新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范 第20部分：核酸熒光PCR法質量控制

DB32/T3762.20—2022

目次

前言................................................................................II

1范圍..............................................................................1

2規(guī)范性引用文件....................................................................1

3術語和定義........................................................................1

4實驗室資質........................................................................1

5生物安全防護......................................................................2

6質量管理體系文件..................................................................2

7人員..............................................................................2

8環(huán)境設施..........................................................................2

9儀器設備和供應品..................................................................3

10檢測樣本.........................................................................3

11性能驗證.........................................................................4

12內部質量控制.....................................................................4

13外部質量控制.....................................................................4

14實驗環(huán)境消毒與廢棄物處理.........................................................5

I

DB32/T3762.20—2022

新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范

第20部分：核酸熒光PCR檢測質量控制

1范圍

本文件規(guī)定了新型冠狀病毒核酸熒光PCR檢測實驗室在實驗室資質、生物安全防護、質量管理體系

文件、人員、環(huán)境設施、儀器設備和供應品、檢測樣本、性能驗證、內部質量控制、外部質量控制以及

實驗環(huán)境消毒與廢棄物處理方面的通用要求。

本文件適用于新型冠狀病毒核酸熒光PCR檢測的質量控制。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實驗室生物安全通用要求

RB/T214檢驗檢測機構資質認定能力評價檢驗檢測機構通用要求

CNAS-CL02醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則

全國臨床檢驗操作規(guī)程原中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

熒光PCRreal-timefluorescencePCR

通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應過程，

結合相應的軟件對產物進行分析，計算待測樣本模板的初始濃度，用于鑒別病原微生物。

3.2

質量控制qualitycontrol

為達到質量要求所采取的作業(yè)技術和活動。

3.3

內部質量控制internalqualitycontrol

實驗室為持續(xù)監(jiān)控測量過程和測量結果以確定結果是否足夠可靠達到可以發(fā)布的程度而采取的一

組操作。

4實驗室資質

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生物安全二級實驗室（BSL-2）應向設區(qū)的市級人民政府衛(wèi)生主管部門備案，臨床檢測機構基因擴

增實驗室還應取得“臨床基因擴增檢驗實驗室”資質，并在核定的范圍內開展工作。

5生物安全防護

未經培養(yǎng)的感染性材料的操作在采用可靠方法滅活前進行核酸提取及樣本滅活等操作，應在

BSL-2進行，同時采用生物安全三級實驗室（BSL-3）的個人防護，配備N95及以上級別防護口罩、

醫(yī)用無紡布帽、護目鏡或防護面屏、連體防護服、一次性手術衣、一次性PE手套、乳膠手套、鞋套、

防水靴套等防護裝備；感染性材料或活病毒在采用可靠方法滅活后進行的核酸檢測操作應在BSL-2進

行。

6質量管理體系文件

實驗室應依據GB19489、RB/T214、CNAS-CL02、《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等文件建立質量管

理體系文件。

7人員

7.1采樣人員

從事新冠病毒核酸檢測樣本采集的人員應經過生物安全培訓，熟悉樣本種類和采集方法，熟練掌握

樣本采集操作流程及注意事項，做好樣本信息的記錄，確保樣本質量符合要求、樣本及相關信息可追溯。

7.2檢測人員

實驗室檢測人員應具備實驗室工作經歷以及相關專業(yè)技術技能，接受過新冠病毒核酸PCR檢測技

能和生物安全培訓。檢測機構應按照所開展檢測項目及樣本量配備實驗室檢測人員，以保證及時、高效

完成檢測和結果報告。

8環(huán)境設施

8.1實驗室總體布局和各部位的安排應減少潛在的對樣本的污染和對人員的危害。

8.2開展新冠病毒核酸檢測的實驗室一般設置以下區(qū)域：試劑儲存和準備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增分析

區(qū)，各區(qū)的主要功能包括：

a)試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的制備，以及離心管、吸

頭等消耗品的貯存和準備。

b)樣本制備區(qū)：轉運箱的開啟、樣本的滅活，核酸提取及其加入至擴增反應管（孔）等。

c)擴增分析區(qū)：核酸擴增和產物分析。

8.3根據所使用儀器的功能，區(qū)域可適當合并。如采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動

化分析儀，樣本制備區(qū)和擴增分析區(qū)可合并。

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8.4各區(qū)域在物理空間上應完全相互獨立，不得有空氣的直接相通，各區(qū)域應有明確的標記，不同區(qū)

域內的設備、物品不得混用。

8.5人員開展工作應嚴格遵守從“試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增分析區(qū)”的單一流程制度，

不得逆向進入前一工作區(qū)。

8.6試劑儲存和準備區(qū)宜采用常壓或正壓，樣本制備和擴增分析區(qū)采用常壓或負壓且兩區(qū)壓力持平。

有正壓控制的工作區(qū)，從緩沖間到核心工作間壓力遞增；有負壓控制的工作區(qū)，從緩沖間到核心工作間

壓力遞減；各房間之間壓差宜不低于10Pa，可通過安裝排風扇、負壓排風裝置或其他可行的方式實現。

8.7當檢測方法對環(huán)境條件有要求或環(huán)境條件影響檢測結果時，應監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件，并設

置允許范圍。

9儀器設備和供應品

9.1應選擇國家藥品監(jiān)督管理部門批準的試劑，擴增儀選用擴增檢測試劑盒推薦的型號，使用核酸提

取儀時宜使用儀器配套的提取試劑。

9.2宜選用帶濾芯的一次性加樣器吸頭。

9.3對可能影響檢測質量的供應品（包括實驗用水）應在使用前進行符合性驗收。

9.4應對檢測結果的準確性或有效性有影響的設備，包括用于測量環(huán)境條件等輔助測量設備有計劃地

實施檢定或校準。設備在投入使用前，應采用核查、檢定或校準等方式，以確認其是否滿足檢測的要求。

9.5對于沒有檢定、校準規(guī)程，但需出具檢測數據的儀器設備，實驗室應根據隨機說明書和有關技術

資料確定可接受標準、維護和驗證的程序及頻次。

9.6設備出現故障或者異常時，實驗室應采取相應措施，如停止使用、隔離或加貼停用標簽、標記，

直至修復并通過檢定、校準或核查表明能正常工作為止。應核查這些缺陷或偏離對以前檢測結果的影響。

9.7實驗室配制的試劑應貼好標簽，并在標簽上注明試劑名稱、容量、溶劑類型、配制及使用日期和/

或保質期。若試劑有特殊使用說明、有毒有害提示或使用限制也應在標簽上注明。

10檢測樣本

10.1樣本種類

包括口咽拭子、鼻咽拭子、深咳痰液、肺泡灌洗液、支氣管灌洗液、呼吸道吸取物、便標本/肛拭

子、血液、血清、尿液、物體表面、污水等。

10.2樣本包裝

所有樣本應放在大小適合的帶螺旋蓋、內有墊圈的樣本采集管里，擰緊。容器外注明樣本編號、種

類、姓名及采樣日期或等效標識。密閉后的樣本放入大小合適的塑料袋內密封，每袋裝一份樣本。

10.3樣本送檢

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樣本采集后室溫放置不超過4h，應在4h內送到實驗室。如果需要長途運輸樣本，應采用干冰等

制冷方式進行保存，嚴格按照相關規(guī)定包裝運輸。

10.4樣本接收

應在生物安全柜內打開內包裝，樣本運送人員和接收人員對樣本進行雙簽收。

10.5樣本保存

樣本應盡快進行檢測，能在24h內檢測的樣本可置于4℃保存；24h內無法檢測的樣本則應置

于-70℃或以下保存（如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。應設立專庫或專柜單獨保存

樣本，避免反復凍融。

11性能驗證

11.1在用于樣本檢測前，實驗室檢測人員應對由提取試劑、提取儀、擴增試劑、擴增儀等組成檢測系

統進行必要的性能驗證，性能指標包括但不限于精密度（至少要有重復性）和最低檢測限，以確認能否

復現商品試劑盒說明書載明的性能參數，能否達到預期的檢測目的。宜選用高靈敏的試劑（檢測限≤500

拷貝/mL）。

11.2每當試劑盒的試劑組分或試驗過程改變，或使用新批號或新貨運號的試劑盒之前，應重新進行性

能驗證。

12內部質量控制

12.1標準操作規(guī)程制定

實驗室應制定并嚴格執(zhí)行標準操作規(guī)程，包括試劑準備、樣本前處理、核酸提取、核酸擴增、結果

分析及報告、可疑樣本復檢流程。

12.2內部質量控制方式

12.2.1每批檢測至少有1份弱陽性質控品（第三方質控品，通常為檢出限的1.5倍～3倍）、3份陰

性質控品（生理鹽水）。質控品隨機放在待測樣本中，參與從提取到擴增的全過程。

12.2.2應選擇合適的內源性對照如“管家”基因或外源性對照如假病毒作為內對照以評價實驗過程的

完整性。

12.2.3物品和環(huán)境樣本的采集檢測，還需在采樣前及采樣過程中至少設一個現場空白樣本及一個運輸

空白樣本，以進行過程中的質量控制。

12.2.4應定期采用保存液、生理鹽水或DEPC（焦碳酸二乙酯）水開蓋放置過夜或拭子擦拭等方式對

樣品處理區(qū)域（含生物安全柜）、提取設備、加樣器、冰箱把手、門把手等部位進行環(huán)境污染監(jiān)測。

12.3實驗結果有效性的判定

當出現下述情況中的任何一種或多種，當次實驗結果無效，查找原因，重做實驗。

a)陰性質控品出現擴增；

b)陽性質控品無擴增；

c)內對照不滿足試劑盒說明書規(guī)定的要