常用基因檢測(cè)方法原理與局限-1

常用基因檢測(cè)方法原理與局限單擊此處添加副標(biāo)題陳白雪Oct.31,2018實(shí)用文檔染色體?。喝旧w畸變引起單基因遺傳病常染色體顯性遺傳：攜帶雜合致病突變即可發(fā)病。常染色體隱性遺傳：攜帶純合致病突變或復(fù)合雜合突變才能發(fā)病。伴X連鎖遺傳伴Y連鎖遺傳多基因遺傳?。憾嗷?、環(huán)境因素聯(lián)合作用導(dǎo)致疾病發(fā)生線(xiàn)粒體遺傳病：呈母系遺傳

（復(fù)習(xí)：母系遺傳=患病女性所有子女都患?。浚?shí)用文檔沒(méi)有哪一種檢測(cè)方法能夠搞定所有的事情，如果有，那就是忽悠沒(méi)有一種藥包治百病，如果有，那就是毒藥實(shí)用文檔復(fù)習(xí)遺傳病的基因檢測(cè)，本質(zhì)上就是以參考基因?yàn)榛鶞?zhǔn)，對(duì)樣本基因進(jìn)行校對(duì)實(shí)用文檔實(shí)用文檔經(jīng)典的直接測(cè)序方法，基因突變檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”檢測(cè)范圍：細(xì)胞核基因線(xiàn)粒體基因檢測(cè)精度：20個(gè)以?xún)?nèi)堿基的替換、缺失、重復(fù)局限性?xún)H適用于目標(biāo)基因明確的單基因遺傳病檢測(cè)一代測(cè)序/Sanger測(cè)序?qū)嵱梦臋nSanger測(cè)序應(yīng)用舉例實(shí)用文檔探針與待檢測(cè)基因序列進(jìn)行特異性雜交，通過(guò)探針的連接、PCR擴(kuò)增，收集數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析可應(yīng)用于缺失、重復(fù)突變檢測(cè)，主要針對(duì)基因外顯子。亦可用于分析特定的點(diǎn)突變（通常是熱點(diǎn)突變），前提是試劑盒里已經(jīng)有針對(duì)該突變?cè)O(shè)計(jì)的探針多重連接酶依賴(lài)性探針擴(kuò)增技術(shù)（MLPA）實(shí)用文檔技術(shù)原理實(shí)用文檔MLPA探針結(jié)構(gòu)擴(kuò)增產(chǎn)物毛細(xì)管電泳結(jié)果實(shí)用文檔實(shí)用文檔片段分析（FragmentAnalysis，F(xiàn)A）借助毛細(xì)管電泳，檢測(cè)待測(cè)物（通常為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物）中是否有特定長(zhǎng)度（范圍）DNA片段出現(xiàn)無(wú)法檢測(cè)出序列內(nèi)部的堿基改變例如“SRY基因片段分析”項(xiàng)目：提取樣本總DNA后，用SRY基因特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，觀(guān)察是否有目標(biāo)長(zhǎng)度的擴(kuò)增產(chǎn)物片段分析的應(yīng)用范圍廣泛實(shí)用文檔一對(duì)染色體分別來(lái)自父母。當(dāng)缺失了其中一方來(lái)源的染色體（LOH），或者是某一對(duì)染色體同時(shí)來(lái)自父或母親的一方（單親二倍體，UPD）UPD可以發(fā)生在局部，也可發(fā)生于整個(gè)染色體組如果發(fā)生在染色體“印跡區(qū)”，則可導(dǎo)致疾病發(fā)生可用于單親二倍體/LOH的檢測(cè)片段分析（FragmentAnalysis，F(xiàn)A）以下為全染色體組UPD的CMA結(jié)果實(shí)用文檔對(duì)樣本目標(biāo)序列進(jìn)行甲基化特異性PCR后，印跡（DNA甲基化狀態(tài)）不同的序列會(huì)發(fā)生堿基的改變，并擴(kuò)增得到長(zhǎng)短不一的片段借助毛細(xì)管電泳，檢測(cè)待測(cè)物（通常為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物）中是否有特定長(zhǎng)度DNA片段出現(xiàn)實(shí)用文檔實(shí)用文檔低通量檢測(cè)：“有的放矢”Sanger測(cè)序MLPAFA已知微小突變√√×未知微小突變√××大片段重復(fù)/缺失×√√*UPD（單親雙體）××√動(dòng)態(tài)突變√**×√*：FA分析大片段缺失需要明確具體缺失范圍，而MLPA只需要明確基因即可

**：理論上Sanger測(cè)序也能數(shù)動(dòng)態(tài)突變重復(fù)單位個(gè)數(shù)，但人工數(shù)易出錯(cuò)，且當(dāng)片段過(guò)長(zhǎng)時(shí)容易超出Sanger測(cè)序分析的范圍。猜中“有獎(jiǎng)”猜不中“白折騰”實(shí)用文檔G顯帶染色體核型分析技術(shù)仍然是細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”應(yīng)用范圍使染色體大小和形態(tài)一目了然,特別是發(fā)生在染色體上的遺傳疾病，如染色體倒位、易位、互換和短缺，都可以及時(shí)發(fā)現(xiàn),有利于臨床診斷局限性細(xì)胞培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)、分辨率低以及耗費(fèi)人力對(duì)線(xiàn)粒體病無(wú)能為力染色體顯帶技術(shù)，Chromosomebanding報(bào)告單出現(xiàn)類(lèi)似右邊的圖像→_→就是核型報(bào)告有該項(xiàng)目疑問(wèn)請(qǐng)咨詢(xún)@陳帆@吳夢(mèng)華47，XX，+21實(shí)用文檔應(yīng)用范圍兒童復(fù)雜、罕見(jiàn)遺傳病，如：智力障礙、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、多發(fā)畸形、孤獨(dú)癥樣臨床表現(xiàn)，排除染色體病、代謝病和脆性X綜合征之后的全基因組CNV檢測(cè)（包括智力低下、發(fā)育遲緩、多種體征畸形以及自閉癥中，CMA比傳統(tǒng)G顯帶核型分析技術(shù)的檢出率提高了10％）對(duì)自然流產(chǎn)、胎死宮內(nèi)、新生兒死亡等妊娠產(chǎn)物的遺傳學(xué)檢測(cè)可以檢測(cè)出同源性單親二倍體（UPD）局限性無(wú)法檢出染色體倒位,易位,互換等結(jié)構(gòu)變異染色體微陣列分析

Chromosomemicroarrayanalysis,CMA相當(dāng)于升級(jí)版的核型分析，能查到比普通核型分析更加細(xì)小的拷貝數(shù)改變以及單親二倍體。但是結(jié)構(gòu)改變不行書(shū)撕成一頁(yè)一頁(yè)的再拿去校對(duì)，就不能檢查出頁(yè)碼裝訂錯(cuò)誤了實(shí)用文檔213456781357157正常實(shí)用文檔213456781357151同源UPD實(shí)用文檔213456781357153異源UPD實(shí)用文檔實(shí)用文檔PWS/AS：CMAorFA？？？CMAFA核基因組全局分析√×僅檢測(cè)患者，區(qū)分PWS/AS×√僅檢測(cè)患者，區(qū)分LOH/UPD√×對(duì)于首選片段分析（FA）方法的PWS/AS患者，先做3370項(xiàng)目（協(xié)助確診）。若結(jié)果為陽(yáng)性，可以再做3381（協(xié)助判斷預(yù)后）注意：若患者為異源性UPD，則CMA無(wú)法檢出，但片段分析項(xiàng)目可以……實(shí)用文檔優(yōu)勢(shì)：能同時(shí)對(duì)無(wú)數(shù)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，效率極高技術(shù)特點(diǎn)：每次測(cè)很短的片段（讀長(zhǎng)較短），但是可以通過(guò)超大量的平行測(cè)序，獲得大量的序列?！跋乱淮睖y(cè)序技術(shù)

Next-generationsequencing,NGS實(shí)用文檔（某個(gè)位點(diǎn)的）深度：這個(gè)位點(diǎn)被測(cè)的次數(shù)read(s)：測(cè)序直接得出的短序列相當(dāng)于把幾本一樣的書(shū)撕碎了（一份DNA溶液里面有無(wú)數(shù)條DNA分子）。再叫一堆人（一個(gè)人就是一個(gè)read），每人發(fā)一個(gè)碎片校對(duì)。由于撕碎是隨機(jī)的，會(huì)有N個(gè)人校對(duì)到同一個(gè)句子（N=深度）。一個(gè)地方被校對(duì)的次數(shù)越多，校對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性就越高。實(shí)用文檔高通量檢測(cè)：“鳥(niǎo)槍法”核型分析CMANGS核基因組全局分析√√√*大片段缺失/重復(fù)>=3M>=100k×**結(jié)構(gòu)改變√××單親二倍體（UPD）×√×標(biāo)