免疫技術(shù)的發(fā)展

免疫技術(shù)的進(jìn)展臨床免疫檢驗(yàn)教研室免疫技術(shù)發(fā)展及類(lèi)型免疫新技術(shù)進(jìn)展免疫技術(shù)通過(guò)對(duì)人體免疫學(xué)基礎(chǔ)理論認(rèn)識(shí)，將生物技術(shù)、材料技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等多學(xué)科的技術(shù)與發(fā)揮免疫功能相關(guān)的細(xì)胞、分子等免疫組分相結(jié)合或改造，應(yīng)用于疾病的免疫病理機(jī)制研究、診斷與鑒別診斷、治療及效果評(píng)價(jià)和預(yù)后判斷的技術(shù)統(tǒng)稱(chēng)。依據(jù)應(yīng)用目的不同，分為免疫檢測(cè)技術(shù)和免疫治療技術(shù)經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)免疫凝集試驗(yàn)免疫沉淀試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)（特異性及敏感性提高）自動(dòng)化免疫學(xué)技術(shù)自動(dòng)化免疫分析儀（反應(yīng)進(jìn)行加快）一、免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展歷程免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展歷程簡(jiǎn)表（一）

年

代學(xué)

者

貢

獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham，M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal，A．Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet，O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)1900K.Landsteiner人類(lèi)ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)1935M.Heidelberger，F(xiàn).Kendall純化抗體，定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)19480.Ouchterlony，S.Elek雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)1953P.Grabar，C.Williams免疫電泳分析，Ig多樣性1960R.Yallow，S.Berson放射免疫試驗(yàn)免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展歷程簡(jiǎn)表（二）

年代

學(xué)

者

貢

獻(xiàn)1966S.Avrames，J.Uriel，等

酶標(biāo)免疫技術(shù)1971E.Engvall，P.Perlmann等ELISA1972K.Rubenstein均相酶免疫試驗(yàn)1975G.Kohler，C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體1977H.Arakawe等化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)1982O.Meurman等時(shí)間分辨熒光免疫試驗(yàn)1983I.Weeks吖啶酯標(biāo)記直接化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)1990J.Leland電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)1992T.Sano免疫-PCR技術(shù)1999E.Ullman發(fā)光氧通道均相化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)免疫學(xué)技術(shù)類(lèi)別免疫檢測(cè)技術(shù)免疫治療技術(shù)免疫檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)原理經(jīng)典檢測(cè)技術(shù)技術(shù)創(chuàng)新—多學(xué)科交叉抗原抗體反應(yīng)基本原理抗原抗體反應(yīng)：

抗原與相應(yīng)的抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。體內(nèi)抗原抗體反應(yīng)：體液免疫應(yīng)答體外抗原抗體反應(yīng)：血清學(xué)反應(yīng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用：

1.疾病的診斷、治療效果評(píng)價(jià)及發(fā)病機(jī)理探討：如：感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)、腫瘤等

2.免疫分子的定性、定量測(cè)定：如：細(xì)胞因子、粘附分子、細(xì)胞受體、補(bǔ)體、抗體等

3.抗原物質(zhì)的定性、定量檢測(cè)：如：病原微生物及其代謝產(chǎn)物，組織細(xì)胞、蛋白質(zhì)等

4.免疫細(xì)胞的分離、鑒定及功能測(cè)定：如：T細(xì)胞及其亞群等經(jīng)典免疫檢測(cè)技術(shù)凝集反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）免疫細(xì)胞分離技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)ELISA免疫新技術(shù)---多學(xué)科交叉循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)(CirculatingTumorCelldetect)CellSearchsystembasicmechnismToday,theCellSearch?SystemenumeratesCTCofepithelialorigin

–Tumorsofepithelialorigindefinescarcinoma=~85%ofallsolidtumorsEpithelialcellsdistinguishedfromleukocytesusingfluorescentlabeledmonoclonalantibodiesspecificforleukocytes(CD-45)andepithelialcells(cytokeratins8,18,and19)SearchingforCancercellinblood免疫治療，又稱(chēng)生物免疫治療，其通過(guò)調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)來(lái)對(duì)抗、抑制和殺滅腫瘤細(xì)胞，有效清除病人體內(nèi)殘存腫瘤細(xì)胞的一種新興治療手段，也是繼手術(shù)、放療和化療后發(fā)展的第四類(lèi)癌癥治療方法。免疫治療技術(shù)腫瘤免疫治療：發(fā)展趨勢(shì)和研究熱點(diǎn)傳統(tǒng)療法手術(shù)切除化療放射治療小分子靶向藥腫瘤靶向單抗靶向療法免疫療法調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，殺傷腫瘤細(xì)胞發(fā)展趨勢(shì)血管淋巴結(jié)腫瘤T細(xì)胞動(dòng)員和激活T細(xì)胞遷移至腫瘤T細(xì)胞浸潤(rùn)腫瘤識(shí)別腫瘤細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞抗原釋放腫瘤抗原呈遞Anti-CTLA4Anti-CD137Anti-OX40Anti-CD27IL-2IL-12Anti-VEGF過(guò)繼免疫細(xì)胞Anti-PD-L1/PD-1化療、放療、小分子靶向療法腫瘤疫苗IFN-αGM-CSFAnti-CD40TLR拮抗劑ChenDS,MellmanI.Immunity.2013;39(1):1-10.腫瘤免疫循環(huán)中的潛在治療靶點(diǎn)腫瘤免疫治療方式概況過(guò)繼細(xì)胞療法CIK腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞承載腫瘤抗原的DC腫瘤疫苗腫瘤相關(guān)抗原抗腫瘤T細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)阻斷劑單抗腫瘤單抗非特異性免疫刺激劑胸腺肽α細(xì)胞因子干擾素治療性抗體（抗體藥物）動(dòng)物源抗血清基因工程改造人源化單抗抗體藥物偶聯(lián)物治療性抗體作用機(jī)理直接效應(yīng)誘導(dǎo)凋亡抑制增殖阻斷生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體干擾血管生成間接效應(yīng)依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒（CDC）依賴抗體的細(xì)胞毒（ADCC)

作為毒素、放射性同位素和細(xì)胞毒藥物的載體形成抗獨(dú)特型抗體通過(guò)雙特異性抗體靶向效應(yīng)細(xì)胞鼠源抗體全人源化抗體制備技術(shù)基因工程抗體真核細(xì)胞高效表達(dá)流程圖人抗體鼠—將小鼠Ig基因滅活，然后轉(zhuǎn)入人Ig基因，生產(chǎn)出人單抗遺傳工程鼠全人源化抗體制備技術(shù)帕尼單抗：第一個(gè)全人單克隆抗體，其靶向作用于表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）。2006年美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，用于治療化療失敗后轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌。2007.10特點(diǎn)：半衰期長(zhǎng)；

2周給一次藥，可與化療同時(shí)進(jìn)行；副反應(yīng)減少

結(jié)腸癌治療：每月2次。2萬(wàn)歐元

乳腺癌治療：每年2萬(wàn)歐元

癌癥治療12個(gè)劑量0.7萬(wàn)歐元抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）何為ADC？將抗體與細(xì)胞毒性藥物連接起來(lái)，通過(guò)抗體的靶向作用將細(xì)胞毒藥物靶向腫瘤，進(jìn)而降低化療中常見(jiàn)的藥物非特異性的全身毒性。首例ADC藥物2000年被FDA批準(zhǔn)用于治療急性粒細(xì)胞白血病的Mylotarg，但由于偶聯(lián)技術(shù)、靶向性、有效性等受限，完整的抗體偶聯(lián)藥物在血液不穩(wěn)定，導(dǎo)致致死性毒性的產(chǎn)生，于2010年撤市再次熱門(mén)2011年被FDA批準(zhǔn)用于治療霍奇金淋巴瘤和系統(tǒng)性間變性大細(xì)胞淋巴瘤的SGN-35，2013年被FDA批準(zhǔn)用于HER2陽(yáng)性乳腺癌的T-DM1的研制成功抗體連接藥物放射免疫偶聯(lián)物免疫毒素化學(xué)免疫偶聯(lián)物抗體導(dǎo)向酶-前藥治療抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）2007.8VHCDR1-VHFR2-VLCDR3保留了親本抗體結(jié)合抗原的能力，但穿透性更強(qiáng)；將此抗體與毒素連接，形成導(dǎo)向藥物ＰＭＣ－ＥＢＶ，可抑制腫瘤生長(zhǎng)。InvivoeffectsofPMC-EBVagainstsolidtumorsa,BALB/cmousebearing28-d-oldEBV-infectedBLtumor(Burkitt’slymphoma)b,20-dPMC-EBVtreatment含兩個(gè)CDR及骨架區(qū)的小分子抗體模擬物可靶向腫瘤

丘小慶等（四川大學(xué)華西醫(yī)院）免疫細(xì)胞介導(dǎo)免疫檢查點(diǎn)阻斷劑過(guò)繼細(xì)胞免疫療法CAR-T免疫檢查點(diǎn)阻斷劑免疫檢查點(diǎn)是一類(lèi)免疫抑制性的分子，可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和廣度，從而避免正常組織的損傷和破壞，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，免疫檢查點(diǎn)成為免疫耐受的主要原因之一。T細(xì)胞的抗腫瘤反應(yīng)受到復(fù)雜的激活信號(hào)和抑制信號(hào)（”檢查點(diǎn)”）的平衡調(diào)控。這些信號(hào)受體是免疫治療的重要潛在靶點(diǎn)。激活受體抑制受體——”免疫檢查點(diǎn)”T細(xì)胞抗腫瘤活性激動(dòng)型單抗阻斷型單抗抗原活化的樹(shù)突狀細(xì)胞（AADC）Antigen-PulsedDCVaccination(systemic)LeukapheresisDCGeneration(GM-CSF,IL-4)TumorAntigenImmune&ClinicalMonitoringVaccination(Intratumoral)DCMaturation(TNF,CD40-L)AgloadingDC-CIK活性殺傷免疫細(xì)胞-CTLCAR-TCAR-T，ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy，嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法CAR-T/TCR-T技術(shù)是從患者體內(nèi)抽取淋巴細(xì)胞，然后用病毒轉(zhuǎn)染一個(gè)基因（基因來(lái)源于抗原受體的叫CAR，來(lái)源于TCR的叫TCR）進(jìn)去，該基因編碼一個(gè)針對(duì)特定腫瘤抗原的特異性抗體的識(shí)別區(qū)，然后于體外經(jīng)各種細(xì)胞因子或腫瘤特異性抗原活化擴(kuò)增后再回輸至體內(nèi)。嵌合抗原受體的T細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的殺傷繞過(guò)了抗原提呈和MHC的限制性，使其殺傷活化最大化。CAR-T基本結(jié)構(gòu)基因工程修飾的T細(xì)胞過(guò)繼免疫治療科學(xué)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)技術(shù)應(yīng)用型人才所需知識(shí)結(jié)構(gòu)知識(shí)類(lèi)別技術(shù)管理、人文經(jīng)營(yíng)安全財(cái)務(wù)、會(huì)計(jì)