實(shí)驗(yàn)五-霉菌的形態(tài)觀察

實(shí)驗(yàn)五霉菌得形態(tài)觀察、微生物得測(cè)微與計(jì)數(shù)一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)得基本方法,初步了解霉菌得形態(tài)特征及鑒別依據(jù)。2、學(xué)習(xí)使用目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺在顯微鏡下測(cè)定微生物大小得方法。3、了解血球計(jì)數(shù)板得構(gòu)造與使用方法。學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測(cè)定微生物數(shù)量得方法。4、總結(jié)并掌握細(xì)菌、放線菌與霉菌得鑒別方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

1、霉菌定義及用途霉菌不就是真菌分類中得名詞,而就是絲狀真菌得統(tǒng)稱。霉菌在自然界中廣泛分布,與食品得關(guān)系密切,就是人類在實(shí)踐活動(dòng)中最早利用得一種微生物,如早期進(jìn)行得醬與醬油得制作等。霉菌也可以使食品發(fā)生腐敗變質(zhì)或產(chǎn)生毒素,影響人體健康甚至危及生命。2、霉菌特征霉菌可產(chǎn)生分支得菌絲體,分基內(nèi)菌絲與氣生菌絲,氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲,由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。菌絲體(尤其就是繁殖菌絲)及孢子得形態(tài)特征就是識(shí)別不同種類霉菌得重要依據(jù)。霉菌菌絲與孢子得寬度通常比細(xì)菌與放線菌粗得多(約310um),常就是細(xì)菌菌體寬度得幾倍至幾十倍。因此,用低倍鏡即可觀察。3、霉菌得菌落松:由于霉菌得菌絲較粗較長(zhǎng),菌絲體疏松,因而形成得菌落也比較疏松,呈絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀;大:菌落形態(tài)較大,一般比細(xì)菌與放線菌得菌落大幾倍到幾十倍,有時(shí)會(huì)長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿;干:外觀干燥,不透明;挑:菌落與培養(yǎng)基間得連接緊密,不易挑取;顏色:由于基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子顏色不同,不同得霉菌菌落表面呈現(xiàn)不同得顏色,菌落正反面、邊緣與中心顏色常不一致。同一種霉菌在不同得培養(yǎng)基上或不同得培養(yǎng)條件下所形成得菌落特征可能有所不同。但同一種霉菌在相同得培養(yǎng)條件下與培養(yǎng)基上所形成得菌落特征相對(duì)穩(wěn)定。菌落特征就是霉菌鑒定得重要依據(jù)之一。4、霉菌得菌絲形態(tài)構(gòu)成霉菌營(yíng)養(yǎng)體得基本單位就是菌絲。菌絲得寬度一般為310μm,比放線菌菌絲寬很多倍,其菌可伸長(zhǎng)并產(chǎn)生分枝。許多分枝得菌絲相互交織在一起,稱為菌絲體。一部分菌絲存在于培養(yǎng)基質(zhì)中吸收營(yíng)養(yǎng),稱為基內(nèi)菌線或營(yíng)養(yǎng)菌絲。另一部分菌絲向空中生長(zhǎng),稱為氣生菌絲。氣生菌絲一部分形成生殖細(xì)胞,也有部分氣生菌絲生成生殖細(xì)胞得保護(hù)組織或其它組織。4、霉菌得菌絲從結(jié)構(gòu)來(lái)瞧,霉菌得菌絲有兩種:無(wú)隔菌絲:低等霉菌如根霉、毛霉等有隔菌絲:高等霉菌如青霉、曲霉等菌絲得孢子較大,在低倍鏡下即可清晰觀察到有隔或無(wú)隔菌絲與孢子及巨大得孢子囊。5、霉菌得繁殖方式與繁殖結(jié)構(gòu)霉菌主要靠形成各種無(wú)性孢子與有性孢子進(jìn)行繁殖。霉菌得無(wú)性孢子:厚垣孢子節(jié)孢子分生孢子孢囊孢子6、食品中常見(jiàn)得霉菌霉菌得種類很多,下面僅介紹一些常見(jiàn)得、與食品有關(guān)得菌屬。(1)根霉菌屬(Rhizopus)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)根霉有20多種,根霉有假根與葡匐枝,假根主要起固定與吸收營(yíng)養(yǎng)得作用。本屬得黑根霉能產(chǎn)生果酸酶,引起果實(shí)得腐爛及甘薯得軟腐,能產(chǎn)生反丁稀二酸,也就是轉(zhuǎn)化甾族化合物得重要霉菌。(2)曲霉菌屬(Aspergillus)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用得曲霉菌有100多種,在我國(guó)古代已利用曲霉菌制曲、釀酒、制醬等。曲霉菌還可用于制造蛋白酶、檸檬酸等一些有機(jī)酸。曲霉菌在自然界分布很廣,空氣中經(jīng)常含有曲霉菌得孢子。常引起食品、衣服、皮革等物品得發(fā)霉與腐爛,有得菌株還可產(chǎn)生毒素,例如黃曲霉。曲霉菌具有發(fā)達(dá)得菌絲體,菌絲有隔膜,為多細(xì)胞菌絲。繁殖方式為無(wú)性與有性繁殖。其菌落呈現(xiàn)各種顏色。(3)青霉菌屬(Penicillium)青霉菌在自然界得分布也非常廣泛,土壤中常常有大量得青霉菌存在,在水果與糧食上經(jīng)常發(fā)現(xiàn)青霉菌,已發(fā)現(xiàn)大約有幾百種。青霉菌得菌絲體無(wú)色或淺色。菌落就是深綠色。青霉菌可引起果蔬等得病害,如引起柑桔得病害而造成較大損失。但有些青霉菌能產(chǎn)生有經(jīng)濟(jì)價(jià)值得有機(jī)酸,如檸檬酸,葡萄糖酸等。在醫(yī)藥上常用得青霉素得產(chǎn)生菌就是產(chǎn)黃青霉。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)實(shí)驗(yàn)材料1、菌種:培養(yǎng)法培養(yǎng)3~4天得根霉(Rhizopussp、)、青霉(Penicillumsp、)與曲霉(Aspergillussp、)平板。2、其她物品:乳酸石炭酸溶液、載片、蓋片等。(二)記錄三種霉菌得菌落特征微生物名稱大小表面形狀顏色與培養(yǎng)基結(jié)合程度嗅味(二)記錄三種霉菌得菌落特征

2、霉菌個(gè)體形態(tài)觀察直接制片觀察:于潔凈載玻片上,滴一滴乳酸石炭酸液于載片中央;用解剖針從霉菌菌落得邊緣處取小量帶有孢子得菌絲置于液滴中,再細(xì)心地將菌絲挑散開;然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時(shí)再換高倍鏡。挑菌與制片時(shí)要細(xì)心,盡可能保持霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)。加蓋玻片時(shí)切勿壓入氣泡,以免影響觀察。(1)水浸片法觀察(根霉與曲霉)根霉:加熱至沸騰后觀察曲霉:直接觀察第二節(jié)微生物大小得測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)原理微生物細(xì)胞得大小就是微生物基本得形態(tài)特征,也就是分類鑒定得依據(jù)之一。微生物大小得測(cè)定,需要在顯微鏡下,借助于特殊工具—測(cè)微尺,包括目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺適用于校正目鏡測(cè)微尺每個(gè)得相對(duì)長(zhǎng)度。然后,根據(jù)微生物細(xì)胞相當(dāng)于目鏡測(cè)微尺得個(gè)數(shù),即可計(jì)算出細(xì)胞得實(shí)際大小。實(shí)驗(yàn)程序Ⅰ(測(cè)定微生物得大小)測(cè)定得工具:目鏡測(cè)微尺鏡臺(tái)測(cè)微尺實(shí)驗(yàn)程序Ⅱ(測(cè)定微生物得大小)目鏡測(cè)微尺得校正:在高倍鏡下,瞧清鏡臺(tái)測(cè)微尺得刻度后,轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺得刻度平行,移動(dòng)推動(dòng)器,使目鏡測(cè)微尺得0點(diǎn)與鏡臺(tái)測(cè)微尺得某一刻度重合,然后,仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合得刻度。計(jì)算兩刻度間目鏡測(cè)微尺得格數(shù)與鏡臺(tái)測(cè)微尺得格數(shù)。由于鏡臺(tái)測(cè)微尺得刻度每格長(zhǎng)10μm,所以可得:目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度(μm)=(鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)×10)/目鏡測(cè)微尺格數(shù)注意:校正目鏡測(cè)微尺必須針對(duì)特定得顯微鏡與附件(特定得接物鏡、接目鏡、鏡筒長(zhǎng)度等)進(jìn)行,而且只能在這特定得情況下才可重復(fù)使用。菌體大小得測(cè)定:取下鏡臺(tái)測(cè)微尺,將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物臺(tái)上,然后在油鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量菌體得長(zhǎng)與寬。操作步驟1、裝目鏡測(cè)微尺2、校正目鏡測(cè)微尺3、菌絲體大小測(cè)定:將觀察得黃曲霉菌絲體直接進(jìn)行菌絲體大小得測(cè)定4、測(cè)定完畢后,取出目鏡測(cè)微尺用擦凈紙擦干凈,放回盒內(nèi)保存。第三節(jié)微生物得顯微計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù)板通常就是一塊特制得厚載玻片,載玻片上有四條槽而構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)。中間得平臺(tái)較寬,其中間又被一短橫槽而隔成兩半,每個(gè)半邊上面各刻有一個(gè)方格網(wǎng)。每個(gè)方格網(wǎng)共分九大格,其中間得一大格又稱為計(jì)數(shù)室,微生物得計(jì)數(shù)就在此大格中進(jìn)行。常用得血球計(jì)數(shù)板得計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格得刻度網(wǎng)格。一種就是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格,而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格,即為16×25。另一種就是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格,而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格,即25×16。但就是不管計(jì)數(shù)室就是那種規(guī)格,其計(jì)數(shù)室得小格數(shù)總就是相同得,即16×25＝25×l6＝400(小格)計(jì)算每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm,則每一大方格面積為1mm2。蓋上蓋玻片后,載玻片計(jì)數(shù)室與蓋玻片之間得高度為0、1mm,所以每個(gè)計(jì)數(shù)室(大方格)得體積為0、1mm3。在計(jì)數(shù)時(shí),通常數(shù)五個(gè)中方格得總菌數(shù),求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中得總菌數(shù)。然后再換算成1毫升菌液中得總菌數(shù)。

(1ml＝1cm3＝1,000實(shí)驗(yàn)材料酵母菌懸液顯微鏡,血球計(jì)數(shù)板。蓋玻片,無(wú)菌滴管,吸水紙,擦鏡紙,香柏油、鏡頭洗液。取清潔無(wú)油得血球計(jì)數(shù)板,在計(jì)數(shù)室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液,搖勻,用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴,使菌液自行滲入,計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。在10×鏡下計(jì)數(shù):計(jì)數(shù)4個(gè)(或5個(gè))中格得平均值,然后求得每個(gè)中格得平均值。乘上16(或25)就得出計(jì)數(shù)區(qū)總菌數(shù),最后再換算到每mL菌液中得含菌數(shù)。注意事項(xiàng):計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)一半實(shí)驗(yàn)程序計(jì)數(shù)步驟:1、取清潔無(wú)油得血球計(jì)數(shù)板,在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。2、取酵母菌液,搖勻,用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴(不宜過(guò)多),使菌液自行滲入,計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。3、靜置5分鐘后,將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上,先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)板得大方格網(wǎng)位置。尋找時(shí)光圈要縮小,光線要偏暗些,并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。4、在高倍鏡下計(jì)數(shù):隨機(jī)地計(jì)數(shù)五個(gè)中格內(nèi)得菌數(shù),然后求得每個(gè)中格得平均值。乘上16(或25)就得出一大格中得總菌數(shù),最后再換算到每毫升菌液中得含菌數(shù)量。由于菌體細(xì)胞在血球計(jì)數(shù)板上處于不同得空間位置,要在不同得焦距下才能瞧到,故觀察時(shí)必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)節(jié)器,方能數(shù)到全部菌體,以免遺漏。5、計(jì)算方法:

酵母菌細(xì)胞數(shù)／毫升=[(X1+X2+X3+X4+X5)/5]*25(或16)×10×1000×稀釋倍數(shù)6、注意事項(xiàng)。

計(jì)數(shù)時(shí),為避免重復(fù)或遺漏計(jì)數(shù),凡就是遇到壓在方格線上得菌體,一般以壓在底線與右側(cè)線上得菌體計(jì)入本格內(nèi),遇到有芽體得酵母時(shí),如果芽體與母體同等大時(shí),就按兩個(gè)酵母菌體計(jì)數(shù)。7、計(jì)數(shù)完畢后,血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈,并用吸水紙吸干,最后用擦鏡紙擦干凈并放回盒。將顯微計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個(gè)中方格中得總菌數(shù);D表示菌液稀釋倍數(shù)。

各中格中菌數(shù)TD二室平均值個(gè)/ml12345第一室

第二室

第四節(jié)四大類微生物得比較與分別1、四大類微生物菌落形態(tài)特征得比較2、制片與觀察方法得區(qū)別細(xì)菌干燥、固定后美藍(lán)染色、革蘭氏染色,用油鐿(100×10)進(jìn)行觀察;酵母美藍(lán)水浸片染色,用高倍鏡(40×10)觀察;放線菌美藍(lán)蓋片染色,菌絲體與孢子一般用高倍鏡(40×10)觀察;霉菌:乳酸石碳酸棉藍(lán)染色,菌絲體與孢子一般用高倍鏡(40×10)觀察。3、個(gè)體形態(tài)與大小區(qū)別細(xì)菌:呈球狀、桿狀、螺旋狀,個(gè)體微小,小于1微米。放線菌呈分枝絲狀,菌絲無(wú)隔膜,單細(xì)胞,菌絲直徑與細(xì)菌相似,小于1微米。霉菌菌絲與孢子得寬度通常比細(xì)菌與放線菌粗得多(約310um),常就是細(xì)菌菌體寬度得幾倍至幾十倍。酵母一般:呈球形、橢圓形。(1~5)um×(5~3