重組體的鑒定

喬賽亞.贊內(nèi)爾（JosiahZayner）——超級(jí)人類CRISPR技術(shù)所有的重組體都會(huì)轉(zhuǎn)化成功嗎？例如：在實(shí)際操作過(guò)程中，轉(zhuǎn)化一微克pUC18共需2ml感受態(tài)細(xì)胞，大約含有2×1010個(gè)大腸桿菌細(xì)胞，也就是說(shuō)，每200個(gè)細(xì)胞只有一個(gè)細(xì)胞能接納pUC18?DNA?轉(zhuǎn)化成功的重組體都會(huì)順利表達(dá)嗎？重組體的鑒定重組體的鑒定返回報(bào)告基因的檢測(cè)法轉(zhuǎn)基因生物的PCR鑒定目的基因分子雜交檢測(cè)方法返回報(bào)告基因的篩選法定義：報(bào)告基因指一類在細(xì)胞、組織/器官或個(gè)體處于特定情況下會(huì)表達(dá)并使得他們產(chǎn)生易于檢測(cè)、且實(shí)驗(yàn)材料原本不會(huì)產(chǎn)生的性狀的基因。條件：①報(bào)告基因和目的基因一起被轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；②表達(dá)產(chǎn)物在受體細(xì)胞中本不存在，即無(wú)背景，在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中無(wú)相似的內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物；③具有易于檢驗(yàn)的表型，其表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行定量測(cè)定。返回植物基因工程中常用報(bào)告基因GUS基因NPTⅡ基因CAT基因NOS基因和OCS基因LUC基因和GFP基因NOS基因和OCS基因

①報(bào)告基因和目的基因一起被轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞；②表達(dá)產(chǎn)物在受體細(xì)胞中本不存在，即無(wú)背景，在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中無(wú)相似的內(nèi)源性表達(dá)產(chǎn)物；

③具有易于檢驗(yàn)的表型，其表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行定量測(cè)定。GUS基因?qū)偎饷割?，相?dāng)穩(wěn)定而不易降解。GUS基因是植物基因工程中使用最多的報(bào)告基因。NPTⅡ基因（失活）CAT基因氯霉素的結(jié)構(gòu)式2,2-二氯-N-(1R,2R)-1,3二羥基-1-(4硝基苯基)丙-2-基乙酰胺氯霉素催化的反應(yīng)及檢測(cè)方法CATCATLUC基因和GFP基因LUC基因：熒光素酶基因LUC基因發(fā)光目的基因+GFP基因GFP基因：綠色熒光蛋白基因GFP綠色熒光紫外光照錢永健關(guān)于報(bào)告基因，以下分析不合理的是（）D．使用NOS基因核酸檢測(cè)試劑盒檢測(cè)植物樣品，經(jīng)過(guò)紙層析，紫外線下發(fā)現(xiàn)未見(jiàn)熒光，因此該樣品為非轉(zhuǎn)基因植物。A．由于GUS基因的反應(yīng)靈敏度高，易于檢測(cè)，是目前植物基因工程中使用最多的報(bào)告基因；B．NPTⅡ基因既可以使新霉素失活，也可使宿主具有卡那霉素抗性；C．檢測(cè)氯霉素乙?；⒎派渥燥@影，可以知道CAT基因是否表達(dá)，甚至可以粗略估計(jì)CAT基因表達(dá)程度；重組體的篩選與外源基因的鑒定返回基于核酸分子雜交篩選堿性磷酸酶顯示系統(tǒng)辣根過(guò)氧化物酶顯示系統(tǒng)ABC顯示系統(tǒng)非放射