HIV抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP

HIV抗體檢測(cè)原則操作程序（SOP）——微生物科樣本的采集和解決二、檢測(cè)辦法和環(huán)節(jié)三、質(zhì)控品的應(yīng)用辦法四、儀器的使用和維護(hù)五、成果的統(tǒng)計(jì)、解釋與報(bào)告六、保密程序七、實(shí)驗(yàn)室的清理、消毒八、艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)九、附表樣品的采集和解決1.樣品的采集：1.1血清樣品采集：用注射器抽出一定量靜脈血，室溫下自然放置1-2小時(shí)，待血清凝固和血塊收縮后在用3000rmp離心15min，吸出血清備用。1.2抗凝血樣品采集：用加有抗凝劑的真空管或用消毒注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管，重復(fù)輕搖，分離血漿和血細(xì)胞備用。1.3采樣注意事項(xiàng)：1.3.1采集樣品應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范及試劑盒闡明書(shū)規(guī)定進(jìn)行。1.3.2采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意安全，直接接觸HIV感染者或艾滋病病人血液和體液的操作應(yīng)戴雙層手套。2、樣品的保存：2.1用于抗體檢測(cè)的血清或血漿樣品應(yīng)寄存與-20攝食度下列，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的樣品可寄存于2-8攝食度。3.樣品的運(yùn)輸：3.1實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊狀況外普通不運(yùn)輸全血。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號(hào)或受檢者姓名、種類、、采樣時(shí)間。3.2將試管放入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒。在試管的周邊墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。3.3特殊狀況下如需對(duì)個(gè)別樣品進(jìn)行復(fù)測(cè)，能夠用特快專遞形式投寄，但必須將盛有樣品的試管包扎好，確保不會(huì)破碎和遺漏。4.樣品的接受：4.1含有感染性樣品的包裹必須在含有解決感染源設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)由通過(guò)培訓(xùn)的工作人員打開(kāi)，用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。4.2核對(duì)標(biāo)本與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損及遺漏。如發(fā)現(xiàn)遺漏應(yīng)立刻將尚存留的樣品移出、對(duì)樣品管和盛器消毒，同時(shí)還要報(bào)告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。檢查辦法和環(huán)節(jié)1.檢查辦法：酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）2.檢查環(huán)節(jié)：嚴(yán)格按照試劑闡明書(shū)操作。3.注意事項(xiàng)：3.1嚴(yán)禁肉眼判讀！3.2確保酶標(biāo)儀，洗板機(jī)正常運(yùn)轉(zhuǎn)，確保加樣器精確，選擇高質(zhì)量的與加樣器配套的TIP頭3.3使用使用期內(nèi)的試劑3.4確保樣品質(zhì)量質(zhì)控品的應(yīng)用辦法1.質(zhì)控品按臨床樣本看待，操作應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室安全管理?xiàng)l例執(zhí)行。2.質(zhì)控品使用前應(yīng)在室溫（18－25℃3.外部對(duì)照的設(shè)立：日常檢測(cè)中，每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)立一孔外部對(duì)照（一次實(shí)驗(yàn)中使用多塊酶標(biāo)板時(shí)，每塊酶標(biāo)板均應(yīng)單獨(dú)設(shè)立一孔外部對(duì)照）。4.質(zhì)控品開(kāi)蓋使用后，可保存于2－8℃5.質(zhì)控品應(yīng)避免重復(fù)凍融。儀器的使用和維護(hù)1.設(shè)立慣用儀器的維護(hù)制度，以確保正常運(yùn)轉(zhuǎn)；根據(jù)使用狀況更換必要的部件：

1.1酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī)

每天：核對(duì)濾光片波長(zhǎng)，檢查洗板機(jī)管道與否暢通，與否有漏液現(xiàn)象。

每七天：清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵。

每月：檢查洗滌時(shí)各孔與否與對(duì)應(yīng)的沖洗頭對(duì)位良好，負(fù)壓與否符合規(guī)定規(guī)定。

每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點(diǎn)則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)含有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對(duì)濾光片的精密度進(jìn)行校驗(yàn)并保存統(tǒng)計(jì)。

1.2移液器：

一年最少應(yīng)當(dāng)標(biāo)定一次，發(fā)現(xiàn)異常狀況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行標(biāo)定。

標(biāo)定辦法涉及有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計(jì)數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。標(biāo)定多道移液器時(shí)，必須確保每一種加樣頭都能夠持續(xù)、精確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家闡明書(shū)規(guī)定的范疇內(nèi)。范例用蒸餾水稱量法標(biāo)定移液器：

在室溫為22℃的無(wú)風(fēng)的工作室中，在萬(wàn)分之一級(jí)別天平上放置一種小三角燒瓶，用待標(biāo)定的移液器吸取寄存過(guò)夜的蒸餾水加入燒瓶底部，稱重并計(jì)算蒸餾水重量，持續(xù)稱重10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標(biāo)定移液器的規(guī)格而不同（見(jiàn)下表），10次標(biāo)定稱量均在規(guī)定的重量范疇內(nèi)為合格，貼上合格標(biāo)簽，注明標(biāo)定日期，不合格移液器要請(qǐng)生產(chǎn)廠家進(jìn)行校準(zhǔn)。填寫(xiě)和保存較準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)。稱重法標(biāo)定移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量規(guī)定重量范疇0.5–10μl2μl1.75-2.25mg5–40μl10μl9.8-10.2mg40–200μl70μl69.4-70.6mg200–1000μl300μl298.0-302.0mg1–5mlμl1990.0-.0mg2–10ml3500μl3485.0-3515.0mg3、冰箱和孵育箱：

定時(shí)檢查溫度并作好統(tǒng)計(jì)，必須每天檢查和統(tǒng)計(jì)低溫及超低溫冰箱的溫度。

4、定時(shí)檢查其它儀器設(shè)備。成果的統(tǒng)計(jì)、解釋與報(bào)告1.HIV抗體篩查

1.1篩查實(shí)驗(yàn)呈陰性反映出具HIV抗體陰性報(bào)告。

1.2篩查實(shí)驗(yàn)呈陽(yáng)性反映，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告（附表1），不能出陽(yáng)性報(bào)告。同時(shí)應(yīng)盡快進(jìn)行下列解決：

1.2.1填寫(xiě)HIV抗體復(fù)查送檢單（附表2），經(jīng)一名檢測(cè)操作人員和一名含有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。

1.2.2盡量重新采集受檢者的血樣。

1.2.3將二份血樣（或僅原血樣）連同HIV抗體復(fù)查送檢單一并送本地艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

1.2.4篩查中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡快用兩種試劑進(jìn)行復(fù)測(cè)，如成果均陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)，則應(yīng)將送檢標(biāo)本和HIV抗體復(fù)查送檢單一并送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。如復(fù)檢成果均為陰性，在送檢單上蓋上“HIV抗體陰性（一）”字樣圖章，并及時(shí)將成果反饋送檢單位，不必再送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。

1.2.5保密程序要有專人負(fù)責(zé)妥善保存多個(gè)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)、感染者檔案，不得私自修改和銷毀；嚴(yán)格恪守保密制度，未經(jīng)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)許可，不得向無(wú)關(guān)人員或單位提供任何狀況。檢測(cè)的陽(yáng)性成果不是最后成果，應(yīng)及時(shí)做進(jìn)一步確認(rèn)，初篩實(shí)驗(yàn)室不能出具HIV抗體陽(yáng)性的成果報(bào)告，更不能告知受檢者本人。實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒1.帶入和帶出實(shí)驗(yàn)室的物品

1.1對(duì)全部帶入實(shí)驗(yàn)室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測(cè)試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其它適宜的裝置內(nèi)打開(kāi)。

1.2將HIV測(cè)試樣品轉(zhuǎn)送其它實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)避免對(duì)人員和環(huán)境的污染。護(hù)送樣品的人應(yīng)明確接受地點(diǎn)和接受人，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時(shí)確認(rèn)樣品已送達(dá)指定的實(shí)驗(yàn)室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善解決。

1.3污染或可能造成污染的材料在帶出實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)進(jìn)行消毒。

1.4用于國(guó)際空運(yùn)的樣品要按照國(guó)際空運(yùn)協(xié)會(huì)（IATA）的規(guī)則進(jìn)行包裝和標(biāo)記，并提交對(duì)應(yīng)的資料。

2.減少利器的使用

2.1盡量避免在實(shí)驗(yàn)室使用針頭、刀片等利器，.如果必須使用，在解決或清洗時(shí)應(yīng)采用方法避免刺傷或劃傷，并應(yīng)對(duì)用過(guò)的物品進(jìn)行消毒解決。

2.2最佳不使用玻璃制品。

2.3盡量使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以減少直接接觸血液和刺傷的危險(xiǎn)性。應(yīng)將用過(guò)的針頭直接放入結(jié)實(shí)的容器內(nèi)，消毒后廢棄。3.實(shí)驗(yàn)室慣用物品的消毒辦法：

3.1廢棄物缸：10%（v/v）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。

3.2生物安全柜工作臺(tái)面和儀器表面：70%乙醇。

3.3溢出物：10%次氯酸鈉（w/v）。

3.4生物安全柜和實(shí)驗(yàn)室：甲醛蒸氣熏蒸。生物安全柜：25ml福爾馬林（40%甲醛，w/v）和等量水混合后放在一種蒸發(fā)皿中使其在密封的生物安全柜中蒸發(fā)，保持最少6小時(shí)，最佳過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)室：福爾馬林和水加熱沸騰，其體積根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的大小而定。

3.5污染的臺(tái)面和器具：40%甲醛水溶液，也能夠用過(guò)氧化氫或過(guò)氧乙酸。艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)1.建立安全制度1.1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、建筑和設(shè)施的安全性應(yīng)通過(guò)專家的評(píng)審。

1.2建立安全原則操作程序，該程序應(yīng)合用于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件，并與實(shí)驗(yàn)室其它規(guī)章制度一致。

1.3無(wú)論與否發(fā)生意外事故，每年都要對(duì)安全原則操作程序及其實(shí)施狀況進(jìn)行檢查。

1.4制訂意外事故解決預(yù)案。.建立意外事故的登記和報(bào)告制度。

1.5實(shí)驗(yàn)室主任要按照《艾滋病職業(yè)暴露安全藥品儲(chǔ)藏庫(kù)和儲(chǔ)藏點(diǎn)的實(shí)施方案（試行）》（見(jiàn)附錄1）的規(guī)定，對(duì)突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進(jìn)行調(diào)查、解決和報(bào)告。2.人員管理

2.1實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)理解全部工作人員。在安排工作區(qū)域時(shí)，要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境做安全檢查。

2.2新調(diào)入人員、外來(lái)合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)室主任的同意。非實(shí)驗(yàn)室人員和非實(shí)驗(yàn)室物品不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2.3嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室工作人員年度采血檢測(cè)HIV抗體和備案制度，工作人員血清應(yīng)長(zhǎng)久保存。

3.培訓(xùn)

3.1全部工作人員必須通過(guò)HIV檢測(cè)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室安全培訓(xùn)，涉及上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受實(shí)驗(yàn)室管理人員的監(jiān)督。實(shí)驗(yàn)室的安全負(fù)責(zé)人要對(duì)工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，全部工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和別人的安全。

3.2必須告知新上崗人員實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)，進(jìn)行安全教育，直至有能力后方可單獨(dú)工作。4.個(gè)人保健

4.1高原則的個(gè)人保健對(duì)于減少感染的危險(xiǎn)性很重要。皮膚受損、患病都會(huì)增加感染的危險(xiǎn)。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。

4.2進(jìn)實(shí)驗(yàn)室前要摘除首飾，修剪長(zhǎng)的帶刺的指甲，以免刺破手套。

4.3進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險(xiǎn)性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。

4.4離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前必須脫去隔離衣并洗手。

4.5嚴(yán)禁在艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。5.實(shí)驗(yàn)室事故解決5.1皮膚針刺傷或切割傷：立刻用肥皂和大量流水沖洗，盡量擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。

5.2皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適宜的消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。

5.3粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。

5.4衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒解決。

5.5污染物潑濺：發(fā)生小范疇污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立刻進(jìn)行消毒解決。發(fā)生大范疇污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立刻告知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人達(dá)成事故現(xiàn)場(chǎng)查清狀況，擬定消毒的程序。

6.事故登記（附表5）：

6.1事故發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)及具體通過(guò)。

6.2暴露方式；受傷部位、傷口深淺、暴露程度；污染物種類（培養(yǎng)液、血液或其它體液）以及其中含有HIV的狀況。

6.3解決辦法和通過(guò)，涉及專家或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)和解決的狀況。

6.4與否采用暴露后藥品防止，如