免疫學技術的范疇與應用

免疫學技術的范疇與應用免疫學技術的范疇與應用第1頁緒言免疫學技術的范疇與應用第2頁

第一節(jié)免疫學技術范圍與應用一、免疫學技術范圍二、免疫學技術應用特點免疫學技術的范疇與應用第3頁免疫學技術范圍1、對含有免疫活性物質定性、定量測定2、對免疫系統(tǒng)組成成份數(shù)量、狀態(tài)測定免疫學技術的范疇與應用第4頁

免疫學技術應用特點1、對象——“包羅萬象”2、方法——“兼容并蓄”免疫學技術的范疇與應用第5頁

第二節(jié)相關免疫學基礎概念一、抗原概念與屬性二、免疫細胞概念與分類三、免疫應答概念與過程免疫學技術的范疇與應用第6頁免疫原性——可識別、可反應性（誘導機體產(chǎn)生免疫應答特征）免疫反應性

——選擇結合性（和免疫應答產(chǎn)物特異性結合特征）抗原概念與屬性免疫學技術的范疇與應用第7頁免疫細胞概念與分類免疫細胞（Immunecells）泛指全部參加免疫應答及與免疫應答活動相關細胞。免疫活性細胞（Immunecompetentcell，ICC）能夠接收抗原刺激、產(chǎn)生特異性活化、增殖、分化并形成效應產(chǎn)物淋巴細胞。免疫學技術的范疇與應用第8頁

免疫細胞類型

紅細胞血小板肥大細胞中性粒細胞巨噬細胞樹突狀細胞漿細胞T細胞NK細胞免疫學技術的范疇與應用第9頁免疫應答概念與過程免疫應答（immuneresponse）免疫系統(tǒng)接觸抗原后，免疫細胞反抗原進行識別；并使特異性淋巴細胞活化、增殖；表現(xiàn)出免疫效應過程。免疫應答階段1、抗原識別階段（antigen-recognizingphase）2、淋巴細胞活化階段（lymphocyte-activatingphase）

3、抗原去除階段（antigen-eliminatingphase）免疫學技術的范疇與應用第10頁

第三節(jié)抗原抗體反應基礎原理一、抗原抗體反應原理二、抗原抗體反應特點三、影響抗原抗體反應原因免疫學技術的范疇與應用第11頁抗原抗體反應原理1、抗原抗體結合作用力2、抗原抗體結合物析出原因免疫學技術的范疇與應用第12頁引發(fā)抗原抗體結合作用力1、電荷引力（庫侖引力）2、電子云引力（VanderWaals力）3、氫鍵結協(xié)力4、疏水作用力免疫學技術的范疇與應用第13頁抗原抗體結合物析出原因析出+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—電解質+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—+——++——+—++—+—+—免疫學技術的范疇與應用第14頁

抗原抗體反應特點1、特異性2、可逆性3、適合百分比性免疫學技術的范疇與應用第15頁特異性抗原A抗原C抗原B特異性反應交叉反應無反應免疫學技術的范疇與應用第16頁可逆性K（親和常數(shù)）=Ag+AbAgAb免疫學技術的范疇與應用第17頁適合百分比性抗體含量抗原含量前帶后帶等價帶免疫學技術的范疇與應用第18頁網(wǎng)格學說（latticetheory）抗體過?？乖^?？贵w抗體百分比適當免疫學技術的范疇與應用第19頁

抗原抗體反應影響原因1、電解質2、酸堿度（pH值6-8）3、溫度（37-42。C）免疫學技術的范疇與應用第20頁

第四節(jié)免疫學檢測技術評價一、評價標準

二、特異性與敏感性關系免疫學技術的范疇與應用第21頁評價標準Specificity（特異）Sensitivity（敏感）Simplicity（簡便）Safety（安全）Saving（節(jié)約）免疫學技術的范疇與應用第22頁特異性與敏感性關系特異性高、敏感性低

敏感性高、特異性低免疫學技術的范疇與應用第23頁抗原提取與制備免疫學技術的范疇與應用第24頁

第一節(jié)抗原/免疫原制備基礎概念一、抗原制備目標二、抗原“純度”三、抗原制備主要技術路徑免疫學技術的范疇與應用第25頁抗原制備目標免疫原：激活T、B細胞半抗原：檢測對應抗體免疫學技術的范疇與應用第26頁抗原“純度”免疫原：保留足夠可被T、B細胞識別抗原決定簇半抗原：盡可能降低影響反應特異性抗原決定簇免疫學技術的范疇與應用第27頁抗原制備主要技術路徑天然抗原——分離、純化半抗原——人工合成、載體聯(lián)接抗原肽——合成、基因工程制備免疫學技術的范疇與應用第28頁

第二節(jié)完全抗原/免疫原制備方法一、顆粒性抗原制備二、可溶性抗原制備免疫學技術的范疇與應用第29頁顆粒性抗原制備1、采集、分離抗原2、無害化處理免疫學技術的范疇與應用第30頁可溶性抗原制備與純化1、處理與粉碎2、蛋白質分離3、單一組分提取4、抗原純度判定

免疫學技術的范疇與應用第31頁處理與粉碎組織粉碎：機械、生物

細胞破碎：物理、化學、生物

免疫學技術的范疇與應用第32頁蛋白質分離選擇性沉淀：鹽析有機溶劑沉淀水溶性非離子型聚合物沉淀

透析技術：超濾技術：

免疫學技術的范疇與應用第33頁單一組分提取層析技術：凝膠過濾離子交換親和層析

離心技術：差速離心密度梯度離心電泳技術：電泳洗脫等電聚焦免疫學技術的范疇與應用第34頁凝膠層析（分子篩）免疫學技術的范疇與應用第35頁離子交換層析+++———————++++++++——+++——++免疫學技術的范疇與應用第36頁親和層析免疫學技術的范疇與應用第37頁抗原純度判定方法：層析性質測定電泳法免疫法指標：電泳純免疫純免疫學技術的范疇與應用第38頁

第三節(jié)半抗原免疫原制備方法一、載體選擇二、半抗原與載體聯(lián)接免疫學技術的范疇與應用第39頁載體選擇蛋白質載體：BSA、HAS、OVA、KLH聚合多肽載體：多聚賴氨酸高分子聚合物載體：PVP、羧甲基纖維素免疫學技術的范疇與應用第40頁半抗原與載體聯(lián)接1、連接方式：物理法（吸附）化學法2、化學連接方法：直接聯(lián)接法：間接聯(lián)接法：免疫學技術的范疇與應用第41頁半抗原與載體直接聯(lián)接碳化二亞胺法蛋白質-COO—+R-N+=CN-R`

H-N+-R蛋白質-COO-C-NH-R`+半抗原-NH2

O蛋白質-C-NH-半抗原+R-NH-CO-NHR`免疫學技術的范疇與應用第42頁半抗原與載體直接聯(lián)接

戊二醛法蛋白質-NH2

+半抗原-NH2+COH-（CH2）

3-

COH蛋白質-N=CH-（CH2）

3–

CH=N-半抗原免疫學技術的范疇與應用第43頁半抗原與載體直接聯(lián)接

氯甲酸異丁酯法半抗原-COOH

+Cl-COO-CH2CH（CH3）2

OO半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2+蛋白質-NH2

半抗原-CO-NH-蛋白質+HO-CH2CH（CH3）2

免疫學技術的范疇與應用第44頁半抗原與載體間接聯(lián)接琥珀酸酐法

OO半抗原-CH2–OH+C-O-CCH3CH3O半抗原-CH2–O-C-(CH2)2-COOH免疫學技術的范疇與應用第45頁半抗原與載體間接聯(lián)接O-（羥甲基）羥胺法半抗原-C=O

+H2N-O-CH2-COOH

半抗原-C=N-O-CH2-COOH

免疫學技術的范疇與應用第46頁半抗原與載體間接聯(lián)接一氯醋酸鈉法半抗原--OH

+Cl-CH2-COONa半抗原--CH2-COOH免疫學技術的范疇與應用第47頁半抗原與載體間接聯(lián)接重氮化對氨基苯甲酸法HOOC--NH2

+NaNO2HOOC--N=N半抗原--OH

+HOOC--N=N半抗原--N=N-