《生物化學》考研查錫良版2021配套名校考研真題庫

《生物化學》考研查錫良版2021配套名校考研真題庫第一部分名?？佳姓骖}及詳解第1篇生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能第1章蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能一、判斷題1．一級氨基酸就是必需氨基酸。（）[復旦大學2009研]【答案】錯誤查看答案【解析】一級氨基酸是常見的20種氨基酸，而必需氨基酸是人體不能自身合成的，需要從食物中攝入的氨基酸，共有八種：賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸。2．蛋白質(zhì)具有高級結(jié)構(gòu)，而DNA和RNA沒有高級結(jié)構(gòu)。（）[中山大學2009研]【答案】錯誤查看答案【解析】蛋白質(zhì)具有高級結(jié)構(gòu)，DNA和RNA也有高級結(jié)構(gòu)。3．所有的絲氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元體，所以它們都屬于同源蛋白。（）[南京大學2009研]【答案】錯誤查看答案【解析】同源蛋白是指在不同生物體內(nèi)行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)。雖然所有的絲氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元體，但是它們各自可以在同一生物體內(nèi)具有不同的作用。4．用凝膠過濾柱（如SephadexG-100）層析分離蛋白質(zhì)時，總是相對分子質(zhì)量最小的先于相對分子質(zhì)量大的下來。（）[廈門大學2008研]【答案】錯誤查看答案【解析】用凝膠過濾柱層析分離蛋白質(zhì)時，總是相對分子質(zhì)量最大的先于相對分子質(zhì)量小的下來。由于小分子物質(zhì)能進入凝膠顆粒內(nèi)部，用洗脫緩沖液洗脫時流出的速度慢；而大分子物質(zhì)卻被排除在凝膠顆粒外部，進入凝膠顆粒間的縫隙，洗脫時流出的速度較快。所以在洗脫過程中就會按相對分子質(zhì)量的不同而分離蛋白質(zhì)。5．在高爾基復合體中，新合成的蛋白質(zhì)除去信號序列，被糖基化。（）[南開大學2010研]【答案】錯誤查看答案【解析】新合成的蛋白質(zhì)除去信號序列，被糖基化，這個操作是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中完成的。6．蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)決定了其生物活性。（）[哈爾濱工業(yè)大學2008研]【答案】錯誤查看答案【解析】蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)決定了其生物活性，不是二級結(jié)構(gòu)。7．氨基酸與2，4-二硝基氟苯反應(yīng)，首先被Edman用于鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N端氨基酸。（）[山東大學2006研]【答案】錯誤查看答案【解析】氨基酸與2，4-二硝基氟苯反應(yīng)，首先被Sanger用于鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N端氨基酸。8．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域是介于三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)之間的一種結(jié)構(gòu)層次，由氫鍵、鹽鍵和疏水鍵維系其結(jié)構(gòu)。（）[華東理工大學2006、2007研]【答案】錯誤查看答案【解析】蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域是介于二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)之間的一種結(jié)構(gòu)層次，由氫鍵、鹽鍵和疏水鍵維系其結(jié)構(gòu)。9．蛋白質(zhì)變性是指蛋白質(zhì)受到某些理化因素的作用，其一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)都被破壞，生理功能隨之喪失的現(xiàn)象。（）[華南農(nóng)業(yè)大學2009研]【答案】錯誤查看答案【解析】蛋白質(zhì)變性是指蛋白質(zhì)在某些物理和化學因素作用下其特定的空間構(gòu)象被改變，從而導致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失，其高級結(jié)構(gòu)被破壞了但是其一級結(jié)構(gòu)不會被破壞。10．一個化合物如果能同茚三酮反應(yīng)生成紫色，說明這個化合物是氨基酸，肽和蛋白質(zhì)。（）[江南大學2008研]【答案】錯誤查看答案【解析】茚三酮除了能和氨基酸，肽和蛋白質(zhì)反應(yīng)外，它亦能和氨以及其他氨基化合物反應(yīng)生成紫色。11．由于所有中性氨基酸的pI都很接近，因此在用陽離子交換劑分離時，實際是很難把它們分開的。（）[武漢大學2005研]【答案】錯誤查看答案【解析】在用陽離子交換劑分離時，根據(jù)氨基酸的pI采用不同pH的洗脫液，用某一洗脫液洗脫時，對應(yīng)的氨基酸不帶電，然后就被洗脫下來了，所以中性氨基酸用陽離子交換劑把它們分離。12．蛋白質(zhì)肽鏈的基本結(jié)構(gòu)單位為L-α-氨基酸殘基。（）[沈陽藥科大學2006研]【答案】錯誤查看答案【解析】蛋白質(zhì)肽鏈的基本結(jié)構(gòu)單位大多是L-α-氨基酸殘基，但也有的是D-α-氨基酸殘基。13．完全由非必需氨基酸組成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同時給予，可以維持氮平衡。（）[浙江工業(yè)大學2006研]【答案】錯誤查看答案【解析】完全由必需氨基酸組成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同時給予，可以維持氮平衡。二、填空題1．在紫外有特征吸收峰的氨基酸有______、______、______等。[復旦大學2008研]【答案】苯丙氨酸（Phe）；酪氨酸（Tyr）；色氨酸（Trp）查看答案2．蛋白質(zhì)折疊的推動力主要來自于非共價作用中的______。[中山大學2009研]【答案】疏水相互作用查看答案3．穩(wěn)定蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的作用力主要包括______，______，______和______。[廈門大學2008研]【答案】氫鍵；范德華力；疏水作用；二硫鍵查看答案4．蛋白質(zhì)完成一個α-螺旋需______個氨基酸殘基，螺旋每上升一圈向上平移______nm，兩個相鄰氨基酸殘基之間的軸心距為______nm。[南開大學2009研]【答案】3.6；0.54；0.15查看答案5．已知一種蛋白質(zhì)的等電點為4.5，當?shù)鞍踪|(zhì)水溶液的pH為8.0時，該蛋白質(zhì)應(yīng)帶______電荷，并______（能或不能）結(jié)合陽離子交換劑。[北京師范大學2009研]【答案】負；不能查看答案6．肌紅蛋白與血紅蛋白亞基的三級結(jié)構(gòu)______，但它們的氨基酸序列______；從而，非常不同的______可以規(guī)定非常相似的______。[上海交通大學2006研]【答案】相似；差異很大；氨基酸序列；蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)查看答案7．當氨基酸溶液的pH＝pI時，氨基酸以______離子形式存在；當pH＞pI時，氨基酸以______離子形式存在。[哈爾濱工業(yè)大學2007研]【答案】兼性；負查看答案8．蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)有3種基本組合式______、______、______。維持蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要化學鍵是______。[華南農(nóng)業(yè)大學2009研]【答案】αα；βαβ；βββ；氫鍵查看答案9．變性蛋白質(zhì)同天然蛋白質(zhì)的區(qū)別是______、______，不對稱性增高以及其他物理化學常數(shù)發(fā)生改變。蛋白質(zhì)變性的實質(zhì)是______。[湖南大學2007研]【答案】生物活性喪失；溶解度降低；蛋白質(zhì)分子中的次級鍵被破壞，引起天然構(gòu)象解體查看答案10．測定蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的主要方法包括______、______和電鏡三維重構(gòu)。[中國科技大學2008研]【答案】X-射線晶體衍射；核磁共振查看答案11．胰島素分子是由兩條多肽鏈通過______連接而成。[鄭州大學2007研]【答案】二硫鍵查看答案12．在蛋白質(zhì)顏色反應(yīng)中，Tyr與米倫試劑反應(yīng)呈______，與酚試劑反應(yīng)呈______。[天津大學2002研]【答案】紅色；藍色查看答案13．柱層析分析法中的分子篩作用是小分子物質(zhì)走在______，大分子物質(zhì)走在______。[南京師范大學2008研]【答案】顆粒內(nèi)徑中；顆粒間隙中查看答案14．對紫外區(qū)光線有吸收的氨基酸殘基是______、______、______。[西北大學2004研]【答案】酪氨酸；苯丙氨酸；色氨酸查看答案15．______和______是相對分子質(zhì)量小且含羥基的氨基酸，在一個肽鏈折疊的蛋白質(zhì)中形成內(nèi)部氫鍵。[浙江工業(yè)大學2006研]【答案】Ser；Thr查看答案三、選擇題1．在pH9的天冬氨酸溶液里，下列哪一種結(jié)構(gòu)占優(yōu)勢？（

）[南京大學2008研]A．羧基氨基酸都不解離

B．只有α-羧基解離C．α-羧基和β-羧基都解離

D．只有β-羧基解離【答案】C查看答案2．在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析中常以二硫鍵進行拆行，下列哪一試劑用于防止二硫鍵的再形成？（

）。[南開大學2009研]A．過甲酸B．碘乙酸C．巰基乙醇D．二硫蘇糖醇【答案】B查看答案3．在蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)分析中，測定肽片斷氨基酸序列的最佳方法是（

）。[四川大學2007研]A．Sanger試劑法B．Edman降解法C．ddNTP法D．蛋白酶法【答案】B查看答案4．下列關(guān)于抗體分子的敘述哪項是錯誤誤的？（）[鄭州大學2007研]A．輕鏈的N-末端二分之一及重鏈的N-末端四分之一是可變區(qū)B．重鏈的恒定區(qū)在同一類免疫球重擊中是相同的C．抗原結(jié)合部位位于輕鏈的N-末端可變區(qū)D．經(jīng)木瓜蛋白酶消化可將其輕鏈和重鏈分開【答案】D查看答案5．下面是關(guān)于寡聚體蛋白（或寡聚體酶）有關(guān)敘述，除（）外都是正確的。[武漢大學2005研]A．亞基呈非旋轉(zhuǎn)對稱關(guān)系B．匯集酶的活性部位C．增大遺傳上的經(jīng)濟性和有效性D．亞基的結(jié)合有利于增高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性【答案】A查看答案6．應(yīng)用SDS-聚丙酰胺凝膠電泳測定具有四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)時，所測得的分子質(zhì)量應(yīng)為（）。[南京師范大學2008研]A．蛋白質(zhì)分子量B．蛋白質(zhì)亞基分子量C．蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域分子量D．蛋白質(zhì)相對應(yīng)的DNA分子量【答案】B查看答案7．胰蛋白酶對肽鏈的水解位點是（）。[沈陽藥科大學2006研]A．谷氨酸殘基的羧基所形成的肽鍵B．賴氨酸殘基的羧基所形成的肽鍵C．谷氨酸殘基的氨基所形成的肽鍵D．賴氨酸殘基的氨基所形成的肽鍵【答案】B查看答案8．關(guān)于蛋白質(zhì)的β折疊片的敘述正確的是（

）。[中國農(nóng)業(yè)大學2010研]A．氫鍵平行于多肽鏈走向B．肽鏈氨基與羧基參與氫鍵形成C．與R基位于折疊片同側(cè)D．氨基酸殘基親水【答案】B查看答案9．具有四級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)特征是（

）。[華東理工大學2007研]A．分子中必定含有輔基B．在兩條或兩條以上具有三級結(jié)構(gòu)多肽鏈的基礎(chǔ)上，肽鏈進一步折疊，盤曲形成C．每條多肽鏈都具有獨立的生物學活性D．依賴肽鍵維系四級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性E．由兩條或兩條以上具在三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈組成【答案】E查看答案10．利用流動相中的離子能與固定相進行可逆的交換性質(zhì)來分離大分子化合物的方法是（）。[湖南大學2007研]A．凝膠層析法B．吸附層析法C．分配層析法D．親和層析法E．離子交換層析法【答案】E查看答案11．下列哪種氨基酸不屬于必需氨基酸？（）[中國藥科大學2006研]A．蘇氨酸B．苯丙氨酸C．組氨酸D．蛋氨酸E．賴氨酸【答案】C查看答案12．分離含有二硫鍵的肽段可以用（）。[西北大學2004研]A．SDS電泳B．對角線電泳C．瓊脂糖電泳D．WesternBlottingE．上述技術(shù)都不可以【答案】B查看答案13．以下哪個是正確的？（

）[浙江大學2009研]A．氨基酸能作為質(zhì)子的供體和受體B．酸性越強，Ka值越高C．酸性越強，pH越小D．氨基酸是兩性的E．均正確【答案】E查看答案四、名詞解釋1.Isoelectricpoint[鄭州大學2007研]答：等電點（pI），在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時溶液的pH稱為該氨基酸的等電點。兩性離子所帶電荷因溶液的pH值不同而改變，當兩性離子正負電荷數(shù)值相等時，溶液的pH值即其等電點；當外界溶液的pH大于兩性離子的pI值，兩性離子釋放質(zhì)子帶負電；當外界溶液的pH小于兩性離子的pI值，兩性離子質(zhì)子化帶正電。2．兩性電解質(zhì)[復旦大學2008研]答：兩性電解質(zhì)就是既能當酸又能當堿用的電解質(zhì)。兩性電解質(zhì)通常為兩性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。它們在溶液中存在著兩性離解平衡，既能離解出H＋離子又能離解出OH－離子或者和H＋離子結(jié)合，既能與酸，也能與堿起反應(yīng)而被中和。3．必需氨基酸[山東大學2005研]答：必需氨基酸（essentialaminoacid）是人體（或其他脊椎動物）必不可少，而機體內(nèi)又不能合成的，必須從食物中補充的氨基酸，稱必需氨基酸。對成人來講必需氨基酸共有八種：賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸。如果飲食中經(jīng)常缺少上述氨基酸，可影響健康。它對嬰兒的成長起著重要的作用。對嬰兒來說，組氨酸也是必需氨基酸。4．透析法與超濾法[北京師范大學2009研]答：（1）透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達到分離的方法。透析只需要使用專用的半透膜即可完成。透析的動力是擴散壓，擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。（2）超濾法是一種根據(jù)溶液中分子的大小和形態(tài)，在埃（10－8厘米）數(shù)量級選擇性過濾的技術(shù)。這種方法，在一定的壓力下（外源N2壓或真空泵壓），使溶劑和較小分子的溶質(zhì)能通過一定孔徑的薄膜，大分子的溶質(zhì)則不能透過，從而可以使高分子物質(zhì)脫鹽、脫水和濃縮；在一定的條件下，還可以起到分離和純化的作用。從另一角度來看，超濾也可以認為具有溶液相的分子篩作用，根據(jù)所用超濾膜的型號不同，可以在分子量500～100,000內(nèi)迸行篩分。5．變構(gòu)效應(yīng)[四川大學2007研]答：變構(gòu)效應(yīng)又稱為別構(gòu)效應(yīng)，某種不直接涉及蛋白質(zhì)活性的物質(zhì)，結(jié)合于蛋白質(zhì)活性部位以外的其他部位（別構(gòu)部位），引起蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化，而導致蛋白質(zhì)活性改變的現(xiàn)象。6．蛋白質(zhì)變性[哈爾濱工業(yè)大學2007研]答：天然蛋白質(zhì)因受物理的或化學因素的影響，其分子內(nèi)部原有的高度規(guī)律性結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，致使蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學性質(zhì)都有所改變，但并不導致蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的破壞，這種現(xiàn)象稱蛋白質(zhì)變性。7．超二級結(jié)構(gòu)[華中師范大學2010研]答：超二級結(jié)構(gòu)是指在多肽鏈內(nèi)順序上相互鄰近的二級結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成規(guī)則的二級結(jié)構(gòu)聚集體。目前發(fā)現(xiàn)的超二級結(jié)構(gòu)有三種基本形式：α螺旋組合（αα）；β折疊組合（βββ）和α螺旋β折疊組合（βαβ），其中以βαβ組合最為常見。它們可直接作為三級結(jié)構(gòu)的“建筑塊”或結(jié)構(gòu)域的組成單位，是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級結(jié)構(gòu)與三級結(jié)構(gòu)之間的一個層次，故稱超二級結(jié)構(gòu)。8．肽鍵（peptidebond）[中國科技大學2009研]答：肽鍵是一個氨基酸分子的α-羧基和另一個氨基酸分子的α-氨基發(fā)生?；磻?yīng)，脫去一分子水形成的酰胺鍵。9．肽圖（peptidemap）[中國藥科大學2006研]答：肽圖是肽的指紋圖譜。肽部分水解后，做單向紙層析，再做第二相紙電泳而得到的圖譜。10．鹽析[陜西師范大學2005研]答：當鹽離子濃度足夠高時，很多蛋白質(zhì)可以從水溶液中沉淀出來，這種現(xiàn)象稱為鹽析。鹽析作用主要是由于大量中性鹽的加入使水的活度降低，原來溶液中的大部分甚至全部的自由水轉(zhuǎn)變?yōu)辂}離子的結(jié)合水，蛋白質(zhì)的水化層被破壞，因而被沉淀出來。鹽析法沉淀出來的蛋白質(zhì)一般不變性，且不同的蛋白質(zhì)可以用不同濃度的鹽沉淀出來，稱作分段鹽析。鹽析法是對蛋白質(zhì)進行粗分離的常用方法。11．蛋白質(zhì)的復性[沈陽藥科大學2006研]答：發(fā)生可逆變性的蛋白質(zhì)在一定條件下，無活性的構(gòu)象重新恢復為有活性的天然空間構(gòu)象，稱為蛋白質(zhì)的復性。12.Sanger反應(yīng)[西北大學2004研]答：在弱堿性溶液中，氨基酸的α-氨基容易與2，4-二硝基氟苯作用，生成穩(wěn)定的黃色化合物2，4-二硝基苯氨基酸。由于Sanger在研究蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)時，廣泛使用了這一反應(yīng)，因而被稱作Sanger反應(yīng)。13．凝膠電泳/SDS[浙江工業(yè)大學2006研]答：凝膠電泳是以凝膠為介質(zhì)，在電場作用下分離蛋白質(zhì)或核酸等分子的分離純化技術(shù)。SDS即為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，通常用于蛋白質(zhì)分子量的測定，SDS即十二烷基硫酸鈉，是一種變性劑，統(tǒng)一蛋白形狀和表面電荷，泳動速率只跟分子質(zhì)量有關(guān)。14．蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)[東北師范大學2008研]答：蛋白質(zhì)分子多肽鏈中氨基酸的排列順序稱為蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。各種蛋白質(zhì)中氨基酸排列順序是由該生物遺傳信息決定的，一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)分子的基本結(jié)構(gòu)，它是決定蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的基礎(chǔ)，而蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象則是實現(xiàn)其生物學功能的基礎(chǔ)。五、問答題1．假定某蛋白相對分子質(zhì)量為180KDa，其一級結(jié)構(gòu)可能是直線式的也可能是閉環(huán)式的。請分析是否有可能的簡單的合理方法加以鑒別？[中山大學2009研]答：可以用Sanger反應(yīng)或Edman反應(yīng)對蛋白質(zhì)的N末端氨基酸進行測定。Sanger反應(yīng)中，F(xiàn)DNB可以與肽鏈N末端氨基酸的α-氨基反應(yīng)生成黃色的DNP-氨基酸。經(jīng)Sanger反應(yīng)若該蛋白的一級結(jié)構(gòu)是直鏈式的，則可產(chǎn)生黃色的反應(yīng)；若該蛋白是閉環(huán)式的，由于N末端沒有α-氨基，則不能出現(xiàn)黃色的反應(yīng)。而Edman反應(yīng)中，肽鏈N末端氨基酸的α-氨基可與苯異硫氰酸酯反應(yīng)生成PTH-氨基酸，用三氟乙酸處理釋放出PTH-氨基酸，再用有機溶劑萃取出來，通過色譜分析可以鑒定出PTH-氨基酸。經(jīng)Edman反應(yīng)后，若能測出N末端氨基酸，則該蛋白為直鏈式；若測不出，則該蛋白為閉環(huán)式。另外，理論上講，如果知道序列，可以找一種合適的蛋白酶切斷某一位點，再進行電泳，若該蛋白是閉環(huán)式，則電泳結(jié)果只產(chǎn)生一條帶，且大小不變；若是直鏈式，則會產(chǎn)生兩條帶，分子量加起來正好180KDa。2．試寫出下列生化名詞縮寫的中文名稱以及它們在生物化學中的應(yīng)用。（1）HPLC（2）FPLC（3）SDS（4）ELISA（5）RT-PCR（6）HIC（7）IEF。[南京大學2008研]答：如表1-1所示：表1-1縮寫中文名稱縮寫應(yīng)用HPLC高效液相層折氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)等的分離純化FPLC快速蛋白質(zhì)液相層析蛋白質(zhì)、多肽及多核苷酸的分離純化SDSSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定測定抗原或抗體RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)擴增cDNAHIC疏水層析利用蛋白質(zhì)表面的非極性基團和介質(zhì)上的非極性基團間的疏水作用來分離純化蛋白質(zhì)IEF等電聚焦測定蛋白質(zhì)的等電點3．某一蛋白純化后，凝膠過濾層析顯示其分子量為300000。若在6mol/L鹽酸胍存在條件下對該蛋白進行凝膠過濾層析，只獲得一分子量為50000的蛋白峰。當6mol/L鹽酸胍和10mmol/Lβ-巰基乙醇同時存在時，凝膠過濾層析結(jié)果顯示分子量為17000和33000的兩個蛋白峰。請分析該蛋白的結(jié)構(gòu)。[南開大學2008研]答：該蛋白是由6個單體組成的多聚體，每個單體又由兩個亞基靠二硫鍵連接起來。4．有一個五肽，加酸水解得Leu、Ala、Tyr利Lys；用羧肽酶水解得酪氨酸；用胰蛋白酶水解得三組分：（1）Lys、Tyr；（2）Tyr；（3）Lys、Leu、Ala；用丹磺酰氯處理，再用酸水解得賴氨酸的熒光衍生物。試說明此肽的氨基酸序列。[北京師范大學2005研]答：（1）加酸水解得Leu、Tyr、Lys、Ala，說明此五肽由Leu、Tyr、Lys、Ala組成。（2）用羧肽酶水解得Tyr，說明C端殘基為Tyr。（3）用胰蛋白酶水解得三組分Lys、Tyr；Tyr；Lys、Leu、Ala。因為胰蛋白酶專一水解Lys和Arg羧酸形成的肽鍵，水解得三組分，說明此五肽中含有兩個Lys殘基，則其可能的序列為Leu-Ala-Lys-Lys-Tyr和Ala-Leu-Lys-Lys-Tyr。（4）丹磺酰氯可用于測定肽鏈的氨基末端，它能專一地與鏈N-端α-氨基反應(yīng)生成丹磺酰-肽，丹磺酰-肽水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強的熒光，用丹磺酰氯處理，再用酸水解得賴氨酸的熒光衍生物，說明肽鏈N端為Leu。因此，此肽的氨基酸序列Leu-Ala-Lys-Lys-Tyr。5．在一個篩選程序中探測到一個遷移率異常的Hb。胰蛋白酶消化后的指紋分析顯示在β鏈內(nèi)發(fā)生了一個氨基酸的取代：正常的氨基端（胰蛋白酶酶切產(chǎn)物，其氨基端第一殘基是Val）八肽（Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys）不見了，代之以一個新的六肽。問（1）哪些氨基酸取代符合上述觀察到的現(xiàn)象？（2）給出部分密碼表如表1-2所示，編碼上述正常（β鏈氨基端）八肽的DNA序列為GTGCACCTGACTCCTGAGGAGAAG，此序列中哪些單堿基突變可造成這樣的氨基酸取代？（3）這個（突變的）Hb與HbA和HbS比較（pH8），（如朝負極泳動）三者的電泳遷移率有什么區(qū)別？[上海交通大學2006研]表1-2UCACGValAlaGluGlyAGValAlaGluGlyGAIleThrLysArgAAIleThrLysArgG答：（1）主要有以下氨基酸取代：Glu6變?yōu)锳rg，Lys；His2變?yōu)锳rg，Lys，因胰蛋白酶切割羰基端為Arg或Lys的肽鏈。（2）可造成這樣氨基酸取代的單堿基突變是G16變?yōu)锳，使Glu變?yōu)長ys。因為其他單堿基突變不會導致氨基酸的改變而發(fā)生取代。（3）這個（突變的）Hb與HbA和HbS的電泳遷移率：HbX＞HbS＞HbA，根據(jù)肽鏈帶電情況。HbA是正常成人血紅蛋白，HbS是鐮刀形紅細胞貧血患者的異常血紅蛋白，其β鏈節(jié)6位谷氨酸為纈氨酸取代。HbX中Glu6變?yōu)锳rg，Lys；His2變?yōu)锳rg，Lys，帶負電的氨基酸變?yōu)閹д姾傻陌被?，而HbS中Glu變?yōu)閂al，帶負電的氨基酸變?yōu)椴粠щ姾傻陌被帷Ｓ捎陔娪境摌O泳動，所以電泳遷移率：HbX＞HbS＞HbA。6．今有以下四種蛋白質(zhì)的混合物：①分子量50,000，pI＝10；②分子量72,000，pI＝3.5；③分子量31,000，pI＝7；④分子量12,000，pI＝5，用中性鹽梯度洗脫時，若不考慮其他因素：（1）它們流過DEAE-纖維素陰離子交換柱；（2）流經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾柱時，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？[四川大學2006研]答：（1）用DEAE-纖維素陰離子交換柱分離蛋白質(zhì)，在一定的pH條件下，等電點pI＞pH的蛋白質(zhì)帶正電，不能與陰離子交換劑結(jié)合；等電點pI＜pH的蛋白質(zhì)帶負電，能與陰離子交換劑結(jié)合，一般pI越大的蛋白質(zhì)與陰離子交換劑結(jié)合力越弱，首先被洗脫下來。比較4種蛋白質(zhì)的等電點pI：①＞③＞④＞②。所以，當它們流過DEAE-纖維素陰離子交換柱，洗脫順序為①→③→④→②。（2）凝膠過濾是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進行分離。小分子物質(zhì)能進入其內(nèi)部，流下時路程較長，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，因此大分子先流出來，小分子后流出來。比較這4種蛋白質(zhì)的分子量：②＞③＞①＞④。所以，流經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾柱時，洗脫順序為②→③→①→④。7．維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的因素有哪些？根據(jù)這些因素解釋可逆變性和不可逆變性？[東北師范大學2008研]答：（1）蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)，其中，維持一級結(jié)構(gòu)的主要因素是肽鍵、二硫鍵；維持二級結(jié)構(gòu)的主要因素是氫鍵；維持三級結(jié)構(gòu)的主要因素是疏水鍵、離子鍵、氫鍵和范德華力等；維持四級結(jié)構(gòu)的主要因素是疏水作用，其次是氫鍵和離子鍵。（2）蛋白質(zhì)變性分為可逆變性和不可逆變性兩類：有的蛋白質(zhì)變性后如設(shè)法將變性劑除去，該變性蛋白尚能恢復其天然構(gòu)象和生物學活性，這一現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的復性，又稱可逆變性，可逆變性一般只涉及蛋白質(zhì)分子的四級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)的變化，即疏水鍵、離子鍵、氫鍵和范德華力等被破壞；大多數(shù)蛋白質(zhì)的可逆變性條件可能很復雜，許多蛋白質(zhì)變性后空間結(jié)構(gòu)破壞嚴重而不能復性，此種情況稱為不可逆變性，不可逆變性時二級結(jié)構(gòu)也發(fā)生了變化，即氫鍵斷裂，破壞了肽鍵特定的排列，內(nèi)部的一些非極性基團暴露到了分子表面，促進了蛋白質(zhì)分子之間的相互結(jié)合而發(fā)生不可逆變性。8．蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系？[哈爾濱工業(yè)大學2007研]答：（1）蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。①一級結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)。例如，RNase是由124氨基酸殘基組成的單肽鏈，分子中8個Cys的—SH構(gòu)成4對二硫鍵，形成具有一定空間構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子。在蛋白質(zhì)變性劑和一些還原劑存在下，酶分子中的二硫鍵全部被還原，酶的空間結(jié)構(gòu)破壞，肽鏈完全伸展，酶的催化活性完全喪失。當用透析的方法除去變性劑和巰基乙醇后，發(fā)現(xiàn)酶大部分活性恢復，所有的二硫鍵準確無誤地恢復原來狀態(tài)。若用其他的方法改變分子中二硫鍵的配對方式，酶完全喪失活性。這個實驗表明，蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)決定它的空間結(jié)構(gòu)，而特定的空間結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)具有生物活性的保證。②蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)決定其高級結(jié)構(gòu)，因此最終決定了蛋白質(zhì)的功能。例如，84個氨基酸的胰島素原，胰島素原也沒活性，在包裝分泌時，A、B鏈之間的33個氨基酸殘基被切除，才形成具有活性的胰島素。③功能相似的蛋白質(zhì)往往能顯示它們在進化上的親緣關(guān)系：比較不同來源的細胞色素C發(fā)現(xiàn)，與功能密切相關(guān)的氨基酸殘基是高度保守的，這說明不同種屬具有同一功能的蛋白質(zhì)，在進化上來自相同的祖先，但存在種屬差異。不同種屬間的同源蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)上相對應(yīng)的氨基酸差別越大，其親緣關(guān)系愈遠，反之，其親緣關(guān)系愈近。④許多疾病都是由于相關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常引起的?；蛲蛔儗е碌鞍踪|(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變而產(chǎn)生的遺傳病。稱之為分子病。如鐮刀型貧血癥是由于血紅蛋白的β-亞基上的第六位氨基酸由谷氨酸變成了纈氨酸，導致血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的改變，其運輸氧氣的能力大大地降低，并且紅細胞呈鐮刀狀。所以，蛋白質(zhì)一定的結(jié)構(gòu)執(zhí)行一定的功能。功能不同的蛋白質(zhì)總是有著不同的序列；比較種屬來源不同而功能相同的蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)，可能有某些差異，但與功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)也總是相同的。若一級結(jié)構(gòu)變化，蛋白質(zhì)的功能可能發(fā)生很大的變化。（2）蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。各種蛋白質(zhì)都有特定的空間構(gòu)象，而特定的空間構(gòu)象又與它們特定的生物學功能相適應(yīng)，蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能是高度統(tǒng)一的。例如，Hb與O2結(jié)合后，Hb的構(gòu)象發(fā)生變化，這類變化稱為變構(gòu)效應(yīng)，即通過構(gòu)象變化影響蛋白質(zhì)的功能。像血紅蛋白這種具有變構(gòu)效應(yīng)的蛋白質(zhì)稱為變構(gòu)蛋白。血紅蛋白的這種變構(gòu)效應(yīng)能更有效地行使其運氧的生物學功能。9．蛋白質(zhì)電泳基本原理及影響電泳速度的主要因素。[山東大學2006研]答：（1）蛋白質(zhì)電泳基本原理。蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)，它同時具有游離氨基和羧基。每種蛋白質(zhì)都有它自己的等電點。等電點的高低取決于蛋白質(zhì)的性質(zhì)，在等電點時，蛋白質(zhì)所帶的正負電荷相等。在pH大于等電點溶液中，羧基解離多，此時蛋白質(zhì)帶負電荷，帶負電荷的蛋白質(zhì)在電場中向正極移動。反之，在pH小于等電點的溶液中，氨基解離多，此時蛋白質(zhì)帶正電荷，在電場中向負極移動。這種帶電質(zhì)點在電場中向著帶異相電荷的電場移動，稱為電泳。帶電質(zhì)點所以能在電場中移動以及具有一定的移動速度，取決于其本身所帶的電荷、電場強度、溶液的pH值、黏度以及電滲等因素。（2）影響電泳的因素。不同帶電質(zhì)點在同一電場中的遷移率（或泳動度）不同，影響遷移率的因素有：①帶電質(zhì)點的性質(zhì)。顆粒所帶凈電荷的量，顆粒大小及形狀等。帶電荷越多，分子越小，泳動速度越快。②電場強度。電場強度是單位厘米的電位差。電場強度越大，帶電質(zhì)點泳動速度越快。反之亦然。③溶液中pH值。溶液的pH值決定了帶電質(zhì)點的解離程度，也決定了物質(zhì)所帶電荷的多少。對蛋白質(zhì)、氨基酸等兩性電解質(zhì)而言，pH值離等電點越遠，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也越快。反之則越慢。蛋白質(zhì)在酸性溶液中易變性，在偏堿溶液中比較穩(wěn)定，所以蛋白質(zhì)電泳大多用pH8.2～8.8的巴比妥或硼酸緩沖液，在這種pH中，血清蛋白一般都帶負電荷。④溶液的離子強度。溶液的離子強度越高，顆粒泳動速度越慢，反之越快。血清電泳一般最適宜離子強度在0.025～0.075之間。離子強度越低，緩沖液的電流下降，擴散現(xiàn)象嚴重，使分辨力明顯降低。離子強度太高，將有大量的電流通過瓊脂板，由此而產(chǎn)生的熱量使板中水分大量蒸發(fā)，嚴重時可使瓊脂板斷裂而導致電泳中斷。溶液中離子強度與溶液的濃度成正比。⑤電滲作用。電滲是在電場中液體對于固體支持物的相對移動。由于瓊脂中含有SO42－，帶負電荷，造成靜電感應(yīng)致使附近的水帶正電荷，而向負極移動，所以電泳時有兩種力，即電泳力和電滲力。如果物質(zhì)原來帶正電荷，向負極移動，則因電滲作用向負極移動得更快。如果物質(zhì)向正極移動，所帶電荷少，電泳力抵不過電滲力，則也向負極移動，血清中的γ球蛋白就是如此。⑥吸附作用。即介質(zhì)對樣品的滯留作用。它導致了樣品的拖尾現(xiàn)象而降低了分辨率。紙的吸附作用最大，醋酸纖維膜的吸附作用較小或無。⑦電泳時間，電泳時間與遷移率成正比。10．自然界的生物多種多樣，因而蛋白質(zhì)的種類和功能也十分繁多，沒有蛋白質(zhì)也就沒有生命，試述蛋白質(zhì)的功能多樣性及其意義。[華東理工大學2007研]答：（1）構(gòu)造、更新、修補功能：蛋白質(zhì)是一切生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是肌體細胞的重要組成部分，細胞在代謝中蛋白質(zhì)的更新以及細胞分裂、個體成長都必須要蛋白質(zhì)的供給和補充。各種因素造成細胞破損、組織創(chuàng)傷時，也需要蛋白質(zhì)作為修補的原料。（2）催化、調(diào)節(jié)功能：物質(zhì)代謝依靠生物催化酶。已知的二千多種酶的化學本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。除酶以外，還需要一些調(diào)控物質(zhì)來控制各種代謝途徑的相互配合，使其成為一個完整的生命活動過程。其中許多調(diào)控物質(zhì)，如胰島素、生長素、胸腺素和多種促激素的化學本質(zhì)也是蛋白質(zhì)。（3）轉(zhuǎn)運、儲存功能：體內(nèi)一些小分子物質(zhì)和疏水性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運主要靠血液中特異的蛋白質(zhì)來轉(zhuǎn)運的。肝臟中的鐵離子以鐵蛋白復合體的形式儲存。（4）運動、支持作用：生物體的一切活動都伴有肌肉的收縮和舒張，都是由肌動蛋白和肌球蛋白等相互作用來完成。皮膚、骨骼和肌腱的膠原纖維主要含有膠原蛋白，它具有強烈的韌性，從而保證這些組織的功能。（5）免疫、保護功能：生物體的免疫功能與抗體有關(guān)，而抗體是一類特異的球蛋白，對細菌、病毒和異體蛋白有高度的識別能力，并與之結(jié)合使其失活，從而保護生物體的正常機能狀態(tài)。（6）生長、繁殖功能：生物的生長、繁殖、遺傳和變異都與核蛋白有關(guān)。核蛋白是核酸和蛋白質(zhì)組成的結(jié)合蛋白質(zhì)，由組蛋白和阻遏蛋白來控制調(diào)節(jié)。（7）載體、受體：存在于生物膜上起著轉(zhuǎn)運物質(zhì)和傳遞信息的蛋白質(zhì)，載體將胞外物質(zhì)送入胞內(nèi)；受體將信息帶入胞內(nèi)。（8）氧化供能功能：體內(nèi)組織蛋白質(zhì)分解為氨基酸后，經(jīng)脫氨基作用生成α-酮酸，后者參加三羧酸循環(huán)氧化分解，釋放能量。11．今有以下四種蛋白質(zhì)的混合物：（A）相對分子質(zhì)量12000，pI10；（B）相對分子質(zhì)量62000，pI4；（C）相對分子質(zhì)量28000，pI7；（D）相對分子質(zhì)量9000，pI5。若不考慮其他因素，當它們：（1）流過DEAE-纖維素陰離子交換柱，用緩沖液pH8.8和線性NaCl鹽梯度洗脫時；（2）流經(jīng)SephadexG-75凝膠過濾柱時，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？并簡單說明原因。[華南農(nóng)業(yè)大學2009研]答：（1）在DEAE-纖維素陰離子交換柱層析中，蛋白質(zhì)有不同的pI，在同一pH下，各種蛋白質(zhì)所帶的電荷的種類和數(shù)量不同，因此與離子交換劑的吸附作用的強弱不同。帶負電荷少，吸附能力弱的先洗脫下來，帶負電荷多，吸附能力強的后洗脫下來，從而將蛋白質(zhì)混合物分開，據(jù)此分析可知四種蛋白質(zhì)的洗脫順序為：（A）、（C）、（D）、（B）。（2）在SephadexG-75凝膠過濾柱時，小顆粒（小分子質(zhì)量）進入凝膠的孔內(nèi)擴散，流動速度慢，后洗脫；大顆粒（大分子量）不進入凝膠的孔內(nèi)，滑動速度快，先洗脫。據(jù)此分析可知四種蛋白質(zhì)的洗脫順序為：（B）、（C）、（A）、（D）。12．球蛋白的四個結(jié)構(gòu)層次。[中國科技大學2009研]答：球蛋白的四個結(jié)構(gòu)層次：（1）一級結(jié)構(gòu)，氨基酸序列，包含蛋白質(zhì)全部的交給信息，決定其他不同層次的結(jié)構(gòu)形式；（2）二級結(jié)構(gòu)，包括多肽鏈主鏈肽段的規(guī)則構(gòu)象及不規(guī)則構(gòu)象。α-螺旋含量高的蛋白質(zhì)，一般是緊密而穩(wěn)定的，不易變化，所以活性部位不會位于α-螺旋區(qū)域。含β-折疊多的蛋白質(zhì)，其構(gòu)象的緊密程度及穩(wěn)定性稍差一些，但它們的構(gòu)象容易變化，有利于發(fā)揮蛋白質(zhì)的生物功能；（3）超二級結(jié)構(gòu)，充當三級結(jié)構(gòu)的建筑塊；（4）結(jié)構(gòu)域，每個結(jié)構(gòu)域都是緊密裝配的，但結(jié)構(gòu)域之間形成裂隙，以松散的單鏈相連；（5）三級結(jié)構(gòu)，對于單鏈蛋白質(zhì)，它就是分子本身的特征性立體結(jié)構(gòu)；對于多鏈蛋白中，它就是亞基的立體結(jié)構(gòu)；______（6）四級結(jié)構(gòu)，許多相同或不同的球狀亞基，以非共價鍵聚集在一起，構(gòu)成了高度有序的具有生物功能的寡聚體。13．比較蛋白質(zhì)α-螺旋中的氫鍵和DNA雙螺旋中的氫鍵，并指出氫鍵在穩(wěn)定這兩種結(jié)構(gòu)中的作用。[鄭州大學2007研]答：蛋白質(zhì)α-螺旋的穩(wěn)定性是靠鏈內(nèi)氫鍵維持的，是由每個氨基酸殘基的N—H于前面隔3個氨基酸的C＝O形成，肽鍵上所有的肽鏈都參與氫鍵的形成，故α-螺旋相當穩(wěn)定。在DNA雙螺旋中：①穩(wěn)定雙螺旋的最重要因素是堿基堆積力；②堿基配對的氫鍵，GC含量越多，DNA雙螺旋越穩(wěn)定。在α-螺旋中，一個殘基上的羧基氧與旋轉(zhuǎn)一圈后的（該殘基后面）第四個殘基上的α-氨基中的氮形成氫鍵，這些在肽鏈骨架內(nèi)原子間形成的氫鍵大致平行于該螺旋的軸，氨基酸側(cè)鏈伸向骨架外，不參與螺旋內(nèi)的氫鍵形成。在雙鏈DNA中糖-磷酸骨架不形成氫鍵，相反在相對的兩條鏈中互補的堿基之間形成2個或3個氫鍵，氫鍵大致垂直于螺旋軸。在α-螺旋中，單獨的氫鍵是很弱的，但是這些鍵的合力穩(wěn)定了該螺旋結(jié)構(gòu)。尤其是在一個蛋白質(zhì)的疏水內(nèi)部，這里水不與氫競爭成鍵。在DN