恒定自然殺傷T（iNKT）細(xì)胞制劑制備及質(zhì)量控制規(guī)范

ICS07.080

CCSC04

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXXXXX—XXXX

恒定自然殺傷T（iNKT）細(xì)胞制劑制備及

質(zhì)量控制規(guī)范

SpecificationforpreparationandqualitycontrolofconstantnaturalkillerT(iNKT)

cellformulations

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

中國(guó)國(guó)際經(jīng)濟(jì)技術(shù)合作促進(jìn)會(huì)發(fā)布

T/XXXXXXX—XXXX

恒定自然殺傷T（iNKT）細(xì)胞制劑制備及質(zhì)量控制規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了恒定自然殺傷T細(xì)胞的術(shù)語和定義、基本要求、制備過程、記錄、質(zhì)量控制以及質(zhì)量

評(píng)價(jià)與放行。

本文件適用于恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備與質(zhì)量控制。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T37864生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求

GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范

GB50591潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范

3術(shù)語和定義、縮略語

術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1.1

恒定自然殺傷T細(xì)胞constantnaturalkillerTcells

具有一定的免疫記憶和調(diào)節(jié)功能的特殊的免疫細(xì)胞，與傳統(tǒng)T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞在功能和特征

上有所不同。

3.1.2

供者donor

提供用于細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)用細(xì)胞的個(gè)體。

3.1.3

樣本specimen

在特定時(shí)間從受試者或捐獻(xiàn)者中采集的器官、組織等標(biāo)本。

3.1.4

細(xì)胞活率cellviability

能夠增值、保持正常代謝活性的細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比。

3.1.5

臺(tái)盼藍(lán)trypanblue

細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，檢測(cè)細(xì)胞是否存活。

注：活細(xì)胞因細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整會(huì)排斥臺(tái)盼藍(lán)，而喪失活性或者細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整的細(xì)胞則會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染成淡藍(lán)色。

3.1.6

放行檢驗(yàn)releasetesting

在細(xì)胞已完成質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)每種類型的每批次細(xì)胞，在凍存入庫及出庫前所進(jìn)行的相對(duì)快

速和簡(jiǎn)化的檢驗(yàn)。

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縮略語

下列縮略語適用于本文件。

HAV：甲型肝炎病毒（HepatitisAVirus）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒(HumanThymicLeukemiaVirus)

EBV：人類皰疹病毒（Epstein-barrVirus）

CMV：巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus）

4基本要求

場(chǎng)地與設(shè)施

4.1.1恒定自然殺傷T細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)場(chǎng)地應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求，空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符

合GB3095標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

4.1.2恒定自然殺傷T細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室或廠房應(yīng)由具有潔凈實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計(jì)

與建造，并應(yīng)符合GB19489、GB50073、GB50346和GB50591的規(guī)定。建設(shè)完成后，各功能區(qū)域的潔

凈級(jí)別應(yīng)由專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)并出具合格證明。

4.1.3細(xì)胞制備功能區(qū)應(yīng)按恒定自然殺傷T細(xì)胞制備工藝進(jìn)行各區(qū)域設(shè)計(jì)，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理

規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求。制備機(jī)構(gòu)應(yīng)配備獨(dú)立質(zhì)量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，

并符合GB19489和GB50346的規(guī)定。

設(shè)備和耗材

4.2.1恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)優(yōu)先選用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)

量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》的要求，并獲得國(guó)家資質(zhì)認(rèn)證的設(shè)備、儀器、耗材和試劑。

4.2.2恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應(yīng)商進(jìn)行資質(zhì)審核認(rèn)證，要求

供應(yīng)商提供產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告和批次檢驗(yàn)報(bào)告，并對(duì)耗材及試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢，避免采購(gòu)質(zhì)量不合格的產(chǎn)品。

4.2.3恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)設(shè)備和儀器正式使用前應(yīng)做安裝確認(rèn)(IQ)、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和

性能確認(rèn)(PQ)，并定期進(jìn)行第三方校準(zhǔn)，不得使用有安全隱患的儀器操作樣本及細(xì)胞制品。

4.2.4恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)設(shè)備與儀器進(jìn)行編號(hào)建檔，并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程(SOP)，確

保使用、運(yùn)行、保養(yǎng)、維修記錄完整可追溯，對(duì)于關(guān)鍵工藝相關(guān)設(shè)備參數(shù)應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，及時(shí)對(duì)狀態(tài)

異常的設(shè)備進(jìn)行校對(duì)和維修。

人員管理

4.3.1恒定自然殺傷T細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)分別設(shè)立細(xì)胞制備負(fù)責(zé)人、質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人和質(zhì)量授權(quán)人崗位。

由法人授權(quán)任命，任職資質(zhì)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指

導(dǎo)原則》要求，定期接受崗位專業(yè)培訓(xùn)，制備技術(shù)負(fù)責(zé)人與質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人、質(zhì)量授權(quán)人不得相互兼任。

4.3.2恒定自然殺傷T細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)具備的健康要求：HAV、HBV、HCV、HIV及梅毒的抗

體檢測(cè)應(yīng)為陰性，并且(矯正)視力正常，無色盲、色弱。

4.3.3恒定自然殺傷T細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員應(yīng)半年接受體檢一次，有呼吸道感染或發(fā)熱等疾病狀

態(tài)下不得進(jìn)入潔凈操作區(qū)，需完全康復(fù)后方可恢復(fù)崗位操作。

4.3.4恒定自然殺傷T細(xì)胞制備和質(zhì)控技術(shù)人員上崗前應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括但不限于干細(xì)胞理

論與實(shí)踐、生命倫理、干細(xì)胞法律法規(guī)、GMP管理、GCP資質(zhì)、制劑基本知識(shí)、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)、生物安

全、儀器設(shè)備使用與維護(hù)方法、物料管理與清潔衛(wèi)生、崗位職責(zé)、操作規(guī)范等內(nèi)容。

5制備過程

樣本采集

5.1.1基本原則

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5.1.1.1樣本采集與處理應(yīng)符合GB/T37864的要求。

5.1.1.2采集和處理程序可供樣本采集人員使用。

5.1.1.3應(yīng)具備相關(guān)的資質(zhì)和設(shè)施環(huán)境。

5.1.1.4應(yīng)通過倫理審查批準(zhǔn)并履行知情同意程序。

5.1.1.5應(yīng)建立適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量管理體系確保符合用戶需求并持續(xù)改進(jìn)。

5.1.2供者健康

5.1.2.1樣本采集制備方應(yīng)對(duì)供者的基本信息與健康信息進(jìn)行詳細(xì)采集與記錄，同時(shí)做好對(duì)供者的隱

私保護(hù)，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.1.2.2供者應(yīng)無血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸毒史，

不應(yīng)具有包括但不限于以下疾病或健康狀況：

a)一般傳染性疾病或其他遺傳疾?。篐IV、HBV、HCV、梅毒、HTLV、EBV與CMV抗體與核酸檢測(cè)

應(yīng)為陰性；

b)傳染性皮膚病(未治愈的)；

c)大面積皮膚損傷(未治愈的)；

d)鼻/咽喉傳染病(未治愈的)。

e)采集前12個(gè)小時(shí)內(nèi)用過酒精，鎮(zhèn)靜藥等。

5.1.3采集場(chǎng)所及人員

采集場(chǎng)所應(yīng)達(dá)到Ⅲ級(jí)潔凈手術(shù)室要求。采集人員應(yīng)具有醫(yī)師職業(yè)證，且經(jīng)過相應(yīng)的技術(shù)培訓(xùn)。

5.1.4采集過程

由醫(yī)師抽取細(xì)胞組織，置于無菌采集瓶中，密封保存，并粘貼條形碼作為唯一標(biāo)識(shí)。

細(xì)胞培養(yǎng)

5.2.1恒定自然殺傷T細(xì)胞分離與培養(yǎng)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及

臨慶前研究指導(dǎo)原則》要求的車間內(nèi)進(jìn)行。

5.2.2所有操作應(yīng)事先制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，由經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行，并進(jìn)行記錄登記，相

關(guān)記錄入檔保留至少30年。

5.2.3培養(yǎng)過程中應(yīng)標(biāo)識(shí)細(xì)胞的名稱、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員姓名等信息。

5.2.4所使用試劑應(yīng)采用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《中華人民共和國(guó)藥典》和《干細(xì)胞制劑

質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求的藥品輔料或已獲批的藥品，應(yīng)出具產(chǎn)品質(zhì)檢合格報(bào)告，并對(duì)各

批次試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢。

5.2.5應(yīng)避免人源或動(dòng)物源性血清及蛋白，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，

應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。

細(xì)胞換液

5.3.1恒定自然殺傷T細(xì)胞換液操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制

及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.3.2換液時(shí)間及頻次應(yīng)根據(jù)恒定自然殺傷T細(xì)胞生長(zhǎng)情況及培養(yǎng)基狀態(tài)進(jìn)行判斷，以保障細(xì)胞生長(zhǎng)

所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平，并消除代謝物毒害作用。

5.3.3換液操作時(shí)吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下

觀察到原代細(xì)胞完全貼壁和延展后方可進(jìn)行。

5.3.4培養(yǎng)基成分應(yīng)符合恒定自然殺傷T細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國(guó)家批準(zhǔn)的臨床級(jí)

產(chǎn)品或藥品輔料。

細(xì)胞傳代

5.4.1恒定自然殺傷T細(xì)胞傳代操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制

及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.4.2恒定自然殺傷T細(xì)胞一般情況在達(dá)到80%～90%融合度可講行傳代操作，傳代操作應(yīng)密度適宜、

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及時(shí)，迅速。

5.4.3傳代所使用消化酶應(yīng)符合恒定自然殺傷T細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的

臨床級(jí)產(chǎn)品。如必須使用動(dòng)物源性消化酶，應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。

細(xì)胞凍存

5.5.1恒定自然殺傷T細(xì)胞凍存操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制

及臨床前研究指導(dǎo)原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進(jìn)行記錄并入檔保存至少30年。

5.5.2經(jīng)制備數(shù)量達(dá)到凍存要求的恒定自然殺傷T細(xì)胞系可進(jìn)行凍存操作，凍存細(xì)胞應(yīng)加入適當(dāng)?shù)膬?/p>

存保護(hù)液，遵循程序降溫原則，并在液氮中進(jìn)行保存。

5.5.3凍存液成分應(yīng)符合恒定自然殺傷T細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的臨床級(jí)

產(chǎn)品或藥品輔料，二甲基亞砜含量不得超過10%，如必須使用動(dòng)物源性血清，應(yīng)確保其無特定動(dòng)物源性

病毒污染，嚴(yán)禁使用海綿狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。

5.5.4凍存細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明細(xì)胞名稱、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯一

標(biāo)識(shí)。

5.5.5液氮凍存應(yīng)使用符合要求的液氮容器，氣相凍存，由專人負(fù)責(zé)，保證液氮充足，溫度恒定。

穩(wěn)定性考察

5.6.1細(xì)胞庫應(yīng)依據(jù)儲(chǔ)存的產(chǎn)品的特性，制定年度的儲(chǔ)存細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定性考察方案和計(jì)劃，并制定穩(wěn)

定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.6.2穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括但不限于以下內(nèi)容：

a)凍存容器完整性和密閉性；

b)細(xì)胞活率；

c)微生物培養(yǎng)；

d)細(xì)胞凍存復(fù)蘇回收率；

e)細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)；

f)細(xì)胞生物學(xué)效力。

5.6.3恒定自然殺傷T細(xì)胞在凍存后1周復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于70%，1年復(fù)蘇存活率不應(yīng)低于50%。

5.6.4常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計(jì)劃，如遇特殊情況（例如液相液氮罐故障）可臨時(shí)性增加

穩(wěn)定性考察計(jì)劃。

5.6.5應(yīng)對(duì)年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進(jìn)行趨勢(shì)分析，便于監(jiān)測(cè)細(xì)胞儲(chǔ)存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進(jìn)細(xì)胞儲(chǔ)存

工藝。

6質(zhì)量控制

檢驗(yàn)內(nèi)容

6.1.1恒定自然殺傷T細(xì)胞安全性

6.1.1.1無菌檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則1101無菌檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)恒定自然殺傷T細(xì)胞樣本

采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存

液等）檢測(cè)。細(xì)菌和真菌檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。

6.1.1.2支原體檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則3301支原體檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)恒定自然殺傷T細(xì)胞樣

本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍

存液等）檢測(cè)。支原體檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)為陰性。

6.1.1.3細(xì)胞內(nèi)外源致病因子檢測(cè)

采用血清ELISA檢測(cè)法或核酸檢測(cè)法，對(duì)恒定自然殺傷T細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、

復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液、細(xì)胞等）檢測(cè)。HIV抗體、HBsAg、

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HCV抗體、TP抗體、CMV-IgM、HTLV抗體、HPV抗體、HHV抗體、EBV抗體檢測(cè)應(yīng)為陰性；HCV、HBV、HIV病

毒核酸檢測(cè)應(yīng)為陰性。

6.1.1.4內(nèi)毒素檢測(cè)

參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)法執(zhí)行，對(duì)恒定自然殺傷T細(xì)

胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進(jìn)行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、

凍存液等）檢測(cè)。各類樣本中的內(nèi)毒素檢測(cè)值應(yīng)≤1EU/mL。

6.1.1.5異常免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)

采用流式細(xì)胞術(shù)以及ELISA技術(shù)測(cè)定恒定自然殺傷T細(xì)胞對(duì)于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對(duì)不同

淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響，以及對(duì)淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。淋巴細(xì)胞亞群應(yīng)無異常增殖，

細(xì)胞因子表達(dá)水平應(yīng)無異常增加。

6.1.1.6致瘤性檢測(cè)

采用免疫缺陷動(dòng)物（裸鼠或SCID鼠），通過局部或靜脈方式接種恒定自然殺傷T細(xì)胞，評(píng)價(jià)恒定自

然殺傷T細(xì)胞致瘤性。體內(nèi)致瘤試驗(yàn)嚴(yán)格遵照動(dòng)物倫理要求執(zhí)行，單只小鼠接種恒定自然殺傷T細(xì)胞數(shù)

量≥106細(xì)胞/kg，觀察期≥12周。恒定自然殺傷T細(xì)胞應(yīng)無致瘤性。

6.1.2恒定自然殺傷T細(xì)胞穩(wěn)定性

6.1.2.1細(xì)胞數(shù)量和活率檢測(cè)

選用血球細(xì)胞計(jì)數(shù)板或細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，將待檢測(cè)細(xì)胞使用臺(tái)盼藍(lán)或A0/PI熒光染料染

色，讀取細(xì)胞數(shù)并計(jì)算活率。各代數(shù)及批次恒定自然殺傷T細(xì)胞活細(xì)胞比例≥70%。

6.1.2.2生長(zhǎng)活性檢測(cè)

通過檢測(cè)細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、克隆形成率以及端粒酶活性對(duì)恒定自然殺傷T細(xì)胞生長(zhǎng)活性進(jìn)

行測(cè)定，各代數(shù)及批次恒定自然殺傷T細(xì)胞應(yīng)處于指數(shù)生長(zhǎng)期，GO期細(xì)胞數(shù)≤10%，具有端粒酶活性。

6.1.2.3細(xì)胞純度和均一性檢測(cè)

采用恒定自然殺傷T細(xì)胞標(biāo)志物流式檢測(cè)以及人基因組DNA短片段重復(fù)序列(STR)測(cè)序進(jìn)行檢定。

各代數(shù)及批次恒定自然殺傷T細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)應(yīng)符合流式檢測(cè)比例要求，單一細(xì)胞系的恒定自然

殺傷T細(xì)胞各代次及批次細(xì)胞STR檢測(cè)結(jié)果應(yīng)保持一致。

6.1.3恒定自然殺傷T細(xì)胞生物學(xué)特征

6.1.3.1細(xì)胞形態(tài)檢測(cè)

體外二維懸浮培養(yǎng)條件中，靜息狀態(tài)下呈不規(guī)則形懸浮生長(zhǎng)；激活后形態(tài)變大變長(zhǎng)，用倒置顯微鏡

進(jìn)行觀察。

6.1.3.2細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)

采用《中華人民共和國(guó)藥典》(2020年版)通則3429中流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定。

6.1.3.3染色體核型檢測(cè)

按照《中華人民共和國(guó)藥典》(2020年版)檢驗(yàn)。

質(zhì)控分類

6.2.1批次質(zhì)量檢驗(yàn)

恒定自然殺傷T細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)由同一供體、同一時(shí)間、使用同一工藝采集和分離獲得的細(xì)胞進(jìn)

行例行批次質(zhì)量檢驗(yàn)。當(dāng)制備工藝、耗材、試劑、場(chǎng)地或規(guī)模等條件發(fā)生時(shí)，制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)多批次細(xì)胞

制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，確保工藝和質(zhì)量穩(wěn)定合格，記錄入檔保存至少30年。

6.2.2復(fù)核質(zhì)量檢驗(yàn)

5

T/XXXXXXX—XXXX

恒定自然殺傷T細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)每一批次細(xì)胞制劑單獨(dú)留樣保存，詳細(xì)記錄批號(hào)、代次、生產(chǎn)日

期、來源等信息。定期由國(guó)家或地方相關(guān)部門授權(quán)的專業(yè)細(xì)胞檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)或?qū)嶒?yàn)室進(jìn)行恒定自然殺傷T細(xì)

胞制劑的質(zhì)量復(fù)核檢驗(yàn)，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。復(fù)核質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告出具時(shí)間應(yīng)在該批次恒定自然殺傷T細(xì)胞

制劑提出放行申請(qǐng)之前，并作為放行檢驗(yàn)參考。

7質(zhì)量評(píng)價(jià)與放行

質(zhì)量評(píng)價(jià)內(nèi)容

7.1.1供者健康篩查結(jié)果應(yīng)符合合格供者要求并簽署了知情同意書。

7.1.2恒定自然殺傷T細(xì)胞及檢測(cè)標(biāo)本的采集和運(yùn)輸符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

7.1.3恒定自然殺傷T細(xì)胞及檢測(cè)標(biāo)本的接收、標(biāo)識(shí)以及暫存符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

7.1.4細(xì)胞分離、處理、檢測(cè)區(qū)域應(yīng)滿足操作要求，有潔凈要求的操作環(huán)境應(yīng)滿足相應(yīng)級(jí)別環(huán)境要求，

應(yīng)有定期環(huán)境監(jiān)控；細(xì)胞分離、處理各工序完畢后均應(yīng)及時(shí)清場(chǎng)；現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)無污染及交叉污染，如有傳染

病原體或污染物，應(yīng)得到有效隔離或清除。

7.1.5細(xì)胞在分離、處理及檢測(cè)等過程中所涉及的人員均已通過考核合格后上崗。

7.1.6細(xì)胞分離、處理、檢測(cè)等所使用的設(shè)備應(yīng)符合設(shè)備管理要求（標(biāo)識(shí)清晰正確，在合格計(jì)量校驗(yàn)

期內(nèi)定期維護(hù)保養(yǎng)等）；與細(xì)胞接觸的器械應(yīng)經(jīng)消毒滅菌并在有效期內(nèi)。

7.1.7細(xì)胞制備、檢測(cè)所用物料應(yīng)經(jīng)確認(rèn)來自合格供應(yīng)商，關(guān)鍵物料均應(yīng)經(jīng)抽樣檢測(cè)并確認(rèn)其質(zhì)量合

格。試劑及耗材的有效期應(yīng)在規(guī)定期限內(nèi)，批號(hào)應(yīng)按照要求記錄下來以便具有可追溯性。

7.1.8應(yīng)核對(duì)供者檢測(cè)報(bào)告，其內(nèi)容至少包括：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒抗體

（HCVAb）、梅毒螺旋體特異性抗體（Anti-TP）、人類免疫缺陷病毒I/Ⅱ型抗體（HIV-I/ⅡAb）和丙氨

酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）等，其余檢測(cè)項(xiàng)目全部符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。采集時(shí)間距制備時(shí)間在要求時(shí)限以內(nèi)，

無凝血現(xiàn)象，病原體檢測(cè)及篩查標(biāo)準(zhǔn)按產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

7.1.9細(xì)胞分離、處理、檢測(cè)和過程監(jiān)控程序應(yīng)與機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的管理文件內(nèi)容一致。記錄填寫應(yīng)真實(shí)、

完整、正確，關(guān)鍵計(jì)算結(jié)果應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。

7.1.10樣本在采集、運(yùn)輸、制備、分離、凍存、發(fā)放過程中不存在任何重大偏差；若有偏差發(fā)生，均

應(yīng)通過合適的評(píng)價(jià)，并采取了有效的糾正措施。

7.1.11數(shù)量及包裝：裝量細(xì)胞數(shù)量與臨床需求一致；細(xì)胞包裝滿足運(yùn)輸要求，細(xì)胞的內(nèi)、外包裝標(biāo)簽

內(nèi)容與公司規(guī)定內(nèi)容相符，經(jīng)雙人復(fù)核確認(rèn)其準(zhǔn)確性和完整性。

7.1.12異常事件調(diào)查：過程中若出現(xiàn)異常，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查處理，按調(diào)查處理意見執(zhí)行。異常處理的有關(guān)

記錄應(yīng)歸入對(duì)應(yīng)批次細(xì)胞制備檔案中。

7.1.13其他需要考慮的因素。

評(píng)價(jià)結(jié)論

7.2.1如果細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià)各項(xiàng)都符合第6章的要求，則視為合格品，可轉(zhuǎn)為長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

7.2.2如果細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià)未能滿足第6章的要求，則應(yīng)視為不合格品，不可使用。不合格品的處理應(yīng)

符合醫(yī)療廢棄物處理管理的相關(guān)規(guī)定，涉及傳染性病原體陽性、致病性微生物陽性的不合格品應(yīng)進(jìn)行滅

活處理。

6

T/XXXXXXX—XXXX

參考文獻(xiàn)

[1]干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）（國(guó)衛(wèi)辦科教發(fā)〔2015〕46號(hào)）

[2]WHO實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)(第三版)

[3]藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（衛(wèi)生部令第79號(hào)）

[4]中華人民共和國(guó)藥典（2020年版）

7

T/XXXXXXX—XXXX

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義、縮略語.................................................................1

4基本要求...........................................................................2

5制備過程...........................................................................2

6記錄...............................................................錯(cuò)誤!未定義書簽。

7質(zhì)量控制...........................................................................4

8質(zhì)量評(píng)價(jià)與放行.....................................................................6

參考文獻(xiàn)..............................................................................7

I

T/XXXXXXX—XXXX

恒定自然殺傷T（iNKT）細(xì)胞制劑制備及質(zhì)量控制規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了恒定自然殺傷T細(xì)胞的術(shù)語和定義、基本要求、制備過程、記錄、質(zhì)量控制以及質(zhì)量

評(píng)價(jià)與放行。

本文件適用于恒定自然殺傷T細(xì)胞的制備與質(zhì)量控制。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T37864生物樣本庫質(zhì)量和能力通用要求

GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范

GB50591潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范

3術(shù)語和定義、縮略語

術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1.1

恒定自然殺傷T細(xì)胞constantnaturalkillerTcells

具有一定的免疫記憶和調(diào)節(jié)功能的特殊的免疫細(xì)胞，與傳統(tǒng)T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞在功能和特征

上有所不同。

3.1.2

供者donor

提供用于細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)用細(xì)胞的個(gè)體。

3.1.3

樣本specimen

在特定時(shí)間從受試者或捐獻(xiàn)者中采集的器官、組織等標(biāo)本。

3.1.4

細(xì)胞活率cellviability

能夠增值、保持正常代謝活性的細(xì)胞占全部細(xì)胞的百分比。

3.1.5

臺(tái)盼藍(lán)trypanblue

細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性，檢測(cè)細(xì)胞是否存活。

注：活細(xì)胞因細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整會(huì)排斥臺(tái)盼藍(lán)，而喪失活性或者細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整的細(xì)胞則會(huì)被臺(tái)盼藍(lán)染成淡藍(lán)色。

3.1.6

放行檢驗(yàn)releasetesting

在細(xì)胞已完成質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)每種類型的每批次細(xì)胞，在凍存入庫及出庫前所進(jìn)行的相對(duì)快

速和簡(jiǎn)化的檢驗(yàn)。

1

T/XXXXXXX—XXXX

縮略語

下列縮略語適用于本文件。

HAV：甲型肝炎病毒（HepatitisAVirus）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒(HumanThymicLeukemiaVirus)

EBV：人類皰疹病毒（Epstein-barrVirus）

CMV：