甲維鹽和阿維菌素對(duì)南方根結(jié)線蟲病的生物活性

甲維鹽和阿維菌素對(duì)南方根結(jié)線蟲病的生物活性

根結(jié)線蟲病是影響番茄的主要疾病之一，通常發(fā)生在中國的南北地區(qū)。特別是在設(shè)施農(nóng)業(yè)中，番茄敏感品種常年出現(xiàn)，導(dǎo)致根結(jié)線蟲病的普遍存在，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我國目前開發(fā)的防治植物根結(jié)線蟲的主要品種有:甲基異硫磷、克百威、滅線磷、克線磷、辛硫磷、米樂爾、丁硫克百威、棉隆、威百畝等。這些品種中有的由于多年使用,已產(chǎn)生嚴(yán)重的抗藥性,而且有的品種毒性大,殘效長,對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重,已被禁用。阿維菌素(Avermectin)是20世紀(jì)80年代以來開發(fā)的具有廣譜殺蟲、殺螨、殺線蟲活性的生物農(nóng)藥,對(duì)果蔬根結(jié)線蟲病具有很好的防治效果;甲胺基阿維菌素苯甲酸鹽(Emamectinbenzoate)是阿維菌素的衍生物之一,其性能優(yōu)于阿維菌素,具有活性高、毒性低、對(duì)有益生物安全、害蟲不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn),目前國內(nèi)外主要用于蔬菜地中小菜蛾、甜菜夜蛾等難治害蟲的防治,但仍未見其用于防治根結(jié)線蟲病的報(bào)道。為了探索該衍生物對(duì)南方根結(jié)線蟲病的防治效果,本研究以該衍生物為有效成分制劑對(duì)南方根結(jié)線蟲進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定、盆缽藥效試驗(yàn),同時(shí)開展其對(duì)番茄的安全性評(píng)估,為其開發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù)。1材料和方法1.1種子1菌株藥劑:0.2%高滲甲胺基阿維菌素苯甲酸鹽(Emamectinbenzoate,簡稱:甲維鹽)乳油(保爾EC,山東京博農(nóng)化有限公司);1.8%阿維菌素(Avermectin)乳油(浙江海正化工股份有限公司)。番茄:超級(jí)大明星(廣東湛江市大地蔬菜種子有限公司)。將經(jīng)催芽后的番茄種子播種于滅菌土中,出苗后選取長勢(shì)一致的植株移栽于裝有滅菌土、直徑為6cm的塑料杯中,在溫室中培養(yǎng)待用。線蟲:從海南大學(xué)儋州校區(qū)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院基地茄子根結(jié)線蟲病病根上剖檢得到雌蟲和幼蟲,經(jīng)形態(tài)鑒定為南方根結(jié)線蟲(Meloidogyneincognita),并用單卵塊擴(kuò)繁法于番茄苗(1個(gè)月苗齡)上純化擴(kuò)大培養(yǎng),30d后挑取番茄苗病根上的線蟲卵塊,經(jīng)0.5%次氯酸鈉消毒3min后置于25℃培養(yǎng)箱中孵化3~4d,將新鮮孵化得到的二齡幼蟲配制成600條·mL-1和1000條·mL-1的懸浮液備用。1.2療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)將0.2%高滲甲維鹽EC和1.8%阿維菌素EC分別稀釋:500倍(有效成分4.00mg·L-1)、1000倍(2.00mg·L-1)、1500倍(1.33mg·L-1)、2000倍(1.00mg·L-1)、3000倍(0.67mg·L-1)和4000倍(0.50mg·L-1)作為處理液,吸取各稀釋藥液5mL于培養(yǎng)皿(直徑6cm)中,將1mL線蟲懸浮液(600條·mL-1)分別滴入裝有各稀釋藥液的培養(yǎng)皿內(nèi)混勻。各處理3次重復(fù),無菌水為對(duì)照。將各處理培養(yǎng)皿用封口膜封嚴(yán),置于25℃培養(yǎng)箱中24h,再分別將各處理和對(duì)照皿中的線蟲懸浮液倒入400目篩中濾去藥液,用滅菌水沖洗并回收線蟲于計(jì)數(shù)皿中,鏡檢線蟲死亡情況,計(jì)算校正死亡率,求得毒力回歸方程并計(jì)算LC50及LC95值。校正死亡率=(處理死亡率-對(duì)照死亡率)/(1-對(duì)照死亡率)×100%1.3植株生長情況測(cè)定選取培育40d長勢(shì)一致的番茄苗,按每株1000條幼蟲的接種量將根結(jié)線蟲二齡幼蟲懸浮液分別滴注于植株的根部。24h后藥液灌根:兩藥劑均設(shè)500倍液、1000倍液和1500倍液,每株20mL,另設(shè)CK1(僅接種線蟲)和CK2(僅加0.2%甲維鹽1500倍液,不接種線蟲)和Control(空白對(duì)照:不加藥液也不接種線蟲),共9個(gè)處理,各處理重復(fù)3次。所有植株隨機(jī)排列,栽培條件均勻一致。處理后30d,緩慢取出植株根系洗凈,分別測(cè)量株高、地上部鮮重及根系鮮重,記錄發(fā)病情況,計(jì)算病情指數(shù)、相對(duì)防效、各處理根表形成的卵塊數(shù)與CK1根表形成的卵塊數(shù)的比值(即繁殖指數(shù)),并按Duncan′s新復(fù)極差法測(cè)驗(yàn)各處理的差異顯著性。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):0級(jí),根部無根結(jié);1級(jí),根部有根結(jié)1~25個(gè);2級(jí),根部有根結(jié)26~75個(gè);3級(jí),根部有根結(jié)76~150個(gè);4級(jí),根部有根結(jié)151~250個(gè),少數(shù)根結(jié)上有再次根結(jié);5級(jí),根部有根結(jié)251個(gè)以上,多數(shù)根結(jié)相互連結(jié)成根結(jié)團(tuán)塊。病情指數(shù)=∑(各級(jí)植株數(shù)×級(jí)數(shù))/(調(diào)查總株數(shù)×5)×100%相對(duì)防效=(CK1每克根根結(jié)數(shù)-處理每克根根結(jié)數(shù))/CK1每克根根結(jié)數(shù)×100%繁殖指數(shù)=處理產(chǎn)生卵塊數(shù)/CK1產(chǎn)生卵塊數(shù)2結(jié)果與分析2.1阿維菌素lc50從致死中濃度來看,甲維鹽對(duì)南方根結(jié)線蟲的毒性比阿維菌素高,甲維鹽LC50僅為0.1645mg·L-1,而阿維菌素LC50為0.4532mg·L-1(表1);從毒力回歸方程斜率(b值)來看,甲維鹽b值比阿維菌素大,表明線蟲對(duì)甲維鹽的敏感性比阿維菌素高,結(jié)合其很低的LC50,說明甲維鹽對(duì)防治南方根結(jié)線蟲病具有很好的開發(fā)潛力。2.2甲維鹽和阿維菌素相對(duì)防效從表2可看出,相對(duì)于清水處理,甲維鹽和阿維菌素對(duì)南方根結(jié)線蟲病均具有良好的防治效果,其中500倍液的甲維鹽相對(duì)防治效果最好,達(dá)93.67%,比500倍液的阿維菌素相對(duì)防效高3.10%;1000倍液甲維鹽和阿維菌素相對(duì)防效分別為79.69%和84.78%,兩者間差異不顯著;從繁殖指數(shù)和根結(jié)數(shù)來看,兩種藥劑均可顯著抑制根結(jié)線蟲的根結(jié)和卵塊形成,特別是甲維鹽500倍和1000倍液,其繁殖指數(shù)均僅為0.09,這表明甲維鹽可有效地控制南方根結(jié)線蟲的群體數(shù)量,從而達(dá)到控制病害的目的。2.3灌根處理對(duì)番茄的生長的影響從表3可以看出:番茄受根結(jié)線蟲侵染發(fā)病后(CK1),植株長勢(shì)明顯受到影響,株高僅26.7cm,地上部鮮重為最小;僅甲維鹽1500倍液(CK2)灌根處理的番茄長勢(shì)略優(yōu)于空白對(duì)照,植株根系鮮重比空白對(duì)照大0.17g;甲維鹽各處理濃度對(duì)番茄長勢(shì)影響均不大,番茄株高、地上部鮮重、根系鮮重與空白對(duì)照均無明顯差異,但株高和地上部鮮重明顯高于CK1,表明甲維鹽不同處理濃度不僅對(duì)南方根結(jié)線蟲病具有防效,而且對(duì)番茄生長相對(duì)安全。3甲維鹽的生物活性本研究結(jié)果表明,甲維鹽和阿維菌素不同質(zhì)量濃度處理的南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲死亡率均明顯高于對(duì)照,甲維鹽的LC50和LC95值均明顯低于阿維菌素,且甲維鹽毒力回歸方程的斜率大于阿維菌素,說明南方根結(jié)線蟲對(duì)甲維鹽的敏感性較強(qiáng)。倪玨萍等研究也表明,甲維鹽的生物活性要比阿維菌素高,對(duì)小菜蛾、甜菜夜蛾的活性是阿維菌素的10倍之多,對(duì)二化螟的活性略高于阿維菌素。本研究表明,甲維鹽對(duì)南方根結(jié)線蟲病具有良好的防治效果,能夠顯著抑制根結(jié)和卵塊的形成,且對(duì)番茄苗生長狀況沒有不利影響。Haseeb等研究表明,甲維鹽在甘藍(lán)葉中的