玉米提取物a對(duì)sz誘導(dǎo)的糖尿病小鼠降血糖作用及利率的影響

玉米提取物a對(duì)sz誘導(dǎo)的糖尿病小鼠降血糖作用及利率的影響

玉竹是百合科黃精科中藥，包括茶多酚、堿、黃酮、甘草等。玉竹的干燥根莖,性平、味甘,具養(yǎng)陰、潤(rùn)燥、除煩、生津止渴等功效,有強(qiáng)心、擴(kuò)張血管、降血糖、降血脂和抗腫瘤等作用。近年來,對(duì)玉竹降血糖作用的報(bào)道不斷增多,但都限于中藥復(fù)方臨床研究。EA-PAOA為玉竹的無水已醇提取物,其降糖作用尚無報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)通過建立STZ誘導(dǎo)的Ⅰ型糖尿病小鼠模型(下稱STZ小鼠),探討EA-PAOA對(duì)其降糖作用及死亡率影響。1材料和方法1.1材料與實(shí)驗(yàn)過程選用昆明小鼠120只(錦州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雄性,體重(18±2)g,適應(yīng)性飼養(yǎng)10d后,按隨機(jī)表方法將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CON)、DM對(duì)照組(DM)、EA-PAOA1組、EA-PAOA2組、EA-PAOA3組,每組24只。應(yīng)用0.1mol/l枸櫞酸鈉緩沖液(pH4.4)配制成0.4%鏈脲佐菌素(STZ)溶液(sigma公司),按40mg/Kg劑量腹腔注射,每天1次,連續(xù)5d,每周分別測(cè)血糖、尿糖1次,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)1型DM模型的形成,除正常對(duì)照組小鼠外(只注射等體積枸櫞酸鈉緩沖液),其余組制備1型DM模型,以血糖≥11.4mmol/L,尿糖+++以上2周,為模型制作成功。低于此值棄去。小鼠自由飲食、飲水,不限量、標(biāo)準(zhǔn)飼料(錦州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。正常對(duì)照組與DM對(duì)照組,腹腔注射生理鹽水0.5ml,每日1次,共4周;EA-PAOA1組EA-PAOA1g/Kg、EA-PAOA2組EA-PAOA5g/Kg、EA-PAOA3組EA-PAOA10g/Kg,分別以等體積0.5ml腹腔注射,每日1次,共4周。1.2血糖檢測(cè)血糖空腹血糖測(cè)試采用末梢全血快速血糖測(cè)定法(One-Touch-I型血糖儀,美國(guó)強(qiáng)生公司),尾靜脈取血檢測(cè)。尿糖水平采用廣州越秀東方新科技研究所研制生產(chǎn)的尿糖試紙檢測(cè)。用藥前及用藥后4周每周檢測(cè)一次。1.3動(dòng)物死亡率觀察用藥后4周內(nèi)各組動(dòng)物死亡情況。1.4各組ea-paoa的合作60只重約20g的健康昆明小鼠(♂♀各半)隨機(jī)分成6組,每組10只,每只腹腔注射含不同濃度的EA-PAOA0.5ml。一次性給藥后即刻觀察中毒癥狀并記錄死亡動(dòng)物只數(shù)。1.5兩組方差分析計(jì)量數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示,采用方差分析并進(jìn)行兩者比較;計(jì)數(shù)資料以百分率表示,采用χ2檢驗(yàn)P<0.05為有顯著性差異,P<0.01為差異非常顯著。2結(jié)果2.1鼠尿糖出現(xiàn)情況STZ溶液腹腔注射,每天一次,連續(xù)注射5d后,小鼠血糖呈持續(xù)上升趨勢(shì),在注射后15d至20d,血糖達(dá)到高峰狀態(tài),以后稍有一定幅度的下降,但一直穩(wěn)定在較高水平。第2周開始,1/3模型鼠尿糖出現(xiàn)++、+++不等,到第4周,90%小鼠尿糖出現(xiàn)+++。各組Ⅰ型DM小鼠隨著血糖,尿糖水平上升,出現(xiàn)飲食、飲水量增多及體重減輕改變。2.2兩組死亡率比較用藥后4周,EA-PAOA1、EA-PAOA2組與DM對(duì)照組死亡率相差顯著(P<0.01)。EA-PAOA3組與DM對(duì)照組死亡率也有顯著性差異(P<0.05)。2.3正常對(duì)照組p>0.1用藥后DM對(duì)照組小鼠空腹血糖水平明顯高于EA-PAOA各組和正常對(duì)照組(P<0.01);EA-PAOA1組與EA-PAOA2組比較,3周、4周時(shí)明顯高于EA-PAOA2組;EA-PAOA3組與EA-PAOA2組比較,無明顯差異(P>0.05)。2.4小鼠7d剖檢觀察根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果決定劑量范圍11.1734,12.4897,13.9609,15.6055,17.4439,19.5g·kg-1,劑距為1.1178。雌雄小鼠在注射EA-PAOA后,均出現(xiàn)四肢伏地,蜷縮,高劑量出現(xiàn)跳躍,死亡。19.5g·kg-1組小鼠約10min死亡;17.4439g·kg-1組小鼠約25min死亡,存活2只;15.6055g·kg-1組小鼠約60min后有6只死亡;13.9609g·kg-1組小鼠死亡5只;12.4897g·kg-1組小鼠死亡2只;11.1734g·kg-1組小鼠死亡1只。存活小鼠約2h后有恢復(fù),但活動(dòng)減少,4h后開始進(jìn)食。7d后解剖觀察到內(nèi)臟器官無異常。用寇氏法計(jì)算LD50為14.5124g·kg-1,95%可信限為13.5642~15.4606g·kg-1。3設(shè)立stz小劑量多次注射誘導(dǎo)型糖尿病動(dòng)物模型Ⅰ型DM是一種自身免疫性疾病,在疾病發(fā)展過程中胰島β細(xì)胞的破壞是一個(gè)緩慢漸進(jìn)的過程,與病程的長(zhǎng)短有一定的相關(guān)性。近年發(fā)現(xiàn),在Ⅰ型DM發(fā)病過程中,不同階段胰島淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量、種類、表達(dá)細(xì)胞因子的種類及β細(xì)胞破壞的程度都不同。Ⅰ型DM發(fā)病的自身免疫過程與TH1和TH2的失衡密切相關(guān)。STZ是一種含亞硝基化合物,能特異性破壞胰島β細(xì)胞,機(jī)制之一是通過誘導(dǎo)NO的合成增加對(duì)胰島β細(xì)胞的氧化侵襲,與Ⅰ型DM病人發(fā)病時(shí)體內(nèi)氧化侵襲增加相類似。小劑量STZ注射破壞少量胰島細(xì)胞,死亡胰島細(xì)胞作為抗原被巨噬細(xì)胞吞噬,產(chǎn)生TH1刺激因子(IL-12),使TH1細(xì)胞系占優(yōu)勢(shì)而產(chǎn)生IL-2及IFN-γ,在胰島局部促使炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并活化釋放IL-1β、TNF-α、IFN-γ及氧自由基NO、H2O2、O2,殺傷少量細(xì)胞,死亡細(xì)胞再次以自身抗原釋放,并再次遞呈給APC細(xì)胞進(jìn)行處理。釋放細(xì)胞因子,放大細(xì)胞損傷效應(yīng),最終導(dǎo)致Ⅰ型DM。本研究通過建立STZ小劑量多次注射誘導(dǎo)Ⅰ型糖尿病動(dòng)物模型,證實(shí)EA-PAOA具有明顯的降血糖及降低死亡率的作用。EA-PAOA各組血糖值均降低,5g/Kg組效果最為顯著;10g/Kg組與5g/Kg組比較降血糖作用無明顯差異(P>0.05),1g/Kg組與5g/Kg組比較降血糖作用不及5g/Kg組,3周時(shí)有明顯差異(P<0.05),4周時(shí)差異非常顯著(P<0.01);4w時(shí)死亡率與DM對(duì)照組比較,EA-PAOA1g/Kg組、5g/Kg組均有明顯差異(P<0.01),10g/Kg組與其相比也有差異(P<0.05)。因此可以看出,EA-PAOA的降糖作用無劑量依賴性,10g/Kg組降血糖及死亡率的效果并不優(yōu)于5g/Kg組。EA-PAOA經(jīng)本教研室多年研究證實(shí),具有抑制細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,抑制IL-2、TNF-α炎癥介子產(chǎn)生的作用,結(jié)合上述1型DM發(fā)病機(jī)制STZ造模機(jī)制,提示EA-PAOA的降糖機(jī)制與阻斷胰島β細(xì)胞自身免疫反應(yīng)過程,抑制Th1型細(xì)胞介導(dǎo)的,包括分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ在內(nèi)的自身免疫反應(yīng),激活局部Th2型反應(yīng),進(jìn)而分泌IL-4、IL-10等Th2型細(xì)胞因子有關(guān)。Ⅰ型DM目前仍無根治藥物,只能用胰島素替代治療,每日注射胰