熒光分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)和原理 光度計(jì)工作原理

第第頁熒光分光光度計(jì)基本結(jié)構(gòu)和原理光度計(jì)工作原理熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能供應(yīng)包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等很多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190～650nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200～800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。

基本結(jié)構(gòu)和原理，光源與檢測(cè)器成直角方式布置。

1.光源：

為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。

2．激發(fā)單色器：

置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。

3．發(fā)射單色器：

置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常接受光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

4．檢測(cè)器：

一般用光電管或光電倍增管作檢測(cè)器?？蓪⒐庑盘?hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。

5．樣品室：

通常由石英池（液體樣品用）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）構(gòu)成。丈量液體時(shí)，光源與檢測(cè)器成直角布置；丈量固體時(shí)，光源與檢測(cè)器成銳角布置。紫外可見分光光度計(jì)認(rèn)真操作流程及校準(zhǔn)方法

1、紫外可見分光光度計(jì)光度測(cè)量

在模式選擇屏幕中選擇1、Photometric光度選項(xiàng)，將顯示參數(shù)配置屏幕；

用GOTOWL鍵設(shè)定測(cè)量波長(zhǎng)；

按F2鍵設(shè)定進(jìn)樣掌控；

按START/STOP鍵時(shí)，測(cè)量開始，顯示測(cè)量屏幕；

如需做空白校正，應(yīng)在測(cè)量前先設(shè)置空白樣品，然后，按AUTO—ZERO鍵，將測(cè)量值置為OABS（100%）；

2、紫外可見分光光度計(jì)校正

開機(jī)預(yù)熱10分鐘足矣；

放入黑塊和標(biāo)樣（沒有的本身配），關(guān)閉蓋子；

校0；

把燈光對(duì)著黑塊，把透光度調(diào)0；

把燈光對(duì)標(biāo)樣，將吸光度調(diào)到100%；

3、參比溶液介紹

參比溶液又稱空白溶液。測(cè)量時(shí)用作比較的、不含被測(cè)物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相像的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時(shí)，基體中，雖不含被測(cè)物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時(shí)必需保證其不影響測(cè)試。常常碰到的是試劑空白中含有被測(cè)物質(zhì)，此時(shí)必需經(jīng)過純化將其除去。否則將影響測(cè)定結(jié)果。

4、紫外可見分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)

1、開機(jī)前應(yīng)先預(yù)熱15分鐘，然后開機(jī)自檢；

2、濕度要掌控在75%左右，溫度在5～30度之間；

3、儀器要穩(wěn)壓電源，接地要好。并且避開陽光直接照射；

5、常見故障及處理方法

光門不能完全關(guān)閉：修復(fù)光門部件，使其完全關(guān)閉；

透過率“100%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕；

儀器嚴(yán)重受潮：可