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DB34DB34/T2813—2017梨炭疽病菌檢疫鑒定方法DetectionandidentificationofColletotrichumgloeosporioidesPenz.2017-03-30發(fā)布2017-04-30實(shí)施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)分類地位:真菌界(Fungi黑盤孢目(Melanconiales),黑盤孢科(Melanconiace菌屬(Colletotrichum其有性階段為圍小叢殼(G根據(jù)梨炭疽病菌在寄主上的為害癥狀(參見附錄A),培養(yǎng)基上生長的菌落、菌絲、分生孢子和分5.2.1除另有規(guī)定外,所有試劑均為分析純或生化試劑,實(shí)驗(yàn)用水20mmol/LEDTA-Na2蛋白酶5.2.4PCR試劑:10×PCRbuff),2在25℃~30℃,12h黑暗/12h光照(12h光暗交替)條件下培養(yǎng),第3d開始觀察,根據(jù)組織周殼暗褐色,燒瓶狀,直徑為85μm~300μm;子囊長棍棒形,平行排列于子囊殼內(nèi),大小為55μm~從檢測樣品中分離并鑒定為梨炭疽病菌的菌株,應(yīng)妥善保存。將菌株接種PDA培養(yǎng)基斜面上,25℃~30℃培養(yǎng)5d,然后4℃冰箱保存,或?qū)⒕z塊轉(zhuǎn)入20%滅菌甘油并混勻,-80℃長期保存。345C.1.1.3加入等體積的苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)溶液,顛倒混勻,12000rpm離心C.1.1.6棄上清液,室溫倒置于吸ACCTTTGAGGGCCTACATCAG-3',預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物為329bp。PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系見表C.1。PCRbuffer(含25mmol/L
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