Cha3藥物的雜質(zhì)檢查講解

藥物分析

PharmaceuticalAnalysis

第三章藥物的雜質(zhì)檢查§3.1概述

§3.2一般雜質(zhì)的檢查方法§3.3特殊雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6概述§3.1概述

檢查有效性：以動物試驗為根底，最終以臨床療效來評價；安全性：熱原檢查、毒性試驗、刺激性試驗、過敏試驗、升壓或降壓物質(zhì)檢查等。純度要求：對各類雜質(zhì)的檢查；制劑通則：含量均勻性，溶出度、釋放度、裝量差異、生物利用度的均一性；2023/11/6一、藥物的純度與要求藥物的純度指藥物純潔程度，反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣。概述含量測定雜質(zhì)檢查理化常數(shù)外觀性狀結(jié)構(gòu)藥物純度藥物純度從用藥安全、有效和對藥物穩(wěn)定性等方面考慮；考慮雜質(zhì)的生理作用；

藥物合格不合格化學(xué)試劑不能代替藥品！2023/11/6藥物的雜質(zhì)指藥物中存在的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效，甚至對人體安康有害的物質(zhì)。藥物的純度與要求例：乙酰水楊酸水楊酸2023/11/6二、雜質(zhì)的來源在貯藏過程中引入合成過程中，原料不純；有一局部原料沒有反響完全；反響中間產(chǎn)物和副產(chǎn)物在精制時沒有除凈；在制成制劑的過程中，產(chǎn)生新的雜質(zhì)；制劑生產(chǎn)過程中所用溶劑、試劑的殘留；與生產(chǎn)器皿接觸引入雜質(zhì)；受外界條件的影響，發(fā)生水解、氧化、分解、聚合、異構(gòu)化、發(fā)霉等變化。由生產(chǎn)過程中引入概述2023/11/6例：乙酰水楊酸水楊酸二羥乙基過氧化物〔有毒〕麻醉乙醚例：例：差向四環(huán)素〔毒性高、活性低〕四環(huán)素雜質(zhì)的來源與種類2023/11/6按理化性質(zhì)分類無機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)雜質(zhì)、殘留溶劑按毒性分類普通雜質(zhì)（信號雜質(zhì)）毒性雜質(zhì)（有害雜質(zhì)）按來源分類一般雜質(zhì)、特殊雜質(zhì)一般雜質(zhì)是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中簡潔引入的雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)。雜質(zhì)的來源與種類三、雜質(zhì)的種類2023/11/6四、雜質(zhì)的限量雜質(zhì)限量是指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。通常用百分之幾或百萬分之幾〔ppm〕來表示。雜質(zhì)的量≤雜質(zhì)限量合格不合格＜雜質(zhì)的量概述2023/11/6雜質(zhì)限量檢查方法分為：標(biāo)準(zhǔn)比照法、靈敏度法、比較法標(biāo)準(zhǔn)對照法雜質(zhì)比照品或純品溶液供試品溶液在一樣條件下處理平行操作比較結(jié)果顏色→比色渾濁→比濁色斑→比較色斑特點：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量；必需有比照品或是純品。雜質(zhì)的限量2023/11/6雜質(zhì)限量檢查方法分為：標(biāo)準(zhǔn)比照法、靈敏度法、比較法標(biāo)準(zhǔn)對照法例1：中國藥典規(guī)定檢查砷鹽時，應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2.0ml〔每1ml相當(dāng)于1ug的As〕制備的標(biāo)準(zhǔn)砷斑，今依法檢查溴化鈉中的砷鹽，規(guī)定含砷量不得超過0.0004%，問應(yīng)取供試品多少克？雜質(zhì)的限量2023/11/6雜質(zhì)限量檢查方法分為：標(biāo)準(zhǔn)比照法、靈敏度法、比較法標(biāo)準(zhǔn)對照法例2：檢查對乙酰氨基酚中的氯化物，取對乙酰氨基酚2.0g，加水100ml，加熱溶解，冷卻，濾過，取濾液25ml，依法檢查氯化物，所產(chǎn)生的渾濁與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0ml〔每1ml相當(dāng)于10ug的Cl-〕制成的比照液比較，不得更濃，問氯化物的限量？雜質(zhì)的限量2023/11/6雜質(zhì)限量檢查方法分為：標(biāo)準(zhǔn)比照法、靈敏度法、比較法靈敏度法供試品溶液特點：以該檢測條件下反響的靈敏度來把握雜質(zhì)限量不需比照品試劑無正反響→合格有正反響→不合格

雜質(zhì)的限量2023/11/6雜質(zhì)限量檢查方法分為：標(biāo)準(zhǔn)比照法、靈敏度法、比較法比較法供試品

測定特定的待檢雜質(zhì)的參數(shù)如：測定A、pH值等結(jié)果≤規(guī)定的限量特點：不需要比照品雜質(zhì)的限量2023/11/6一般雜質(zhì)的檢查方法§3.2一般雜質(zhì)的檢查方法氯化物檢查法硫酸鹽檢查法重金屬檢查法一般雜質(zhì)的檢查方法溶液顏色檢查法鐵鹽檢查法砷鹽檢查法易炭化物檢查法溶液澄清度檢查法枯燥失重測定法殘留溶劑測定法熾灼殘渣檢查法水分測定法2023/11/6〔一〕原理一、氯化物檢查法〔二〕操作〔標(biāo)準(zhǔn)比照法〕供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗處放置5min

暗處放置5min一般雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗處放置5min

暗處放置5min〔三〕留意事項及爭論1.條件納氏比色管應(yīng)配對；氯化物檢查法2023/11/6供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗處放置5min

暗處放置5min〔三〕留意事項及爭論1.條件納氏比色管應(yīng)配對；酸性條件——稀硝酸；可以加速氯化銀的生成；產(chǎn)生較好的乳濁；可避開產(chǎn)生碳酸銀、氧化銀、磷酸銀沉淀。氯化物檢查法2023/11/6供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗處放置5min

暗處放置5min〔三〕留意事項及爭論1.條件納氏比色管應(yīng)配對；酸性條件——稀硝酸；稀釋到40ml后加硝酸銀試液；使生成白色渾濁而不是白色沉淀氯化物檢查法2023/11/6供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗處放置5min

暗處放置5min〔三〕留意事項及爭論1.條件納氏比色管應(yīng)配對；酸性條件——稀硝酸；稀釋到40ml后加硝酸銀試液；暗處放置；比濁方法：黑色背景，自上而下的觀看；平行操作。氯化物檢查法2023/11/6反復(fù)過濾至澄清H2O〔三〕留意事項及爭論2.供試品溶液不澄清時的處理方法——過濾3.供試品溶液有色時的處理方法——內(nèi)消色法/外消色法稀HNO3H2OAgNO31ml

暗處放置10min標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液AgNO31mlH2O無Cl-

暗處放置5min

暗處放置5min50ml50ml內(nèi)消色法2倍量的供試品氯化物檢查法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論3.供試品溶液有色時的處理方法——內(nèi)消色法/外消色法外消色法向供試品溶液中參與某種試劑，使供試品溶液的顏色褪去或與比照品溶液顏色一樣后再依法檢查。4.供試品溶液顯堿性時的處理方法先中和為中性后再檢查；避開硝酸銀在堿性條件下生成氫氧化銀和氧化銀。5.預(yù)先排解干擾物。氯化物檢查法2023/11/6〔一〕原理二、硫酸鹽檢查法〔二〕操作〔標(biāo)準(zhǔn)比照法〕供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液H2OH2O25%

BaCl25ml25%

BaCl25mlH2OH2O50ml50ml放置10min放置10min40ml40ml稀HCl2ml稀HCl2ml一般雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論1.條件納氏比色管應(yīng)配對；酸性條件——稀鹽酸；比濁方法：黑色背景，自上而下的觀看；平行操作。2.供試品溶液不澄清時的處理方法——過濾3.供試品溶液有色時的處理方法——內(nèi)消色法/外消色法硫酸鹽檢查法2023/11/6過硫酸銨

50mg過硫酸銨

50mg〔一〕原理三、鐵鹽檢查法〔二〕操作〔標(biāo)準(zhǔn)比照法〕供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液H2OH2O30%

硫氰酸銨

3ml30%

硫氰酸銨

3mlH2OH2O50ml50ml25ml25ml稀HCl4ml稀HCl4ml35ml35ml一般雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液H2OH2O25ml25ml過硫酸銨

50mg過硫酸銨

50mg稀HCl4ml稀HCl4ml35ml35ml30%

硫氰酸銨

3ml30%

硫氰酸銨

3mlH2OH2O50ml50ml納氏比色管應(yīng)配對；酸性條件——稀鹽酸加過硫酸銨氧化劑：

加過量硫氰酸銨

比色方法：白色的背景上，自上而下的觀看。稀鹽酸可以防止鐵鹽水解氧化供試品中Fe2+生成Fe3+；防止光線使硫氰酸鐵復(fù)原或分解退色。增加生成的協(xié)作物的穩(wěn)定性，提高靈敏度；消退Cl-、PO43-、SO42-等離子與鐵鹽形成協(xié)作物的干擾。鐵鹽檢查法2023/11/6四、重金屬檢查法重金屬指在試驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。Pb第一法第四法重金屬含量低的藥物(2～5μg)第三法使用范圍微孔濾膜法硫化鈉法溶于堿性水溶液而難于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物方法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的藥物熾灼后的硫代乙酰胺法含芳環(huán)、雜環(huán)以及難溶于水、乙醇的藥物第二法一般雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6第一法硫代乙酰胺法黃色至棕黑色混懸液〔一〕原理〔二〕操作〔標(biāo)準(zhǔn)比照法〕供試品溶液標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液H2O醋酸鹽buffer〔pH3.5〕2mlH2O醋酸鹽buffer〔pH3.5〕2ml25ml25ml硫代乙酰胺

2ml搖勻放置2min硫代乙酰胺

2ml搖勻放置2min重金屬檢查法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論1.條件用Pb(NO3)2先配制貯備液，并參與硝酸防止鉛鹽的水解，臨用前稀釋；醋酸鹽緩沖液(pH3.5)硫代乙酰胺試液；平行操作；比色方法：白色背景，自上而下的觀看；重金屬檢查法——硫代乙酰胺法2023/11/62.供試品溶液有色時的處理方法——外消色法/內(nèi)消色法外消色法用稀焦糖溶液調(diào)整比照管顏色與樣品管顏色全都。用對測定不干擾的指示劑調(diào)整比照管顏色與樣品管顏色全都。內(nèi)消色法重金屬檢查法——硫代乙酰胺法2023/11/63.干擾物的排解方法高鐵鹽〔Fe3+〕供試品中微量高價Fe3+存在供試品為鐵鹽〔大量的Fe3+〕藥物本身能生成不溶性硫化物→參與掩蔽劑重金屬檢查法——硫代乙酰胺法2023/11/6其次法熾灼后的硫代乙酰胺法〔一〕原理

供試品在500-600℃熾灼破壞后，加HNO3加熱處理，再按第一法進(jìn)展檢查?！捕巢僮髦亟饘贆z查法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論HNO3處理后必需蒸干除盡氧化氮；熾灼溫度：500—600℃；含鈉鹽或氟的有機(jī)藥物應(yīng)用鉑坩堝、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。重金屬檢查法——熾灼后硫代乙酰胺法2023/11/6第三法硫化鈉法

〔一〕原理〔二〕操作〔標(biāo)準(zhǔn)比照法，比色〕〔三〕留意事項及爭論堿性條件：NaOH顯色劑：Na2S

重金屬檢查法黃色至棕黑色混懸液2023/11/6第四法微孔濾膜法

〔一〕原理：同第一法〔二〕操作CABFE濾器下部濾器上蓋連接頭輔助濾板D濾膜(直徑10mm,孔徑3.0μm)墊圈(外徑10mm,內(nèi)徑6mm)重金屬檢查法微孔濾膜過濾法檢查重金屬裝置2023/11/6五、砷鹽檢查法古蔡氏法白田道夫法二乙基二硫代氨基甲酸銀法〔Ag-DDC法〕奇列氏法〔次磷酸法〕一般雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6〔一〕原理砷(Ⅲ)的反響：As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2OAsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3〔黃色〕AsH3+2As(HgBr)3→3AsH(HgBr)2〔棕色〕AsH3+As(HgBr)3→3HBr+As2Hg3〔黑色〕砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6〔二〕操作8cm有孔玻璃旋塞導(dǎo)氣管AsH3發(fā)生瓶溴化汞試紙醋酸鉛棉花(60mg)HClZn粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液生成砷斑吸取硫化氫氣體古蔡氏法檢砷裝置砷鹽檢查法——古蔡氏法標(biāo)準(zhǔn)砷斑供試品砷斑2023/11/6〔三〕留意事項及爭論各試劑的作用HCl：供給酸性環(huán)境，反響物；加KI和酸性SnCl2的作用：做復(fù)原劑，復(fù)原砷(Ⅴ)為砷(Ⅲ)砷鹽檢查法——古蔡氏法

As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O2023/11/6〔三〕留意事項及爭論各試劑的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI被氧化生成的I2又可以被SnCl2復(fù)原為I－I－與反響中產(chǎn)生的Zn2＋能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成AsH3的反響不斷進(jìn)展。砷鹽檢查法——古蔡氏法

As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O2023/11/6〔三〕留意事項及爭論各試劑的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI和酸性SnCl2可抑制SbH3生成銻斑，影響結(jié)果觀看SnCl2可以與Zn生成鋅錫齊，起去極化的作用，使氫氣均勻連續(xù)發(fā)生砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論各試劑的作用醋酸鉛棉花的作用：吸取H2S，排解硫化物干擾

砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論2.反響的最正確條件加Zn粒：能通過1號篩〔850-1000μm〕；約2g鹽酸酸性下反響溫度25～40℃，45min標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml〔1μg/ml〕砷鹽檢查法——古蔡氏法3.供試品砷斑和標(biāo)準(zhǔn)砷斑應(yīng)平行操作，并立刻觀看；供試品砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，顏色不得更深。2023/11/6〔三〕留意事項及爭論4.干擾物的排解如供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽等應(yīng)在檢查前參與HNO3處理，氧化成硫酸鹽，再做檢查；供試品假設(shè)為鐵鹽，需先加酸性SnCl2試液，將Fe3+復(fù)原為Fe2+砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6〔三〕留意事項及爭論4.干擾物的排解供試品為共價鍵結(jié)合的砷化物，要先進(jìn)展有機(jī)破壞，否則檢出結(jié)果偏低或難以檢出。排解方法：酸破壞法/堿破壞法酸破壞法：+稀硫酸與溴化鉀，如：葡萄糖中砷鹽的檢查堿破壞法：+氫氧化鈣，500-600℃灼燒，如：中藥麻仁丸中砷鹽的檢查+無水碳酸鈉堿融，如：苯甲酸鈉中砷鹽的檢查砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6〔四〕古蔡氏法的特點優(yōu)點：靈敏度高。缺點：不適于含銻的藥物。砷鹽檢查法——古蔡氏法2023/11/6五、砷鹽檢查法——白田道夫法一般雜質(zhì)的檢查方法〔一〕原理棕褐色的膠態(tài)砷〔二〕特點優(yōu)點：不受銻干擾。缺點：靈敏度低。2023/11/6五、砷鹽檢查法——二乙基二硫代氨基甲酸銀法〔Ag-DDC法〕一般雜質(zhì)的檢查方法〔一〕原理紅色的膠態(tài)銀紅色的膠態(tài)銀2023/11/6〔二〕操作Ag-DDC法檢砷裝置砷鹽檢查法——Ag-DDC法AsH3發(fā)生瓶醋酸鉛棉花(60mg)HClZn粒碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液吸取硫化氫氣體Ag-DDC2023/11/6〔三〕Ag-DDC法的特點優(yōu)點：靈敏度高；可限量也可定量；銻干擾小缺點：吡啶有惡臭，中國藥典改為Ag-DDC的三乙胺-氯仿〔1.8：98.2〕溶液代替，靈敏度略低。砷鹽檢查法——Ag-DDC法2023/11/6五、砷鹽檢查法——奇列氏法〔次磷酸法〕一般雜質(zhì)的檢查方法〔一〕原理〔二〕特點優(yōu)點：不受S2-、SO32-、Sb的干擾，適用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物砷鹽的檢查缺點：靈敏度較古蔡氏法低。2023/11/6六、溶液顏色檢查法一般雜質(zhì)的檢查方法是把握藥物中有色雜質(zhì)量的方法中國藥典收載有三種方法：第一法目視比色法，即與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較的方法。其次法分光光度法。第三法色差計法2023/11/6七、易炭化物檢查法一般雜質(zhì)的檢查方法易炭化物指藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。方法：H2SO4炭化后與比照液比較。比照液：〔1〕“溶液顏色檢查”項下的標(biāo)準(zhǔn)比色液；〔2〕由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液，比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的比照液；〔3〕高錳酸鉀液。2023/11/6八、溶液澄清度檢查法一般雜質(zhì)的檢查方法澄清度檢查是檢查藥品溶液的混濁程度。它可以反映藥物溶液中微量不溶性雜質(zhì)的存在。方法：與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁。濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理：甲醛腙〔白色混濁〕肼2023/11/6溶液澄清度檢查法澄清指供試品溶液的澄清度一樣于所用溶劑或未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。2023/11/6九、熾灼殘渣檢查法一般雜質(zhì)的檢查方法熾灼殘渣指有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽。0.1%～0.2%1～2mg2023/11/6十、枯燥失重測定法一般雜質(zhì)的檢查方法枯燥失重藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)枯燥后所減失的量。用于檢查藥物中的水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)。

恒重供試品連續(xù)兩次枯燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下。2023/11/6枯燥失重測定法分類適用范圍備注常溫常壓干燥受熱較穩(wěn)定的藥物105℃，一般2-4h，干燥至恒重干燥劑干燥適用于受熱易分解或揮發(fā)的供試品常用干燥劑：硅膠、五氧化二磷、濃硫酸等減壓干燥法適用于熔點低，受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分的供試品熱分析法研究其受熱過程所發(fā)生的晶型轉(zhuǎn)變、熔融、升華、吸附等物理變化和脫水、熱分解、氧化還原等化學(xué)變化，對物質(zhì)進(jìn)行物理常數(shù)（如熔點和沸點）的確定、鑒別和純度檢查的方法

包括：熱重分析法、差熱分析法等

枯燥失重測定方法：2023/11/6十一、水分測定法一般雜質(zhì)的檢查方法2023版中國藥典二部收載兩種方法：費休氏法、甲苯法〔一〕費休氏法A——供試品消耗的費休試液的體積B——空白消耗的費休試液的體積F——每1ml費休試劑相當(dāng)于水的重量(mg)W——供試品的重量2023/11/6水分測定法——費休氏法費休試液的配制稱取碘(置硫酸枯燥器內(nèi)48小時以上)110g，置枯燥的具塞燒瓶中，加無水吡啶160ml,留意冷卻，振搖至碘全部溶解后，加無水甲醇300ml，稱定重量，將燒瓶置冰浴中冷卻，通入枯燥的二氧化硫至重量增加72g，再加無水甲醇使成1000ml，密塞，搖勻，在暗處放置24小時。本液應(yīng)遮光，密封，置陰涼枯燥處保存。臨用前應(yīng)標(biāo)定濃度2023/11/6〔二〕甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的藥品A——500ml的短頸圓底燒瓶；B——水分測定管；C——直形冷凝管，外管長40cm。甲苯法裝置水分測定法2023/11/6十二、殘留溶劑測定法一般雜質(zhì)的檢查方法殘留溶劑指在合成原料藥、輔料或制劑生產(chǎn)的過程中使用的，但在工藝中未能完全除去的有機(jī)溶劑。2023/11/6§3.3特殊雜質(zhì)的檢查方法特殊雜質(zhì)是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)。原理：利用藥品和雜質(zhì)在理化性質(zhì)及生理作用的差異

方法：色譜分析法光譜分析法化學(xué)分析法物理分析法生物學(xué)分析法特殊雜質(zhì)的檢查方法2023/11/6一、色譜分析法包括：薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法

〔一〕薄層色譜法〔TLC法〕1、雜質(zhì)比照法適用于雜質(zhì)并能夠得到雜質(zhì)比照品的狀況。例：枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查N-甲基哌嗪供試品(50mg/ml)10μlN-甲基哌嗪比照品(50mg/ml)10μl特殊雜質(zhì)的檢查方法2023/11/62、供試品溶液自身稀釋比照法適用于雜質(zhì)的構(gòu)造不能確定或無雜質(zhì)比照品的狀況例：氫化可的松中“其他甾體”的檢查供試品液：3mg/ml比照液：60g/ml〔供試液稀釋50倍〕推斷：供試品溶液的雜質(zhì)斑點數(shù)≯3個；″″顏色≯比照液主斑點顏色。薄層色譜法2023/11/63、雜質(zhì)比照品法與供試品溶液自身稀釋比照法并用4、比照藥物法當(dāng)無適宜的雜質(zhì)比照品，或者是供試品顯示的雜質(zhì)斑點顏色和主成分顏色有差異，難以推斷限量時，可以用含待檢測雜質(zhì)符合限度要求的與供試品一樣的藥物作為比照品。薄層色譜法2023/11/6內(nèi)標(biāo)法加校正因子法外標(biāo)法加校正因子的主成分自身比照法不加校正因子的主成分自身比照法峰面積歸一化法〔二〕高效液相色譜法〔HPLC法〕HPLC法檢查雜質(zhì)的方法有五種：特殊雜質(zhì)的檢查方法2023/11/61、內(nèi)標(biāo)法加校正因子法適用于有雜質(zhì)比照品時能夠測定雜質(zhì)的校正因子雜質(zhì)的含量測定。高效液相色譜法比照品+內(nèi)標(biāo)→進(jìn)樣，求校正因子供試品+內(nèi)標(biāo)→進(jìn)樣，求Cx內(nèi)標(biāo)物濃度雜質(zhì)比照品濃度供試品中雜質(zhì)的峰面積內(nèi)標(biāo)物的峰面積雜質(zhì)比照品的峰面積供試品中雜質(zhì)濃度2023/11/62、外標(biāo)測定法適用于有比照品的雜質(zhì)，而且進(jìn)樣量能夠準(zhǔn)確把握的狀況。3、加校正因子的主成分自身比照測定法高效液相色譜法例：紅霉素中紅霉素B、C的檢查：比照品液(0.2mg/ml)進(jìn)樣20μl，調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程的20%；供試品液(4mg/ml)進(jìn)樣20μl，紅霉素B、C校正后的A，均不得大于比照品液的主峰面積；其它單個雜質(zhì)峰的峰面積之和不得大于比照品液主峰面積〔5.0%〕。比照品液：供試品的稀釋液2023/11/64、不加校正因子的主成分自身比照法該方法適用于沒有雜質(zhì)比照品的狀況。高效液相色譜法比照品液：供試品的稀釋液例:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的檢查：比照品液(0.01mg/ml)進(jìn)樣20μl，調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進(jìn)樣20μl，雜質(zhì)峰的峰面積之和不得大于比照品液主峰面積的1.0%。2023/11/65、面積歸一化法適用于粗略測量供試品中雜質(zhì)的含量。高效液相色譜法例：利巴韋林中有關(guān)雜質(zhì)的檢查：比照品液(5μg/ml)進(jìn)樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程的20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進(jìn)樣10μl,各雜質(zhì)峰的面積之和不得超過總峰面積的1.0%