.1245.18033

362.2318.1*8026

B.氟喹諾酮27氧氟沙星Ofloxacin82419-36-15.05ESI+5

362.2261.18038

類

386342.3*8025

28沙拉沙星Sarafloxacin98105-99-86.25ESI+5

3862998038

321.2303.1*6528

29依諾沙星Enoxacin74011-58-85.08ESI+5

321.2232.16549

352265.0*8033

30洛美沙星Lomefloxacin98079-51-75.81ESI+5

352308.18028

233215.0*6818

31萘啶酸Nalidixicacid389-08-29.94ESI+5

2331876834

32惡喹酸Oxolinicacid14698-29-4262216.1*8.237040ESI+5

8

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保留時(shí)間方法篩查限

類別序號(hào)藥物名稱英文名稱CAS號(hào)母離子子離子DP/VCE/eV掃描模式

（min）μg/kg

262244.17026

262.1202.1*7742

33氟甲喹Flumequin42835-25-610.27ESI+5

262.1244.17723

358.1340.1*6530

34達(dá)氟沙星Danofloxacin112398-08-05.56ESI+5

358.1255.16555

400.1356.1*8028

35雙氟沙星Difloxacin98106-17-36.13ESI+5

400.1299.18041