2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法及不確定度評(píng)估

背景介紹2,4-二氯苯氧乙酸是無(wú)味的白色至棕褐色固體，可溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，不吸濕，具有一定的腐蝕性。目前，2,4-二氯苯氧乙酸主要應(yīng)用在除草劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和水果保鮮劑方面。隨著2,4-二氯苯氧乙酸廣泛應(yīng)用，其殘留量、檢測(cè)方法以及毒性危害引起相關(guān)部門(mén)重視并開(kāi)展相應(yīng)研究。2,4-二氯苯氧乙酸對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及精子數(shù)量造成影響，可能誘發(fā)癌癥。因此，GB2763-2021中明確規(guī)定了2,4-二氯苯氧乙酸的最大限量值。盡管如此，2,4-二氯苯氧乙酸因其有效性和低成本仍被應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品，為保障農(nóng)產(chǎn)品重量安全對(duì)2,4-二氯苯氧乙酸的溯源、檢測(cè)迫在眉睫。本文采用質(zhì)量平衡法和定量核磁法兩種不同原理定值方法研制具有準(zhǔn)確純度及不確定度水平的2,4-二氯苯氧乙酸一級(jí)純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。詳細(xì)描述了不確定度評(píng)估過(guò)程，提供了兩種定值方法中可優(yōu)化的方向。明確了質(zhì)量平衡法和定量核磁法在方法優(yōu)化中可考慮的參數(shù)。

文章亮點(diǎn)01.研制2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。采用質(zhì)量平衡法和氫譜定量核磁法對(duì)2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物進(jìn)行純度定值；02.2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度值為99.6%，符合國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)條件并獲得國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定，編號(hào)為GBW09291；03.此純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為監(jiān)測(cè)食品中2,4-二氯苯氧乙酸提供溯源性、可比性，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)2,4-二氯苯氧乙酸一級(jí)純度有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)空白，為2,4-二氯苯氧乙酸藥物相關(guān)檢測(cè)提供了量值溯源與傳遞的基礎(chǔ)，保障了檢測(cè)結(jié)果的可靠性、可比性及溯源性。內(nèi)容介紹1實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實(shí)驗(yàn)方法1.2.1

定值方法1.2.1.1

質(zhì)量平衡法定值1.2.1.2

定量核磁共振法定值隨機(jī)抽取7個(gè)分裝樣品，進(jìn)行定量核磁共振法定值。采用國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)苯甲酸作為內(nèi)標(biāo)物，將6mg2,4-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、3mg苯甲酸內(nèi)標(biāo)物溶于氘代二甲基亞砜，振蕩至完全溶解后置于0.8mL核磁試管（d=5mm）中待測(cè)。1.2.2

均勻性檢驗(yàn)隨機(jī)抽取15個(gè)2,4-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)。每個(gè)包裝單位稱(chēng)取3個(gè)子樣品，稱(chēng)樣量為3mg，配置成濃度為1000mg/L的甲醇溶液，對(duì)其進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)單元進(jìn)行3次平行測(cè)定。均勻性實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用單因素方差分析法（ANOVA）和F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。1.2.3

穩(wěn)定性考察長(zhǎng)期穩(wěn)定性考察是通過(guò)依次對(duì)0、1、3、6、12個(gè)月樣品進(jìn)行穩(wěn)定性檢測(cè)，每次實(shí)驗(yàn)隨機(jī)抽取2個(gè)樣品，每個(gè)樣品進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，采用重量-容量法配制成1000mg/L的溶液。2結(jié)果與討論2.1

定值測(cè)量本研究將購(gòu)買(mǎi)的2,4-二氯苯氧乙酸純品經(jīng)過(guò)紅外光譜法、高分辨質(zhì)譜法以及核磁氫譜定性分析后分裝于4mL棕色玻璃瓶，每瓶為100mg，共200個(gè)包裝單元，作為純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物，置于-20

℃冷凍避光保存。2.1.1

質(zhì)量平衡法定值基于查閱相關(guān)文獻(xiàn)，選用AgilentPlusC18柱做為本實(shí)驗(yàn)色譜柱，流動(dòng)相選用磷酸甲醇混合溶液。為確保雜質(zhì)的充分響應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)分別配制了100、500、1000mg/L濃度的甲醇中2,4-二氯苯氧乙酸，結(jié)果如圖1所示。2.1.2

定量核磁共振法定值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范要求，同一家實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用不少于2種的不同原理定值方法定值。因此，本文開(kāi)展了2,4-二氯苯氧乙酸定量核磁定值研究。選擇內(nèi)標(biāo)物時(shí)應(yīng)考慮其結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，在氘代試劑中的溶解度以及是否與目標(biāo)物反應(yīng)，因此對(duì)選取苯甲酸做為內(nèi)標(biāo)物，結(jié)果如圖3所示。2.1.2.1

定量峰的選擇2.1.2.2

脈沖馳豫延遲時(shí)間的選擇為了保證定量峰的原子核能夠達(dá)到99.9%以上的弛豫，必須使D1/T1≥7。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化D1/T1的比值，以達(dá)到定量核磁的要求。2.1.2.3

定量核磁法定值結(jié)果隨機(jī)抽取7個(gè)2,4-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物進(jìn)行平行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。由定量核磁法測(cè)定的2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的純度值為99.65%。2.2

2,4-二氯苯氧乙酸純度定值2.3

均勻性檢驗(yàn)均勻性檢驗(yàn)采用高效液相色譜峰面積歸一法，本實(shí)驗(yàn)按照封裝時(shí)間的前、中、后順序隨機(jī)抽取15個(gè)2,4-二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，結(jié)果如圖4所示。2.4

穩(wěn)定性考察按照J(rèn)JF1343-2012，本研究中長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)估采用的是經(jīng)典穩(wěn)定性評(píng)估方案，短期穩(wěn)定性評(píng)估采用的是同步穩(wěn)定性評(píng)估方案。短期穩(wěn)定性結(jié)果如圖5a所示，通過(guò)t檢驗(yàn)觀察斜率β1的顯著性來(lái)評(píng)估短期穩(wěn)定性。2.5

不確定度評(píng)定基于前期研究報(bào)道的不確定度評(píng)估與計(jì)算方法[34]，系統(tǒng)分析評(píng)估2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在研制過(guò)程確定度，評(píng)估方法及結(jié)果如表3所示。3結(jié)論本研究建立了質(zhì)量平衡法和定量核磁法2種不同原理的方法用于2,4-二氯苯氧乙酸純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值，以上方法的精密度和準(zhǔn)確度達(dá)到純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制需求。本研究詳細(xì)描述了不確定度評(píng)估過(guò)程，提供了兩種定值方法中可優(yōu)化的方向。明確了質(zhì)量平衡法和定量核磁法在方