天山花楸平喘膠囊鎮(zhèn)咳祛痰抗炎平喘及免疫調節(jié)作用研究

天山花楸平喘膠囊鎮(zhèn)咳祛痰抗炎平喘及免疫調節(jié)作用研究

又名刺槐，是薔薇科花科花科花科花科花科花科的干燥枝條。它是新疆特有的流行藥物，具有水果、細膩的樹枝和莖的皮。其果實味苦甘、性平,嫩枝葉及莖皮味苦、無毒,具有清熱利肺、補脾生津之功效。天山花楸對哮喘、咳嗽有一定的療效,用于治療慢性支氣管炎、肺結核、水腫等癥,按照中藥5類新藥要求,制備了天山花楸平喘膠囊。本研究對天山花楸平喘膠囊的止咳、祛痰、抗炎、平喘及免疫作用進行了考察。1材料表面1.1膠囊、培養(yǎng)基和試劑天山花楸,于2011年10月中旬購自新疆呼圖壁林場,秋季葉尚綠時采收,即時干燥,經新疆醫(yī)科大學藥學院生藥學教研室帕麗達教授鑒定為天山花楸(SorbustianschanicaRuper.)干燥嫩枝葉;課題組按中藥5類新藥要求由新疆國藥制藥廠制得天山花楸平喘膠囊,批號20121029。地塞米松磷酸鈉注射液(湖北天藥藥業(yè)股份有限公司,批號42020019),氯化銨(北京中新制藥廠,批號120901),苯酚紅(天津市福晨化學試劑廠,批號20110410),碳酸氫鈉(分析純,天津市富精化工有限公司,批號20070803),磷酸組織胺(上海三愛思試劑有限公司,批號20060903),氯化乙酰膽堿(上海三思試劑有限公司,批號030527),生理鹽水(西安京西雙鶴有限公司,批號100830481)。急支糖漿[廣州星群(藥業(yè))股份有限公司,批號EH10028],印度墨汁(England使用前用生理鹽水稀釋5倍,超聲波處理后離心以棄去沉淀物)。綿羊紅細胞(SRBC,批號20121123)。蛋清(市場上購買新鮮雞蛋,去殼及去蛋黃)而得。1.2儀器、實驗和儀器402型-氣體壓縮機(上海合力醫(yī)療器械廠),TD5A-WS-離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司),s22PC-可見分光光度計(上海棱光技術有限公司)AL204-分析天平、JB/T5347-1991-電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司]。1.3實驗動物及許可證昆明種小鼠18~22g,雌雄兼用,SD大鼠160~200g,雌雄兼用,均由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供,生產許可證號SCXK(新)2011-0004,動物使用許可證號SYXK(新)2011-0004。2方法2.1大鼠氨基引流咳嗽實驗2.2氯化銨標準使用液采用氣管段酚紅排泄法。小鼠50只,體重18~22g,按體重與性別均勻分成5組:空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量組(劑量同2.1),陽性對照組氯化銨,1g·kg-1),均ig。1次/d,連續(xù)7d。末次藥后1h,5g·L-1酚紅溶液ip0.5mL/只,30min后斷頸處死動物,剝離氣管周圍組織,剪下自甲狀軟骨至氣管分支處一段氣管,放入盛有2mL生理鹽水的試管中,用4%碳酸氫鈉2mL沖洗剪下的氣管3次,再加入1mol·L-1的氫氧化鈉1滴,使成堿性,加4%碳酸氫鈉至5mL,離心取上清液,用分光光度計于546nm處測吸光度(A)。2.3單次給藥對大鼠感冒的影響采用組胺引喘法。大鼠50只,體重180~220g,按體重與性別均勻分成5組,空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸膠囊高,中,低劑量組(劑量同2.1),陽性對照組(氨茶堿1g·kg-1),均ig,1次/d,連續(xù)7d,末次藥后1h,每次雌雄各1只大鼠放入氣霧箱用超聲霧化器持續(xù)噴入8g·L-1乙酰甲膽堿和0.1%磷酸組織胺(等體積),觀察大鼠的哮喘反應,記錄大鼠的哮喘潛伏期(即從噴霧開始到哮喘發(fā)作,呼吸困難,直至抽搐跌倒的時間),超過180s以180s計。2.4地塞米松致炎前右后足正常厚度ld50采用蛋清足腫脹法。小鼠50只,雌雄各半,體重18~22g,隨機分為5組,空白組(等容積0.9%氯化鈉溶液),天山花楸平喘膠囊高、中、低3個劑量(同2.1)組、陽性對照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當人7倍用量),所有藥物均用蒸餾水混懸,按20mL·kg-1,ig,1次/d,連續(xù)7d。末次給藥前,以螺旋測微儀測量右后足跖厚度,作為致炎前右后足正常厚度。末次給藥后1h,小鼠右后足跖sc注射蛋清0.1mL/只致炎,測量注入致炎后1,2,3h后右足跖厚度,并減去致炎前小鼠右后足正常厚度為各鼠在不同時點的足腫脹度。2.5免疫試驗2.5.1小鼠肝臟血污的檢測小鼠60只,體重18~22g,雌雄各半,隨機分成5組,每組12只。空白對照組(等容量蒸餾水),陽性對照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當人7倍用量),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量(同2.1)組。1次/d,連續(xù)7d,末次給藥后尾靜脈注射墨汁1mL·kg-1;墨汁一經注入,立即計時。于注射后2min(t1)和10min(t2)分別用吸管經眼內毗靜脈取血0.02mL。(吸管在吸取血液前吸吹一下20U·mL-1的肝素溶液以防血液凝固)將血液加入盛有0.1%Na2CO3溶液2mL試管中,搖勻,用721分光光度計在600nm波長處測A。取血后脫頸椎法處死動物,取出小鼠肝臟與脾臟,用濾紙吸干臟器表面血污,稱重。計算廓清指數(shù)(K)和吞噬指數(shù)(α)。2.5.2花楸平滑膠囊昆明種小鼠60只,體重18~22g,隨機分成5組,每組12只。空白對照組(等容量蒸餾水),陽性對照組(地塞米松,1.4×10-3g·kg-1,相當人7倍用量),天山花楸平喘膠囊高、中、低劑量(同2.1)組。先ig給藥,1次/d,連續(xù)7d,第7天對小鼠進行免疫:將綿羊紅細胞(SRBC)用生理鹽水洗滌3次后,配成20%SRBC溶液,每鼠0.2mL,ip。然后繼續(xù)ig給藥至免疫第5天,小鼠眼眶后靜脈叢取血,離心得血清,取20μL血清用生理鹽水稀釋500倍,取1mL,再加入20%SRBC溶液、補體(1∶10稀釋的混合豚鼠血清)和生理鹽水各0.5mL,于溫箱內溫育0.5h后,3000r·min-1離心10min,取上清液于540nm處測定(A)。2.6統(tǒng)計方法采用SPSS17.0軟件對數(shù)據進行統(tǒng)計學分析,實驗數(shù)據用ue0af±s表示,組間比較采用方差分析,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。3結果3.1急支糖漿和天麻花楸平滑膠囊對小鼠感冒的影響與空白對照組相比,天山花楸平喘膠囊3個劑量組和急支糖漿能顯著延長小鼠咳嗽潛伏期,明顯減少咳嗽次數(shù)(P<0.05),高劑量組的作用強于急支糖漿組(P<0.05),說明天山花楸平喘膠囊對氨水引起的小鼠咳嗽有一定的止咳作用。見表1。3.2對小鼠氣管酚紅排泄量的影響酚紅的標準曲線為Y=0.1732X-0.0084,r=0.9995。與空白對照組比,天山花楸平喘膠囊(4,2,1g·kg-1)氯化鈉組均能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泄量,改善率分別為8.4%,17.6%,4.2%和38%(P<0.01),表明天山花楸平喘膠囊能增強小鼠的氣管酚紅排泄量,說明有祛痰作用。見表2。3.3大鼠引哮喘藥的致突變性測定與空白對照組相比,天山花楸平喘膠囊3個劑量組能顯著延長大鼠的引喘潛伏期(P<0.01),有一定的平喘作用。其作用強度不如氨茶堿(P<0.01)。見表3。3.4大鼠腳腫脹實驗3.5廓清指數(shù)和咀嚼指數(shù)與對照組比較,天山花楸平喘膠囊各劑量組可明顯提高小鼠廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)(P<0.05)。天山花楸平喘膠囊在此劑量下能提高小鼠的非特異性免疫功能,見表5。3.6對小鼠血清溶血素的影響與正常對照組相比,4,2,1g·kg-1天山花楸平喘膠囊組能顯著升高小鼠的血清溶血素(P<0.01),低劑量組和地塞米松組與正常對照組相比無顯著性差異。提示天山花楸平喘膠囊能提高小鼠的體液免疫功能。見表6。4治痰、上向腦膠山東山子從實驗結果可以看出,天山花楸平喘膠囊可延長由濃氨水誘導的小鼠咳嗽的潛伏期,明顯增加小鼠排痰量,明顯延長磷酸組胺所致豚鼠哮喘的潛伏期,此外,天山花楸平喘膠囊還具有明顯抑制小鼠足跖腫脹度,使小鼠的碳廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)明顯升高以及升高小鼠血清溶血素的生成的作用,證明天山花楸平喘膠囊有很好的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎和免疫調節(jié)作用。從中醫(yī)辨證來講,痰、咳、喘三者關系密切,互為因果,在治療時化痰藥與止咳平喘藥常配伍應用。一般咳嗽有痰者為多,痰多又容易引起咳嗽,而祛痰藥多能止咳。咳嗽與喘關系密切,且止咳可以平喘,平喘有利于排痰止咳。天山花楸平喘膠囊以新疆特有的民族藥材天山花楸為原料藥,經提取純化制備而成,通過以上實驗,證明其具有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎、平喘以及免疫調節(jié)作用,有望開發(fā)成為一種新的平喘藥物。采用濃氨水噴霧法。取小鼠50只,雌雄各半,體重18~22g,按性別、體重均勻分成5組,每組10只?？瞻捉M(等容積0.9%氯化鈉溶液,陽性對照組(急支糖漿,2.6mL·kg-1,相當于臨床日用量的2倍);天山花楸平喘膠囊內容物高、中、低劑量組(4,2,1g