HIK1083和MUC6蛋白在宮頸微偏腺癌中的表達及意義

HIK1083、MUC6蛋白在宮頸微偏腺癌中的表達及意義摘要目的：檢測宮頸微偏腺癌組織中HIK1083、MUC6蛋白的表達狀況，探討其表達狀況及臨床病理意義，為臨床病理診斷提供依據(jù)。方法：對30例正常宮頸黏膜組織和30例宮頸微偏腺癌組織進行免疫組化染色(SP法)，檢測胃免疫表型標記HIK1083、MUC６在兩組的表達水平，分析其臨床病理意義。結(jié)果：癌組織中HIK1083和MUC６的表達率均明顯高于正常宮頸黏膜組織（差異具有顯著統(tǒng)計學意義）。HIK1083、MUC６在宮頸微偏腺癌的陽性表達率分別為90％（27/30）、93.3%（28/30），在正常宮頸黏膜組織的陽性表達率分別為10%（3/30）及16.7%（4/30）。結(jié)論：宮頸微偏腺癌與胃表型標記存在密切關(guān)系，故檢測HIK1083、MUC６表達對宮頸微偏腺癌的早期診斷具有非常重要參考價值。關(guān)鍵詞HIK1083;MUC6;宮頸微偏腺癌AbstractObjective:TodetecttheexpressionofHIK1083andMUC6proteinsinminimaldeviationadenocarcinomaofcervixandtoexploreitsexpressionandclinicopathologicalsignificance,andtoprovideevidenceforclinicalpathologicaldiagnosis.Methods:Immunohistochemicalstaining(SPmethod)wasperformedon30normalcervicalmucosatissuesand30minimaldeviationadenocarcinomatissuesofcervix.TheexpressionlevelsofgastricimmunophenotypemarkersHIK1083andMUC6weredetectedinthetwogroups,andtheclinicopathologicalsignificancewasanalyzed.Results:TheexpressionratesofHIK1083andMUC6incancertissuesweresignificantlyhigherthanthoseinnormalcervicalmucosa(thedifferencewasstatisticallysignificant).ThepositiveexpressionratesofHIK1083andMUC6inminimaldeviationadenocarcinomaofcervixwererespectively90%(27/30)and93.3%(28/30).Thepositiveexpressionratesofnormalcervicalmucosawererespectively10%(3/30)and16.7%(4/30).Conclusion:Thereisacloserelationshipbetweenminimaldeviationadenocarcinomaofcervixandgastricphenotypemarkers.Therefore,thedetectionofHIK1083andMUC6expressionhasimportantreferencevalueforearlydiagnosisofminimaldeviationadenocarcinomaofcervix.KeywordsHIK1083;MUC6;Minimaldeviationadenocarcinomaofcervix宮頸微偏腺癌（minimaldeviationadenocarcinomaofcervix，MDA），發(fā)病率低，極少見，腫瘤細胞分化好，無惡性細胞學特征，液基細胞學（TCT）和HPV檢測幾乎無法做出診斷，容易漏診。早期由于缺乏明顯的臨床及病理學特征，確診時多已處于晚期，故預(yù)后差【1】。HIK1083，是一種新近研制出來的新單克隆抗體，能識別胃表面粘液膠層中Ⅲ級粘蛋白中的一種特異性糖殘基（α-GluNAc殘基）。黏蛋白（Mucin6，MUC6）是由上皮細胞分泌的一類高分子量的蛋白，主要表達于胃體、胃竇的基底部腺細胞。本研究旨在探討HIK1083及MUC6在宮頸微偏腺癌中的表達與意義，以期待為宮頸微偏腺癌的早期診斷提供可靠的依據(jù)，從而為患者帶來更好的預(yù)后價值。1材料和方法1.1標本來源及分組MDA組：選取嘉興市婦幼保健院病理科自2006年1月至2018年12月術(shù)后經(jīng)病理證實為宮頸微偏腺癌標本30例。年齡42～69歲，平均56歲。所有資料患者術(shù)前均未經(jīng)放療和化療。正常宮頸黏膜組：選取我院同時間段因子宮肌瘤或腺肌病手術(shù)切除全子宮標本30例。年齡39～73歲，平均56歲。所有的病理標本，均經(jīng)兩位以上資深病理專家共同確診，部分病例經(jīng)過國內(nèi)權(quán)威婦產(chǎn)病理醫(yī)師會診。1.2主要試劑及免疫組化方法HIK1083抗體（鼠源，IgM型，購自KantoChemical公司）、MUC6單克隆抗體（購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），二抗，DAB顯色劑（購自福州邁新生物有限公司）。石蠟標本切成4mm切片，一抗?jié)舛葹?:20，以SP法行免疫組織化學染色，二抗工作濃度嚴格按照SP試劑盒說明，抗原修復(fù)采用高壓熱修復(fù)法。每次實驗均設(shè)陽性對照和陰性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。1.3免疫組化結(jié)果判斷免疫組化結(jié)果由兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師獨立觀察，觀察指標分兩項。具體如下：顯微鏡200和400倍放大下分別隨機選取5個視野，根據(jù)組織細胞的染色強度和陽性細胞數(shù)進行綜合評分。①染色強度評分：無染色，陰性，得0分；淺棕色，弱陽性，得1分；棕色無背景著色或深棕色伴有背景著色，中等陽性，得2分；深棕色不伴背景著色，強陽性，得3分；②陽性染色細胞數(shù)評分：無陽性染色細胞，得0分；陽性染色細胞數(shù)≤25％，得1分；25％<陽性染色細胞數(shù)≤50％，得2分；陽性染色細胞數(shù)>50％，得3分。兩者相乘即最終評分：0分，為陰性(記0分)；1～2分，為弱陽性(記1分)；3～4分，為中等陽性(記2分)；6～9分，為強陽性(記為3分)。最終結(jié)果：記0～1分判定陰性表達：記2～3分判定陽性表達。1.4統(tǒng)計學分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示具有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果HIK1083及MUC6陽性染色為棕黃或棕褐色顆粒，定位于腫瘤細胞的胞漿內(nèi)，同時在HIK1083有不同程度的核表達，具體表達情況見（圖2、3）。在30例宮頸微偏腺癌及正常宮頸黏膜患者中，HIK1083表達陽性率為90%及10%；MUC6表達陽性率為93.3%及16.7%。通過統(tǒng)計學分析，HIK1083、MUC6在宮頸微偏腺癌組中的表達均明顯高于正常宮頸黏膜組，差異存在顯著統(tǒng)計學意義（均P＜0.001），見表1。表1，HIK1083及MUC6在不同臨床分組中表達檢測指標陽性表達率（%）χ2p宮頸微偏腺癌組正常宮頸黏膜組HIK108390（27/30）10（3/30）38.4＜0.001MUC693.3（28/30）16.7（4/30）38.571＜0.001圖1圖2圖3圖4圖1子宮頸微偏腺癌，高分化腺癌向中低分化胃型腺癌轉(zhuǎn)變HE高倍放大圖2HIK1083免疫組織化學染色在子宮頸微偏腺癌呈陽性SP法高倍放大圖3MUC6免疫組織化學染色在子宮頸微偏腺癌呈彌漫陽性SP法高倍放大圖4MUC6在高分化腺癌向中低分化胃型腺癌轉(zhuǎn)變過程陽性表達逐漸減弱甚至缺失高倍放大3討論宮頸微偏腺癌，又稱為惡性腺瘤，是發(fā)生于子宮頸的一種極高度分化的腺癌，與HPV感染無關(guān)【2】，早期診斷十分困難，由于誤診率和漏診率高而使其越來越受到重視，若能早期確診，對改善患者的預(yù)后有非常重要的價值【3】。微偏腺癌的確診主要依靠組織形態(tài)學，鑒別診斷方面常用的免疫標記包括P16、P53、Ki-67、CEA等，多年的應(yīng)用發(fā)現(xiàn)這些免疫標記作用微乎其微，而單單依靠形態(tài)學診斷對于基層醫(yī)院或者缺乏足夠經(jīng)驗的病理醫(yī)師而言，存在較大的漏診隱患。國內(nèi)外學者在探索能應(yīng)用于微偏腺癌斷診的可靠免疫標記物方面從未停下腳步，直到最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，宮頸微偏腺癌的細胞形態(tài)、免疫表型與胃黏膜相似【4】，2014年WHO將其歸類到高分化的粘液腺癌（胃型）,由于曲妥單抗對HER2陽性的胃癌有效，使得對微偏腺癌的認識有了重大的突破，為其提供了廣闊的研究前景。國外研究發(fā)現(xiàn)HIK1083和MUC6在宮頸微偏腺癌中具有異常表達【5、6】，但在國內(nèi)罕見研究報道。我們采用最簡單明確的診斷分組，嘗試性的采用免疫組化的方法來對照觀察確診的宮頸微偏腺癌與正常宮頸黏膜的HIK1083和MUC6表達情況，以期望為宮頸微偏腺癌的早期診斷尋找到可靠的免疫標記物，為改善患者的預(yù)后提供幫助。我們通過對30例宮頸微偏腺癌標本與30例正常宮頸黏膜標本中的HIK1083、MUC6表達情況研究發(fā)現(xiàn)，HIK1083在兩組的陽性表達率分別為90%、10%，有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.0001），MUC6在兩組的陽性表達率分別為93.3%、16.7%，有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.0001）。這一研究表明在宮頸粘液上皮組織轉(zhuǎn)變?yōu)槲⑵侔┻^程中，出現(xiàn)了胃型粘液上皮的分化，從而表達了HIK1083、MUC6，可作為早期篩查診斷宮頸微偏腺癌的特異性標志物。在研究的過程中，我們還發(fā)現(xiàn)，宮頸微偏腺癌高分化區(qū)域的HIK1083、MUC6陽性更強，中低分化區(qū)域陽性較弱，甚至陰性（圖4），這與國內(nèi)劉海燕等【7】的研究結(jié)果相似：即腫瘤分化程度高，HIK1083、MUC6表達越高；腫瘤分化程度低，表達低甚至缺表達。其他學者研究發(fā)現(xiàn)，微偏腺癌可能經(jīng)歷了從正常的宮頸黏膜轉(zhuǎn)向分葉狀宮頸腺體增生（被認為是一種原位的癌前病變），再進一步轉(zhuǎn)化為癌（高分化），進一步則進展為分化較差的胃型腺癌（圖1）【8】。在這個過程中胃粘液蛋白的表達只是一個階段性的，可能和臨床表現(xiàn)粘液樣排出物有密切的關(guān)聯(lián)，這或許可以解釋我們的上述觀點。對于分葉狀宮頸腺體增生這一診斷，其臨床表現(xiàn)為宮頸管息肉樣腫塊，其鏡下特征為宮頸腺體呈小葉狀增生，細胞無異型性，無明顯浸潤，其被認為是幽門腺化生，一種潛在性的癌前病變，由于診斷的標準較難把握，故目前較少應(yīng)用，也不列于此次研究的臨床分組中。宮頸微偏腺癌雖被歸為粘液性腺癌（胃型），但較多研究者發(fā)現(xiàn)這種病變可能是一種系統(tǒng)性疾病，而非獨立的病變：其可以累及生殖道內(nèi)外多個部位，如伴發(fā)胃癌【8】、卵巢粘液性腫瘤【9】等，也與Peutz-Jeghers（P-J）綜合征【10】有關(guān)聯(lián)，并發(fā)現(xiàn)其具有LKB1/STK11基因的胚系突變。宮頸微偏腺癌是否具有特定的分子基因改變，還有待進一步的研究證實。參考文獻：【1】NetoN,CunhaTM.Dohereditarysyndrome-relatedgynecologiccancershaveanyspecificfeatures?[J].InsightsImaging,2015;6(5):545-552.【2】LinCQ,CuiJF,ZhangX,etal.HumanPapillomavirusGenotypingtoPredicttheRiskofCervicalPrecancerousLesionsorCancerinWomenwithMinorAbnormalCytologyinChina[J].Actacytological,2015;59(5):405-411.【3】MinHeeLee,EunSooKim,MinChulChoi,etal.Minimaldeviationadenocarcinima(adenomamalignum)oftheuterinecervix:clinicopathologicalanalysiaof17cases[J].QbstetGynecolSci,2018;61(5)：590-597.【4】KazuhiroY,KeikoI,MichihikoT,etal.Gastricglandmucin-specificO-glycanexpressiondecreasesastumorcellsprogressfromlobularendocervicalglandhyperplasiatocervicalmucinouscarcinoma,gastrictype[J].VirchowsArchiv,2018.【5】AyanoN,KenY,SachikoM,etal.Mucinousadenocarcinoma,gastrictypeoftheuterinecervix:clinica