血糖測定方法的進(jìn)展

血糖測定方法的進(jìn)展張銘偉【摘要】糖尿?。―M）是一種常見的代謝性疾病，其發(fā)病率日益增高，且致殘率和致死率較高，嚴(yán)重影響人類健康因此，對MD的預(yù)測和早期干預(yù)尤為重要目前臨床上常用的檢測指標(biāo)是血糖，故血糖測定結(jié)果的準(zhǔn)確性非常重要該文綜述了近幾年血糖檢測方法的進(jìn)展，旨為尋找更為簡單準(zhǔn)確的檢測方法，為臨床診斷研究提供更為可靠的依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】糖尿病血糖檢測方法空腹血糖濃度的正常參考范圍是3.896.11mmol/L（70110mg/dl），正常人在神經(jīng)激素腎肝等多種因素調(diào)解下及在肝肌肉脂肪組織等各種器官代謝協(xié)調(diào)下，維持在正常水平，對維持組織器官的正常生理功能具有特別重要的意義在各種病理因素的作用下，糖代謝紊亂，致使血糖水平異常，從而引起一系列的臨床癥狀。近幾年，人們的生活水平大幅度地提高，人們生活的習(xí)慣環(huán)境及飲食方面亦發(fā)生了很大的改變，致使糖尿病的發(fā)病率出現(xiàn)逐年遞增現(xiàn)象。糖尿?。―M）是一種代謝性疾病，是由于胰島素作用低下或（和）分泌不足而導(dǎo)致的，其特征是高血糖癥DM長期高血糖將損傷到多個器官，導(dǎo)致多器官的功能紊亂及衰竭，尤其會引起心臟神經(jīng)腎眼和血管系統(tǒng)發(fā)生病變。DM是目前全球致殘率及致死率較高的疾病之一，在發(fā)達(dá)國家發(fā)病率為2%5%，在我國糖尿病的發(fā)病率達(dá)2%3%，且出現(xiàn)以每年1%的速度遞增的現(xiàn)象因此對于糖尿病進(jìn)行預(yù)防診斷和治療顯得格外重要，而血糖的檢測對于糖尿病的預(yù)防診斷及治療具有指導(dǎo)性的意義。1血糖檢測的主要方法目前有葡萄糖氧化酶法（GOD法）己糖激酶法（HK法）葡萄糖脫氫酶法鄰甲苯胺法葡萄糖氧電極法同位素稀釋質(zhì)譜法和無創(chuàng)血糖測量法等下面就上述幾種方法進(jìn)行簡單介紹。1.1葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下，生成葡萄糖酸和過氧化氫，生成的過氧化氫酚與4-氨基安替比林經(jīng)過氧化物酶（POD）氧化，生成水氧和紅色醌類化合物生成物顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖的含量成正相關(guān)，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)管比較，即可求得標(biāo)本中葡萄糖含量葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖有較高的特異性靈敏度和準(zhǔn)確性，試劑比較穩(wěn)定，價格亦適中，操作較方便，是當(dāng)前全國臨床檢驗(yàn)中心推薦的常規(guī)方法[5]但此法中過氧化物酶的特異性遠(yuǎn)低于GOD維生素C尿酸血紅蛋白膽紅素四環(huán)素尿素和谷胱甘肽等可與過氧化氫競爭色原性氧受體抑制呈色反應(yīng)，導(dǎo)致血糖測定結(jié)果偏低。1.2己糖激酶法（HK法）己糖激酶法經(jīng)兩步反應(yīng)：第一步,己糖激酶作用于葡萄糖與ATP發(fā)生磷酸化反應(yīng)，有葡萄糖-6-磷酸與ADP生成第二步，生成的葡萄糖-6-磷酸經(jīng)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）催化，葡萄糖-6-磷酸脫氫，有6-磷酸葡萄糖酸（6PG）生成，同時NADP被還原為NADPH，NADPH的生成速率與葡萄糖濃度成正比NADPH在波長340nm處有吸收峰，可在分光光度計(jì)波長340nm監(jiān)測吸光度升高速率，計(jì)算血清中葡萄糖濃度己糖激酶法測定結(jié)果非常穩(wěn)定，是葡萄糖測定的參考方法[7]劉陽等人研究發(fā)現(xiàn)，HK法比GOD法結(jié)果穩(wěn)定，HK法特異性好，抗干擾能力強(qiáng)，是臨床上公認(rèn)的血糖測定的標(biāo)準(zhǔn)方法，且對避免血清中過氧化物色素和濁度的影響較為有效但由于試劑穩(wěn)定性較差價格昂貴，因而限制了其在臨床上的普及，衛(wèi)生部推薦HK法可用于急診檢驗(yàn)在我國，相比HK法，臨床實(shí)驗(yàn)室檢測血糖應(yīng)用較多的方法還是GOD法但劉陽等人研究表明，對于高尿酸血癥的病人，HK法與GOD法測定血糖的測定值有明顯差異，HK法的測定值明顯高于GOD法，且隨著尿酸的濃度升高差異也隨之增大，因GOD法測血糖受還原性物質(zhì)尿酸的干擾，測定值低于真實(shí)值因此對該類患者測其血糖濃度采用HK法為最佳，若用GOD法，測得的血糖結(jié)果應(yīng)給予修正.測定血糖的濃度，首先是葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液的配制，其次是葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液及校準(zhǔn)比值混合溶液的標(biāo)記，然后向血清樣品中加入D-[13C6]葡萄糖標(biāo)記物作為內(nèi)標(biāo)。再經(jīng)離心沉淀，去除樣品中的蛋白質(zhì)后，吸取上清液，過0.22um有機(jī)濾膜進(jìn)行測定。此方法測定準(zhǔn)確度、精密度好，樣品前處理亦簡單，可用于血清中葡萄糖含量的高準(zhǔn)確度測定[13]。GC-IDMS法樣品前處理相對復(fù)雜，但較LC-IDMS法的研究更加成熟。目前采用LC-IDMS法對血清葡萄糖高準(zhǔn)確度定值的相關(guān)研究報(bào)告還較少[13]。1.7無創(chuàng)血糖測量法目前采用無創(chuàng)測量技術(shù)測定血糖濃度的方法主要分為兩大類：電化學(xué)法和光學(xué)法。1.7.1電化學(xué)法實(shí)驗(yàn)研究表明，體表滲出液中的葡萄糖的含量與人體血糖的含量具有關(guān)聯(lián)性，可以采用電化學(xué)法來測量人體體表的滲出液（如汗液、淚液、唾液等滲出液）中的葡萄糖濃度來反應(yīng)出血糖濃度。目前可以通過在電場中,人體皮膚受到刺激，通過皮膚的滲透作用,一部分血糖分子穿過皮膚集聚在電極的周圍，然后再采用生化的方法測量體表滲出液中的葡萄糖的含量，從而得出人體血糖的含量。該法的優(yōu)點(diǎn)是方便使用，精確度高。但儀器測頭比較昂貴，且需要經(jīng)常更換，提高了使用成本。由于血漿或組織中其它成分的存在，干擾了該法對血糖濃度的測定，以及電化學(xué)傳感器對人體表皮的穿透性較低，致使電化學(xué)傳感器使用的范圍受到限制。1.7.2光學(xué)法光學(xué)法是目前最具有前景的檢測手段，其具有方便、無痛、檢測速度快、精度高等優(yōu)點(diǎn)。該法包括近紅外光譜法、熒光法、光聲光譜法、拉曼光譜法等[14]。在此重點(diǎn)介紹一下近紅外光譜法。近紅外光譜分析是一種速度快、無創(chuàng)傷、無疼痛、不需化學(xué)試劑、多組分同時檢測的分析技術(shù)。近幾十年，已在化工、食品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，可應(yīng)用于無創(chuàng)血糖檢測技術(shù)。但該法在測量血糖濃度方面，還存在著很大的障礙。主要困難在于：不同人體存在著個體差異，同一個體存在不同部位的差異，個體飲食與新陳代謝等方面亦會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。針對這一技術(shù)難題，盧啟鵬[15]提出基于血流容積變化的檢測方法，該方法理論上可以去除人體組織背景的干擾，單單含有血液信息的單一光譜可以被提取出來。但是，真正實(shí)施起來，在技術(shù)上還有很大的難度，該方法需要一臺信噪比足夠高的測量儀器。若能在此有所突破，近紅外光譜無創(chuàng)血糖檢測技術(shù)將有望應(yīng)用于臨床。2 展望綜上所述，血糖測定的方法有很多種，但每種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前臨床測定葡萄糖采用酶法的較多，因酶的試劑具有特異性高的特點(diǎn)，其中葡萄糖氧化酶法易