DB21T 3559-2021 軟棗獼猴桃品種鑒別技術規(guī)程 SSR分子標記法

CCSB60DB21TechnicalregulationfortheidentificationofActinidiaarguta遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 2 2 3 3 3 3 3 4 5 6 7 8歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話：文件起草單位通訊地址：遼寧省經(jīng)濟林研究所（大連市甘井子區(qū)中華西路31號），聯(lián)系電話：1軟棗獼猴桃品種鑒別技術規(guī)程SSR分子標記法本文件規(guī)定了利用簡單重復序列（Simplesequencerepeats，SSR）分子標記法對軟棗獼猴桃本文件適用于SSR分子標記技術構建軟棗獼猴桃資源DNA指紋圖譜過程中DNA分子GB/T19557.1植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南LY/T2745仁用杏品種鑒定技術規(guī)程SSR分指聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR)，是利用一段DNA為模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下，將該段DNA擴增至足夠數(shù)量，以便進2指紋對比fingerprintcomp將待檢樣品與對照樣品的SSR指紋圖譜進行比對，分析待檢樣品與對照樣品的SSR指紋是否具有差4測試準備4.1儀器設備與主要試劑、耗材4.2溶液配制4.3核心引物4.4樣品準備依據(jù)NY/T2324中樣本采集的技術規(guī)定進行樣本采集，3次以上重復。取無病蟲害的健康的芽，做a）將樣品倒入研缽中，加入液氮研磨2次，約取0.1mLe）5000r?min-1離心1min后倒3g）用紫外分光光度法測定純度和濃度，OD260/OD280比值范圍在1.7~1.9之間即為-1），9數(shù)據(jù)記錄將待檢樣品與對照樣品的SSR指紋比對結果進行分析，若待檢樣品與對照樣品有等位基因不同的位根據(jù)10.1的判定結果，出具鑒別報告書，4A.1儀器設備分光光度計、磁力攪拌器、PCR擴增儀、3730XL測序儀、瓊脂糧凝膠電泳儀，A.2主要試劑液氮、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）、十六烷基三甲mix、引物、瓊脂糖、去離子水、無水乙醇、雙A.3主要器材5溶液配制稱取46.53gEDTANa2?2H2O于250mL燒杯中，加150mL去離子水充分攪拌溶解，用1mol?L-1NaOH溶液調(diào)pH至8.0，定容至250mL，20.454g至250mL燒杯中，分別加1mol?L-1Tris-HCl溶液25mL、60℃水溶解，并用去離子水定容至250mL，混勻。分別量取1mol?L-1Tris-HCl溶液2.5mL、0.5mol?L-1EDTANa2?2H2O溶液0.5mL，用去離子水定容6核心引物FR1111-173275-200365-854100-1675AGGTTGCATATGAGTGGTT135-1926100-1507ACGAGCCCAAAATAGAGTT200-2698119-2109AAGTAAAGCCATTGTCATTG121-192AGAAGATTTC