藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)

藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)第一節(jié)鑒別實(shí)驗(yàn)得項(xiàng)目一、藥物得性狀

藥物得性狀(description)反應(yīng)藥物得特有物理性質(zhì),包括:外觀、溶解度和物理常數(shù)等。外觀 指藥品得外表感觀和色澤,包括:藥品得集聚狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。 例:維生素B1:“本品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末;有微弱得特臭,味苦;干燥品在空氣中迅即吸收約4%得水分”溶解度溶解度作為藥物得一種物理性質(zhì),在一定程度上反映藥品得純度。《中國藥典》采用“極易溶解、易溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述藥品得溶解性能。方法:稱取研成細(xì)粉得供試品或量取液體供試品,置于25?C±2?C一定容量得溶劑中,每隔5min強(qiáng)力振搖30s;觀察30min內(nèi)得溶解情況,如無目視可見得溶質(zhì)顆?；蛞旱?則為完全溶解。物理常數(shù) 物理常數(shù)就是評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量得主要指標(biāo)之一。其測(cè)定結(jié)果對(duì)藥品具有鑒別意義,也反映該藥品得純度。 《中國藥典》收載得物理常數(shù):相對(duì)密度、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、吸收系數(shù)等。熔點(diǎn)固體熔化成液體得溫度、熔融同時(shí)分解得溫度或在熔化時(shí)自初熔至全熔得一段溫度。要求報(bào)告“初熔”(供試品在毛細(xì)管內(nèi)開始局部液化出現(xiàn)明顯液滴時(shí)得溫度)和“全熔”(供試品全部液化時(shí)得溫度)。例1 雌二醇:“本品得熔點(diǎn)為175～180?C”。例2 醋酸地塞米松:“本品得熔點(diǎn)為223～233?C,熔融時(shí)同時(shí)分解”。比旋度在一定波長(zhǎng)與溫度下,偏振光透過長(zhǎng)1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g溶液時(shí)測(cè)得得旋光度稱為比旋光度。比旋光度就是反映手性藥物特性及其純度得主要指標(biāo),可用以區(qū)別藥品、檢查純度或測(cè)定制劑得含量。例:維生素C得比旋度為+20、5?～+21、5?。吸收系數(shù)在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱為吸收系數(shù)。《中國藥典》收載的吸收系數(shù)為百分吸收系數(shù)：在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1%(W/V)，厚度為1cm時(shí)的吸光度，用表示。吸收系數(shù)不僅可用于考察原料藥的質(zhì)量，同時(shí)可作為該藥物制劑應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定含量時(shí)的依據(jù)。無機(jī)藥物的鑒別：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)。有機(jī)藥物的鑒別：采用典型官能團(tuán)反應(yīng)。鑒別實(shí)驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物，不能證實(shí)是哪一種藥物。鑒別實(shí)驗(yàn)僅供確認(rèn)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中單一的化學(xué)藥物，不適用于混合物或有干擾物質(zhì)存在的情況。二、一般鑒別實(shí)驗(yàn)

有機(jī)氟化物的鑒別

供試品約7mg氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞吸收液：20mlH2O-6.5mlNaOH(0.01mol/L)燃燒完全后，充分振搖，取吸收液2ml加茜素氟藍(lán)試液0.5ml再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml溶液顯藍(lán)紫色,并做空白對(duì)照試驗(yàn)方法原理

有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，被堿性溶液吸收成為無機(jī)氟化物，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰在pH4.3溶液中形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。茜素氟藍(lán)OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOHF-++Ce3+pH4.3藍(lán)紫色OOOHOCH2NCH2COOHCH2COOHCeFOH12大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流有機(jī)酸的鑒別

水楊酸鹽鑒別方法一：

取供試品的稀溶液，加三氯化鐵1滴，溶液顯紫色。原理：

本品在中性或弱酸性下，與FeCl3生成配位化合物，中性時(shí)呈紅色，弱酸性時(shí)呈紫色。COOHOH水楊酸6+4FeCl3COO-O-2FeFe+12HCl鑒別方法二：

取供試品的溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀，沉淀在醋酸銨試液中溶解。酒石酸鹽方法：

取供試品的中性溶液，置潔凈的試管中，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，置水浴中加熱，銀游離并附在試管內(nèi)壁成銀鏡。原理：COOHCHHOCOOHCHHO+Ag(NH3)2OHΔCOONH4CHOCOONH4CHO+2NH3+2H2O2Ag+供試品約50mg加稀鹽酸1ml，緩緩煮沸使溶解，放冷加0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴生成橙黃色到猩紅色沉淀（視供試品不同）芳香第一胺類方法：原理：+NaNO2+2HClNH2R+NaCl+2H2OR+NaCl+H2ORN=N–OH+NaOHROH+方法：供試品約10mg加發(fā)煙硝酸5滴置水浴上蒸干，得到黃色殘?jiān)右掖?～3滴潤(rùn)濕加固體KOH一小粒，顯深紫色托烷生物堿類原理：OROHO水解HOOCHO3HNO3HOOCHONO2O2NNO2托烷類三硝基衍生物KOH（C2H5OH）HOOCHONO2O2NNOHO莨菪酸醌型產(chǎn)物KOHHOOCHONO2O2NNOHOHOOCHONO2O2NNOKO深紫色鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽的焰色反應(yīng) 鑒別方法：

取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯個(gè)離子的特征顏色。 鈉離子:鮮黃色；鉀離子:紫色；鈣離子:磚紅色。 原理：

鈉的火焰光譜主要譜線：589.0nm、589.6nm； 鉀的火焰光譜主要譜線：766.49nm、769.90nm； 鈣的火焰光譜主要譜線：622nm、554nm、442.67nm與602nm。無機(jī)金屬鹽銨鹽 鑒別方法： 取供試品，加過量NaOH試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)色，并能使硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙顯黑色。 原理：NH4++OH-NH3+H2O4NH3+2Hg2(NO3)2+H2OOHgHgNH2·NO3+2Hg+3NH4NO3氯化物 鑒別一： 取供試品溶液，加稀硝酸使成酸性，滴加AgNO3試液，生成白色凝乳狀沉淀；沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸，沉淀復(fù)生成。 鑒別二： 取供試品少量置試管中，加等量MnO2，混勻，加H2SO4濕潤(rùn)，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使?jié)駶?rùn)的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。無機(jī)酸根硫酸鹽 鑒別一: 取供試品溶液,滴加BaCl2試液,即生成白色沉淀;沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。 鑒別二: 取供試品溶液,滴加醋酸鉛試液,即生成白色沉淀;沉淀在醋酸銨或NaOH試液中溶解。 鑒別三: 取供試品溶液,加鹽酸,不生成白色沉淀(與硫代硫酸鈉區(qū)別)。硝酸鹽 鑒別一: 取供試品溶液置試管中,加等量得硫酸,小心混合,冷后,沿管壁加硫酸亞鐵試液,使成兩液層,接界面顯棕色。 鑒別二: 取供試品溶液,加硫酸與銅絲加熱,即發(fā)生紅棕色得蒸氣(NO2)。 鑒別三: 取供試品溶液,滴加KMnO4試液,紫色不應(yīng)褪去(與亞硝酸鈉區(qū)別)。三、專屬鑒別實(shí)驗(yàn)

一般鑒別實(shí)驗(yàn)是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類的藥物藥物的專屬實(shí)驗(yàn)：在一般鑒別實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性不同，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康?。以后各章詳解第二?jié)鑒別方法藥物的鑒別方法的要求：專屬性強(qiáng)再現(xiàn)性好靈敏度高、操作簡(jiǎn)便快速常用鑒別方法：化學(xué)法光譜法色譜法生物學(xué)法一、化學(xué)鑒別法要求：反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯；反應(yīng)是否完全則不重要?；瘜W(xué)鑒別法：呈色反應(yīng)沉淀生成反應(yīng)熒光反應(yīng)氣體生成反應(yīng)使試劑褪色反應(yīng)測(cè)定生成物的熔點(diǎn)（繁瑣、費(fèi)時(shí)、應(yīng)用少）二、光譜鑒別法紫外光譜鑒別法 原理： 多數(shù)有機(jī)藥物分子含有能吸收紫外可見光的基團(tuán)而顯示特征吸收光譜，可作為鑒別的依據(jù)。常用方法：測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)；規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度；規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法；規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸光度比值法；經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。示例：地蒽酚的鑒別實(shí)驗(yàn)取含量測(cè)定下的供試品溶液，于240～400nm范圍內(nèi)測(cè)定吸光度，在257nm、289nm與356nm處有最大吸收。在257nm與289nm處的吸光度比值應(yīng)為1.06～1.10；在356nm與289nm處的吸光度比值應(yīng)為0.90～0.94。紅外光譜鑒別法紅外光譜法專屬性很強(qiáng),應(yīng)用較廣(固體、液體、氣體樣品),主用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確得原料藥,特別適合于用其她方法不易區(qū)分得同類藥物。在用紅外光譜進(jìn)行鑒別時(shí),《中國藥典》采用標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照法。試樣制備方法: 壓片法糊法膜法溶液法注意問題:固體藥品得測(cè)定受晶型得影響采用壓片法時(shí),鹽酸鹽樣品需使用KCl基質(zhì)。傅立葉變化紅外光譜儀系單光束型儀器,測(cè)定時(shí)需采用干燥得氮?dú)獯祾邅硐趸己退酶蓴_。本法對(duì)多組分藥物或存在多晶現(xiàn)象得藥物不適用。制劑得鑒別一般需采取提取分離后壓片測(cè)試。儀器間得分辨率得差異及操作條件得不同可能影響藥品光譜圖,應(yīng)將測(cè)定藥品用得儀器上獲得得聚苯乙烯薄膜光譜圖與藥典收錄得聚苯乙烯薄膜光譜圖加以比較。《中國藥典》紅外光譜圖得波數(shù)范圍:4000～400cm-1近紅外光譜鑒別法通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在近紅外譜區(qū)750～2500nm得特征光譜并利用適宜得化學(xué)計(jì)量學(xué)方法提取相關(guān)信息后,對(duì)被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量。近紅外光譜特點(diǎn):快速、準(zhǔn)確、不破壞樣品、既可離線檢測(cè),也可在線檢測(cè)。近紅外光譜鑒別法步驟: (1)建立參考譜庫 (2)數(shù)據(jù)預(yù)處理 (3)數(shù)據(jù)評(píng)估 (4)數(shù)據(jù)庫得驗(yàn)證(專屬性和耐用性)原子吸收法利用原子蒸汽可以吸收該元素作為空心陰極燈發(fā)出得特征譜線得特征,根據(jù)供試品溶液得最大吸收和特征譜線得強(qiáng)度減弱程度進(jìn)行定性、定量分析。核磁共振法通過測(cè)定供試品指定基團(tuán)上得質(zhì)子峰得化學(xué)位移δ和耦合常數(shù)進(jìn)行藥物得鑒別。三、X射線粉末衍射法化合物的晶體都有其特定的X射線衍射圖譜。衍射極大點(diǎn)（或線）間的距離及其相對(duì)強(qiáng)度可用以進(jìn)行結(jié)晶物質(zhì)的定性或定量分析。dhkl：面間距；θ：掠射角；λ：X射線波長(zhǎng)結(jié)晶物質(zhì)的鑒別可通過比較供試品與已知物質(zhì)的X射線粉末衍射圖譜來完成。各衍射線的衍射角（2θ）、相對(duì)強(qiáng)度、和面間距是進(jìn)行鑒別的依據(jù)。(布拉格方程)-formβ-form谷氨酸兩種晶型的X射線衍射光譜四、色譜鑒別法利用不同物質(zhì)在不同的色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（比移值Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行鑒別。采用與對(duì)照品在相同的條件下進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行比較，根據(jù)兩者的保留行為和檢測(cè)結(jié)果是否一致來驗(yàn)證藥品的真?zhèn)?。薄層色譜鑒別法（Thin-layerChromatography）與同濃度對(duì)照品溶液，在同一薄層板上點(diǎn)樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)與對(duì)照品的主斑點(diǎn)一致，且主斑點(diǎn)的大小和顏色深淺也應(yīng)大致相同。采用供試品溶液與對(duì)照品溶液等體積混合，應(yīng)顯示單一、緊密的斑點(diǎn)。選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的藥物對(duì)照品溶液與供試品溶液的主斑點(diǎn)比較，兩者比移值應(yīng)不同。將③項(xiàng)下兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。①②③④高效液相色譜鑒別法(HighPerformanceLiquidChromatography)