納米材料遺傳毒性試驗選擇指南草案

121納米材料遺傳毒性試驗選擇指南(草案)納米材料遺傳毒性試驗選擇指南(草案)納米材料獨特的物理化學(xué)性質(zhì)及其與生物體相互作用特性為其在食品加工、抗菌產(chǎn)品生產(chǎn)、藥物載體開發(fā)、腫瘤診療、體內(nèi)示蹤等領(lǐng)域的應(yīng)用供給了廣泛的前景。型納米材料的誕生為人類帶來機遇的同時也帶來了挑戰(zhàn)。大量納米材料的涌現(xiàn)，極大程度上增加了人體與納米材料接觸的時機，納米材料的安全性評價成為關(guān)注的熱點。如何合理評價納米材料對人體的潛在毒性，特別是慢性或者長期毒性，推想其潛在毒性風(fēng)險是目前全科學(xué)界及各相關(guān)監(jiān)管部門亟需解決的問題。其在食品加工、抗菌產(chǎn)品生產(chǎn)、藥物載體開發(fā)、腫瘤診療、體內(nèi)示蹤等領(lǐng)域的應(yīng)用供給了廣泛的前景。型納米材料的誕生為人類帶來機遇的同時也帶來了挑戰(zhàn)。大量納米材料的涌現(xiàn)，極大程度上增加了人體與納米材料接觸的時機，納米材料的安全性評價成為關(guān)注的熱點。如何合理評價納米材料對人體的潛在毒性，特別是慢性或者長期毒性，推想其潛在毒性風(fēng)險是目前全科學(xué)界及各相關(guān)監(jiān)管部門亟需解決的問題。國際標(biāo)〔ISO/TS80004-國際標(biāo)〔ISO/TS80004-2023[1] 對納米?！瞖的定義為：微小的納米物體〔1n至100nm，全部外部尺寸在納米級，其中納米物體最長和最短軸的長度沒有顯著差〔通常超過三倍納米粒子的尺寸效應(yīng)和外表活性高等特點使它極易透過細胞膜，可在外表活性和蓄積性的共同作用下，對細胞遺傳物質(zhì)產(chǎn)生直接或間接的相互作用。尤其是攜帶金屬離子的納米粒子進入體內(nèi)后有可能通過氧化應(yīng)激等作用機制誘發(fā)染色體或DNA斷裂[2-5]納米材料進入人體后可能在臟器蓄積并長期存在。納米材料的遺傳毒性，現(xiàn)已進展成一個特地的亞分支爭論領(lǐng)域—納米遺傳毒理學(xué)學(xué)[6-7]。對納米材料的潛在致癌和致畸作用評估，是對納米材料對人體安全性評價中極為重要的一環(huán)。人體安全性評價中極為重要的一環(huán)。納米材料與生物體作用方面存在確定特別性，與大多數(shù)化學(xué)品和環(huán)境誘變劑有所差異，導(dǎo)致現(xiàn)行常規(guī)使用的遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)化評價組合可能無法有效而牢靠地進展評價。美國FDA醫(yī)療器械〔CenterforDevicesandRadiologicalHealth,納米材料與生物體作用方面存在確定特別性，與大多數(shù)化學(xué)品和環(huán)境誘變劑有所差異，導(dǎo)致現(xiàn)行常規(guī)使用的遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)化評價組合可能無法有效而牢靠地進展評價。美國FDA醫(yī)療器械〔CenterforDevicesandRadiologicalHealth,FDA〕在2023年9月指出，有必要對標(biāo)準(zhǔn)遺傳毒性試驗方法進展評價，并分析傳統(tǒng)方法是否適用于納米材料的毒性評價[8]。經(jīng)合組織〔TheOrganizationforEconomicCooperationandDevelopment，OECD〕納米材料產(chǎn)品工作組〔WorkingPartyonManufacturedNanomaterials，WPMN〕20231118-19日在加拿大渥太華召開納米材料產(chǎn)品遺傳毒性專題研討會，就是否需要在現(xiàn)有OECD遺傳毒性試驗指導(dǎo)原則范疇內(nèi)對納米材料遺傳毒性測試方法進展特別調(diào)整，以及/或需要制定的試驗指導(dǎo)原則或指導(dǎo)性文件進展?fàn)幷?。由于?dāng)前缺乏數(shù)據(jù)支持，與會專家建議連續(xù)對納米材料遺傳毒性相關(guān)爭論數(shù)據(jù)進展深入挖掘，以確定是否需要在可能的范圍內(nèi)對遺傳毒性試驗指導(dǎo)原則進展相應(yīng)的調(diào)整。會議期間專家就納米材料遺傳毒性評價中的共性問題達成七項共識并公布《納米材料產(chǎn)品遺傳毒性：OECD產(chǎn)品安全性系列文件N0.43[9]。本指南參考上述文件及OECD相關(guān)遺傳毒性指導(dǎo)原則制定，以期為納米材料的遺傳毒性評價供給參考。一、適用范圍一、適用范圍本指南介紹了納米材料體內(nèi)及體外遺傳毒性試驗選擇的根本本標(biāo)準(zhǔn)適用于納米材料及含納米材料產(chǎn)品的潛在遺傳毒性評價。二、術(shù)語和定義遺傳毒性試驗(genotoxicity本指南介紹了納米材料體內(nèi)及體外遺傳毒性試驗選擇的根本本標(biāo)準(zhǔn)適用于納米材料及含納米材料產(chǎn)品的潛在遺傳毒性評價。二、術(shù)語和定義遺傳毒性試驗(genotoxicitytest細胞、細菌、酵母或真菌等來檢測受試物誘導(dǎo)的基因突變、染色DNA[GB/T16886.3-2023,3.3][10](nanomaterial)：材料的根本構(gòu)造單元至少有一維處(nanomaterial)：材料的根本構(gòu)造單元至少有一維處于納米尺度范圍(一般在1~100nm)，并由此具有某些特性的材料。[《材料科學(xué)技術(shù)名詞》第一版[11]納米粒子(nanoparticle)：微小的納米物體，全部外部尺寸在納米級，其中納米物體最長和最短軸的長度沒有顯著差異。假設(shè)納米粒子(nanoparticle)：微小的納米物體，全部外部尺寸在納米級，其中納米物體最長和最短軸的長度沒有顯著差異。假設(shè)〔通常超過三倍[ISO/TS80004-2：2023，4.4][1]受試物(test受試物(testsample)：要經(jīng)過生物或化學(xué)測試或評估的材料。[GB/T16886.5-2023,3.3][12][ISO/TS80004-2：2023，3.4][1]沉降沉降(sedimentation)：由于與連續(xù)相相比分散顆粒的密度較高，分散相產(chǎn)生的沉降〔分別分散相產(chǎn)生的沉降〔分別。[ISO/TR13097：2023，2.13，經(jīng)修改][13]三、遺傳毒性試驗〔一〕三、遺傳毒性試驗〔一〕遺傳毒性試驗是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容，可用于評價體細胞誘變劑、生殖細胞誘變劑和潛在致癌物的潛在遺傳毒性。其目的是通過一系列試驗推想受試物是否有遺傳毒性，從而對受試物的致癌性進展推想，降低人群的危害風(fēng)險。納米材料的遺傳毒性試驗是為了評價人體接觸納米材料的潛在遺傳毒性風(fēng)險。遺依據(jù)檢測方法針對與腫瘤相關(guān)的遺傳終點，可大致分為三大類，即基因突變、染色體損傷和遺傳毒性試驗是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容，可用于評價體細胞誘變劑、生殖細胞誘變劑和潛在致癌物的潛在遺傳毒性。其目的是通過一系列試驗推想受試物是否有遺傳毒性，從而對受試物的致癌性進展推想，降低人群的危害風(fēng)險。納米材料的遺傳毒性試驗是為了評價人體接觸納米材料的潛在遺傳毒性風(fēng)險。遺依據(jù)檢測方法針對與腫瘤相關(guān)的遺傳終點，可大致分為三大類，即基因突變、染色體損傷和DNA斷裂。目前沒有任何單一的試驗方法可同時涵蓋全部遺傳終點。為全面考察受試物的潛在遺傳毒性風(fēng)險，通常需開展一系列機制上相互補充的試驗，即標(biāo)準(zhǔn)化試驗組合，來進展綜合性評價[10,14]。目前沒有任何單一的試驗方法可同時涵蓋全部遺傳終點。為全面考察受試物的潛在遺傳毒性風(fēng)險，通常需開展一系列機制上相互補充的試驗，即標(biāo)準(zhǔn)化試驗組合，來進展綜合性評價[10,14]。參考ICHS2(R1)，標(biāo)準(zhǔn)試驗組合的選擇應(yīng)針對不同的遺傳終點，包括體外和體內(nèi)爭論[14]。納米材料的獨特理化性質(zhì)及與生物相互作用的特性，使其在生物醫(yī)藥、食品加工、扮裝品等與人體親熱接觸的領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，大量文獻爭論顯示某些納米材料存在遺傳毒納米材料的獨特理化性質(zhì)及與生物相互作用的特性，使其在生物醫(yī)藥、食品加工、扮裝品等與人體親熱接觸的領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，大量文獻爭論顯示某些納米材料存在遺傳毒性，且遺傳毒性可能與納米尺度有關(guān)。如，非納米尺度的二氧化性，且遺傳毒性可能與納米尺度有關(guān)。如，非納米尺度的二氧化鈦〔TiO〕和氧化銅〔CuO〕等遺傳毒性為陰性，而成為納米尺度2的納米材料時遺傳毒性試驗結(jié)果可為陽性。納米材料緩慢進入細胞又緩慢從釋放，以及體內(nèi)臟器分布、蓄積性和緩釋效應(yīng)這些特點，與一般化合物和小分子生物制品有所區(qū)分，現(xiàn)行經(jīng)典的遺傳毒性評價方法可能無法有效而牢靠地進展評價。比方，與嚙齒類動物腫瘤相關(guān)度最高的傳統(tǒng)Ames試驗無法有效檢出納米粒子的潛在致突變性，而體外微核試驗、染色體畸變試驗及彗星試驗卻通?？梢缘玫疥栃越Y(jié)果[15]。納米材料進入體內(nèi)后，長期存在并蓄積于某些臟器無法排出，是否會對細胞的增殖產(chǎn)生影響進而誘發(fā)腫瘤也是需要考慮的重要因素之一。爭論顯示大鼠靜脈注射納米粒鈦〔TiO〕和氧化銅〔CuO〕等遺傳毒性為陰性，而成為納米尺度2的納米材料時遺傳毒性試驗結(jié)果可為陽性。納米材料緩慢進入細胞又緩慢從釋放，以及體內(nèi)臟器分布、蓄積性和緩釋效應(yīng)這些特點，與一般化合物和小分子生物制品有所區(qū)分，現(xiàn)行經(jīng)典的遺傳毒性評價方法可能無法有效而牢靠地進展評價。比方，與嚙齒類動物腫瘤相關(guān)度最高的傳統(tǒng)Ames試驗無法有效檢出納米粒子的潛在致突變性，而體外微核試驗、染色體畸變試驗及彗星試驗卻通?？梢缘玫疥栃越Y(jié)果[15]。納米材料進入體內(nèi)后，長期存在并蓄積于某些臟器無法排出，是否會對細胞的增殖產(chǎn)生影響進而誘發(fā)腫瘤也是需要考慮的重要因素之一。爭論顯示大鼠靜脈注射納米粒子后血液中納米粒子短時間內(nèi)快速去除，大量納米粒子由循環(huán)系統(tǒng)進入組織[16]。而主要針對化學(xué)藥物設(shè)計的體內(nèi)遺傳毒性爭論通常使用外周血作為監(jiān)測窗，采樣時間較短，簡潔對納米粒子的遺傳毒性進展誤判。在開展體內(nèi)毒性爭論時，需要結(jié)合其體內(nèi)代謝歐洲的NANOGENOTOX聯(lián)合行動就16種代表性納米材料〔包括5種納米二氧化鈦，4種合成無定形二氧化硅，6種多壁碳納米管和1種氧化鋅開展試驗爭論，OECD也對文獻進展了大量數(shù)據(jù)回憶工作并于2023年1月公布了關(guān)于納米材料遺傳毒性試驗的建議[9指南主要依據(jù)上述內(nèi)容制定。當(dāng)含納米材料的受試物需要進展遺傳毒性評價時，考慮到動當(dāng)含納米材料的受試物需要進展遺傳毒性評價時，考慮到動物試驗3R原則[替代(replacement)、削減(reduction)和優(yōu)化物試驗3R原則[替代(replacement)、削減(reduction)和優(yōu)化(refinement)]，首先選擇體外遺傳毒性試驗。納米材料的毒性特點主要表現(xiàn)為其體內(nèi)吸取、分布、代謝和排泄過程的特別性，體內(nèi)試驗?zāi)軌蚩紤]到上述影響遺傳毒性的因素，針對納米材料的體內(nèi)分布和蓄積特點開展的靶器官遺傳毒性爭論具有重要意義。體內(nèi)爭論通常在體外爭論根底上開展，并強調(diào)靶器官相關(guān)毒性爭論。目前認(rèn)為其可能的遺傳毒作用機制主要包括兩方面[17]，一是通過穿越核孔復(fù)合體和在細胞有絲分裂或減數(shù)分裂過程中被核膜包裹三種途徑進入細胞核，直接作用于DNA導(dǎo)致遺傳物質(zhì)損傷。氧化應(yīng)激是納米材料誘導(dǎo)遺傳物質(zhì)損傷的最常見的作用機制之一[17]，開展遺傳毒性評價時可針對氧化應(yīng)激機制開放?！捕硺悠分苽浜捅碚鳌捕硺悠分苽浜捅碚?.納米材料的物理化學(xué)性質(zhì)是其毒性強弱和毒性特點的重要影響因素。一樣組分的材料成為納米材料時，其生物體內(nèi)代謝動力學(xué)、長期體內(nèi)分布及蓄積的特征可發(fā)生明顯轉(zhuǎn)變[18]1.納米材料的物理化學(xué)性質(zhì)是其毒性強弱和毒性特點的重要影響因素。一樣組分的材料成為納米材料時，其生物體內(nèi)代謝動力學(xué)、長期體內(nèi)分布及蓄積的特征可發(fā)生明顯轉(zhuǎn)變[18]，其毒性與其粒徑，外表修飾和分布親熱相關(guān)[19]。納米材料在理化性質(zhì)上的微弱差異可直接導(dǎo)致其安全窗和毒性靶器官的不同。因此安全性評價需強調(diào)納米材料的理化性質(zhì)鑒定。2.2.在開展毒性評價之前，需參考ISO/TR13014：2023、OECDENV/JM/MONO(2023)2、ISO/TC229等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，充分考察其物理化學(xué)性能和穩(wěn)定性理化學(xué)性能和穩(wěn)定性[20-22]。對于理化性質(zhì)和穩(wěn)定性不同的一樣納米材料，需要分別評價。假設(shè)擬評價受試物為醫(yī)用納米材料或者含納米材料產(chǎn)品，應(yīng)為可充分代表臨床試驗或上市后人擬用產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的樣品。3.受試物制備的總體原則是最大程度上模擬受試物與人體實際接觸的方式。分散介質(zhì)可影響聚攏體的大小，從而影響受試物的沉降、聚攏、細胞暴露、細胞毒性、劑量選擇和遺傳毒性試驗,需充分考慮其分散性,選擇適宜的介質(zhì)，確保分散均勻，削減團聚。含納米材料產(chǎn)品〔含納米材料的基質(zhì)類固體產(chǎn)品，如醫(yī)療器械，可參考GB/T16886.3米材料，需要分別評價。假設(shè)擬評價受試物為醫(yī)用納米材料或者含納米材料產(chǎn)品，應(yīng)為可充分代表臨床試驗或上市后人擬用產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的樣品。3.受試物制備的總體原則是最大程度上模擬受試物與人體實際接觸的方式。分散介質(zhì)可影響聚攏體的大小，從而影響受試物的沉降、聚攏、細胞暴露、細胞毒性、劑量選擇和遺傳毒性試驗,需充分考慮其分散性,選擇適宜的介質(zhì)，確保分散均勻，削減團聚。含納米材料產(chǎn)品〔含納米材料的基質(zhì)類固體產(chǎn)品，如醫(yī)療器械，可參考GB/T16886.3和GB/T16886.12選擇含納米材料產(chǎn)品的浸提液[10,23]。需依據(jù)納米材料的釋放特征選擇適宜的浸提介質(zhì)。在合理狀況下，含納米材料固體產(chǎn)品的外表積/〔以cm2/mL或mg/mL表示〕應(yīng)盡可能高。浸提液中的納米材料應(yīng)進展必要的表征，如顆粒物尺寸、分散性、外表電荷等。必要時測定浸提液中納米材料的濃度，以便對結(jié)果進展量-效關(guān)系的分析。應(yīng)選擇不易吸附納米材料GB/T16886.3〔樣品預(yù)備條款〕[10]。4.當(dāng)特別金屬納米材料可能會釋放金屬離子的狀況時，需考慮所釋放的金屬離子與分散介質(zhì)中離子的反響，可能會影響結(jié)果的推斷。如：納米銀會釋放帶正電荷的銀離子，在分散介質(zhì)，如氯化鈉〔NaCl〕中，當(dāng)銀離子的濃度足夠高時可與介質(zhì)中的氯離子形成氯化銀顆粒物。此時，應(yīng)實行相應(yīng)措施避開顆粒物形成，子形成氯化銀顆粒物。此時，應(yīng)實行相應(yīng)措施避開顆粒物形成，并充分評價非納米材料顆粒物對試驗體系和結(jié)果的影響。5.由于有些納米材料具有極強的吸附特性，特別是對蛋白成分的吸附。因此，在樣品制備時如承受含有機成分的生理介質(zhì)，并充分評價非納米材料顆粒物對試驗體系和結(jié)果的影響。5.由于有些納米材料具有極強的吸附特性，特別是對蛋白成分的吸附。因此，在樣品制備時如承受含有機成分的生理介質(zhì)，應(yīng)充分評價納米材料對介質(zhì)中有機成分的吸附，及其對試驗體系和試驗結(jié)果解釋的影響?！踩场踩?.1.體外遺傳毒性〔〔1〕體外遺傳毒性試驗納米材料評價的適用性見附錄A?！?〕傳統(tǒng)的Ames加之革蘭氏陰性菌的菌壁較厚等因素，可導(dǎo)致納米材料不易穿透〔2〕傳統(tǒng)的Ames加之革蘭氏陰性菌的菌壁較厚等因素，可導(dǎo)致納米材料不易穿透胞壁，與細菌接觸不充分。另外，有些納米材料具有確定的滅菌作用，如：納米銀等。因此，Ames試驗〔TG471〕[24]不是爭論納米材料遺傳毒性的推舉方法。爭論顯示與傳統(tǒng)的Ames試驗相比，Ames[25]。后者承受96孔板將納米二氧化鈦與菌液在酸化處理后的液態(tài)培育基中混合后共同培育，可有效提高陽性檢出率?！?〕體外納米材料遺傳毒性試驗可依據(jù)〔3〕體外納米材料遺傳毒性試驗可依據(jù)ICHS2(R1)細胞增殖和細胞毒性試驗結(jié)果，選擇最高受試物處理濃度[14]。某些狀況下可考慮增加濃度設(shè)置間隔，設(shè)置大于標(biāo)準(zhǔn)范圍〔10倍〕并在無細胞毒的狀況下開展試驗，以保證獲得較好的濃度-效應(yīng)關(guān)系?！病?〕為保證納米材料在體外試驗系統(tǒng)的生物和物理環(huán)境中的狀態(tài)與體內(nèi)應(yīng)用時的狀態(tài)的檢測結(jié)果有可比性，應(yīng)使用現(xiàn)有的方法對給藥處理開頭和給藥處理完畢的細胞培育基中納米材料的表征進展鑒定。狀態(tài)與體內(nèi)應(yīng)用時的狀態(tài)的檢測結(jié)果有可比性，應(yīng)使用現(xiàn)有的方法對給藥處理開頭和給藥處理完畢的細胞培育基中納米材料的表征進展鑒定。〔5〕〔5〕因此建議開展體外遺傳毒性試驗時同時對細胞攝取力氣進展分析。通常從直接遺傳毒性的角度分析，如哺乳動物對納米材料攝取能力有限，可提示為較低的內(nèi)在風(fēng)險。〔6〕納米材料進入細胞發(fā)揮作用的時間較久，建議體外哺乳〔6〕納米材料進入細胞發(fā)揮作用的時間較久，建議體外哺乳動物細胞試驗受試物處理時間至少為24遺傳物質(zhì)〔直接或間接〕充分地接觸?！?〕〔7〕胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗添加細胞松弛素B〔cytochalasinB,CytoB〕可干擾細胞骨架的形成，從而影響細胞對納米粒子的內(nèi)吞作用。cytoB的給藥方法可承受后處理或延遲cytoB的狀況下充分暴露?！?〔8〕p53功能完整的細胞系開展。2.2.體內(nèi)遺傳毒性〔〔1〕體內(nèi)遺傳毒性試驗納米材料評價的適用性見附錄B?！病?〕開展體內(nèi)遺傳毒性爭論前，需進展一些毒代動力學(xué)爭論以確定納米材料是否到達遺傳毒性非接觸部位靶組織。在缺乏相關(guān)數(shù)據(jù)的狀況下，如納米材料沒有到達靶組織，則相應(yīng)試驗方法不適用于檢測初級遺傳毒性。〔3〕體內(nèi)爭論中，當(dāng)前沒有足夠的數(shù)據(jù)支持某種給藥方式優(yōu)以確定納米材料是否到達遺傳毒性非接觸部位靶組織。在缺乏相關(guān)數(shù)據(jù)的狀況下，如納米材料沒有到達靶組織，則相應(yīng)試驗方法不適用于檢測初級遺傳毒性?！?〕體內(nèi)爭論中，當(dāng)前沒有足夠的數(shù)據(jù)支持某種給藥方式優(yōu)于另一種給藥方式。試驗給藥方式需依據(jù)人最常見的暴露途徑選擇。3.3.遺傳毒性試驗優(yōu)化組合的考慮〔1〕Ames試驗當(dāng)前認(rèn)為并不適用于檢測納米粒子，而改進的Ames波動試驗并〔1〕Ames試驗當(dāng)前認(rèn)為并不適用于檢測納米粒子，而改進的Ames波動試驗并未經(jīng)過大量驗證，同為檢測基因突變的Pig-a基因突變試驗作為興的檢測方法應(yīng)用上的數(shù)據(jù)缺乏。因此建議考慮選用體外小鼠淋巴瘤tk基因突變試驗〔MLA,OECDTG490[26]〕,作為納米材料潛在致突變力氣檢測方法?；诎衅鞴?組織細胞系的體外微核試驗(OECDTG487[27〔OECDTG礎(chǔ)之上，可開展改進的Ames波動試驗或體外Pig-a基因突變試驗?！?〕如上述體外試驗全部結(jié)果均為陰性，且依據(jù)受試物毒性〔2〕如上述體外試驗全部結(jié)果均為陰性，且依據(jù)受試物毒性作用機制分析不存在潛在致遺傳毒性的風(fēng)險，則推斷受試物遺傳毒性結(jié)果為陰性，無需進一步評價其遺傳毒性。〔〔3〕如在上述試驗中至少一項體外爭論結(jié)果為陽性，可進一步開展與檢出陽性結(jié)果的檢測終點全都的體內(nèi)試驗〔即致突變劑可通過Pig-a基因突變檢測、致斷裂劑可通過微核和一步開展與檢出陽性結(jié)果的檢測終點全都的體內(nèi)試驗〔即致突變劑可通過Pig-a基因突變檢測、致斷裂劑可通過微核和/或染色體畸變和或彗星試驗檢測，并針對靶器官〔組織〕進展?fàn)幷摗参镄罘e在肝臟為例，需開展肝臟微核和彗星試驗。〔4〕/〔4〕/組織充分暴露，則推斷受試物遺傳毒性結(jié)果為陰性。如與體外試驗中檢出陽性結(jié)果的檢測終點全都的體內(nèi)試驗結(jié)果亦為陽性，毒性與靶器官/組織暴露量有關(guān)，且排解試驗體系的干擾因素〔如飼養(yǎng)環(huán)境引起的微核率特別上升〕則考慮受試物存在遺傳毒性風(fēng)險[14]。A〔資料性附錄〕遺傳毒性終點遺傳毒性終點現(xiàn)有評價方法是否推舉用于檢測納米材料適用或不適用的理由參考文獻a.菌壁與哺乳動物細胞壁有差異，限制粒子攝取。細菌回復(fù)性突變〔Ames〕試驗否b.固態(tài)且?guī)Т罅控撾姾傻呐嘤龡l件限制細菌與納米粒子充分接觸。c.局部納米材料有抑菌性[15]。OECDTG471[24]基因突變體外哺乳動物基因突變試驗〔HPRTTK〕是多用于安全性評價，文獻數(shù)據(jù)較少。OECDTG476[29];OECDTG490[26]體外哺乳動物細胞基因突變試驗文獻數(shù)據(jù)缺乏。正在研發(fā)Kimotoetal.,2023[30]體外哺乳動物染色體畸變試驗是納米級顆粒物可沉積在細胞表承受熒光試劑〔如，吖啶橙〕染色效果可能優(yōu)于吉姆薩染色。OECDTG473[28]a.建議使用與體內(nèi)靶組織關(guān)聯(lián)度高的細胞系；損傷b.建議延長納米粒子與細胞胞微核試驗作用時間〔至24h〕，保證粒子充分暴露；是〔需作調(diào)整〕c.細胞松弛素B可干擾細胞骨OECDTG487[27]架形成，影響粒子內(nèi)吞，建議與給藥處理分別開展。d.添加血清可能影響細胞對及修復(fù)粒子的攝取力氣[15]。建議開展針對檢測與氧化損傷導(dǎo)致的DNA斷裂〔與8-羥基鳥嘌呤DusinskaandCollins,體外彗星試驗是DNA化酶〔FGP〕[31]。al.,2023[33]-H2AX試驗是Ismailetal.,2023[34]B〔資料性附錄〕體內(nèi)遺傳毒性試驗納米材料評價的適用性遺傳毒性遺傳毒性終點現(xiàn)有評價方法是否推舉用于檢測納米材料適用或不適用的理由參考文獻體內(nèi)Pig-a基因突變試驗文獻數(shù)據(jù)缺乏?；蛲蛔冋谘邪l(fā)Krügeretal.,2023[35];Pibergeretal.,2023[36]體內(nèi)哺乳動物紅是損傷細胞微核試驗哺乳動物骨髓染色體畸變試驗納米級顆粒物可沉積在細胞表面，對鏡檢細胞核構(gòu)造產(chǎn)生干〔〕染色效果可能優(yōu)于吉姆薩染色。同上OECDTG474[37]是OECDTG475[38]體內(nèi)彗星試驗是及修復(fù)建議開展針對檢測與氧化損傷呤有關(guān)〕的體內(nèi)彗星試驗(樣本糖基化酶〔FGP〕預(yù)處理)[31]。OECDTG489[39]-H2AX試驗 是 Ismailetal.,2023[34]體內(nèi)哺乳動物肝細胞非程序性DNA合成試驗有局限性O(shè)ECD486[40]參考文獻ISO/TS80004-2:2023Nanotechnologies--Vocabulary--Part2:Nano-objects[S].AsharaniPV,LowKMG,HandeMP,etal.Cytotoxicityandgenotoxicityofsilvernanoparticlesinhumancells[J].ArchivesofToxicology,2023,3(2):279.AhamedM,KarnsM,GoodsonM,etal.DNAdamageresponsetodifferentsurfacechemistryofsilvernanoparticlesinmammaliancells[J].Toxicology&AppliedPharmacology,2023,233(3):404-410.KarlssonHL,GustafssonJ,CronholmP,etal.Size-dependenttoxicityofmetaloxideparticles—Acomparisonbetweennano-andmicrometersize[J].ToxicologyLetters,2023,188(2):112-118.K?ncz?lM,EbelingS,GoldenbergE,etal.Cytotoxicityandgenotoxicityofsize-fractionatedironoxide(magnetite)inA549humanlungepithelialcells:roleofROS,JNK,andNF-κB[J].ChemicalResearchinToxicology,2023,24(9):1460-1475.DoakSH,DusinskaM.NanoGenotoxicology:presentandthefuture[J].Mutagenesis,2023,32(1):1-4.SinghN,ManshianB,JenkinsGJ,etal.NanoGenotoxicology:TheDNAdamagingpotentialofengineerednanomaterials[J].Biomater,2023,30(23-24):3891-3914.Kevin Lorick. CDRH Review of Medical Devices Containing Nanoscale Materials.“:////sites/default/files/lorick_nano_presentation_nni_presentation.pdf“s:////sites/default/files/lorick_nano_presentation_nni_presentation.pdf,2023.9.23/2023.8.23.OECDENV/JM/MONO(2023)34.SeriesontheSafetyofManufacturedNanomaterialsNo.43.GenotoxicityofManufacturedNanomaterials:ReportoftheOECDexpertmeeting.:///officialdocuments/publicdisplaydocumentpdf/?cote=env/jm/mono(2023)34&doclanguage=en,2023.12.3/2023.1.10.GB/T16886.3:2023,Biologicalevaluationofmedicaldevices—Part3:Testsforgenotoxicity,carcinogenicity,andreproductivetoxicity[S].材料科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會.材料科學(xué)技術(shù)名詞[M].科學(xué)出版社,2023.ISO10993-5:2023Biologicalevaluationofmedicaldevices--Part5:Testsforinvitrocytotoxicity[S].PDISO/TR13097:2023Guidelinesforthecharacterizationofdispersionstability[S].InternationalConferenceonHarmonization〔ICH．GuidanceongenotoxicitytestingandinterpretationforpharmaceuticalsintendedforhumanuseSR1〔Step4versio［EB/O］,2023.DoakSH,ManshianB,JenkinsGJ,etal.InvitrogenotoxicitytestingstrategyfornanomaterialsandtheadaptationofcurrentOECDguidelines[J].MutationResearch,2023,745(1–2):104-111.JongWHD,HagensWI,KrystekP,etal.Particlesize-dependentorgandistributionofgoldnanoparticlesafterintravenousadministration[J].Biomaterials,2023,29(12):1912-1919.MagdolenovaZ,CollinsA,KumarA,etal.Mechanismsofgenotoxicity.Areviewofinvitroandinvivostudieswithengineerednanoparticles.[J].Nanotoxicology,2023,8(3):233-278.DoakSH,ManshianB,JenkinsGJ,etal.InvitrogenotoxicitytestingstrategyfornanomaterialsandtheadaptationofcurrentOECDguidelines[J].MutationResearch,2023,745(1–2):104-111.GosensI,CasseeFR,ZanellaM,etal.Organburdenandpulmonarytoxicityofnano-sizedcopper(II)oxideparticlesaftershort-terminhalationexposure[J].Nanotoxicology,2023,10(8):1084-1095.ISO/TR13014:2023Nanotechnologies--Guidanceonphysico-chemicalcharacterizationofengineerednanoscalematerialsfortoxicologicassessment[S].OECDENV/JM/MONO(2023)2.SeriesontheSafetyofManufacturedNanomaterialsNo.63.Physical-chemicalparameters:measurementsandmethodsrelevantfortheregulationofnanomaterials.:///officialdocuments/publicdisplaydocumentpdf/?cote=env/jm/mono(2023)2&doclanguage=en,2023.1.21/2023.1.10ISO/TC229:2023Nanotechnologies[S].GB/T16886.12:2023Biologicalevaluationofmedicaldevices-Part12:Samplepreparationandreferencematerials[S].OECDGuidelinesfortheTestingofChemicalsTG471:BacterialReverseMutationTest［EB/OL］,1997．JominiS,LabilleJ,BaudaP,etal.ModificationsofthebacterialreversemutationtestrevealsmutagenicityofTiO(2)nanoparticlesandbyproductsfromasunscreenTiO(2)-basednanocomposite.[J].ToxicologyLetters,2023,215(1):54-61.OECDGuidelinesfortheTestingofChemicalsTG490:InVitroMammalianCellGeneMutationTestsUsingtheThymidineKinaseGene［EB/OL］,2023．OECDGuidelinesfortheTestingofChemicalsTG487:Invitromammaliancellmicronucleustest［EB/OL］,2023．OECDGuidelinesfortheTestingofChemicalsTG473:Invitromammalianchromosomalaberrationtest［EB/OL］,2023．OECDGuidelinesfortheTestingofChemicalsTG476:InVitroMammalianCellGeneMutationTestsusingtheHprtandxprtgenes［EB/OL］,1997KimotoT,HoribataK,MiuraD,etal.ThePIGRETassay,amethodformeasuringPig-agenemutationinreticulocytes,isreliableasashort-terminvivogenotoxicitytest:SummaryoftheMMS/JEMS-collaborativestudyacross16laboratoriesusing24chemicals.[J].MutatRes,2023,811:3-15.M?llerP,JensenDM,WilsRS，etal.Assessmentofevidencefornanosizedtitaniumdioxide-generatedDNAstrandbreaksandoxidativelydamagedDNAincellsandanimalmodels.Nanotoxicology.,2023,11(9-10):1237-1256.Du?inskáM,CollinsAR.DetectionofOxidizedPurinesandUV-InducedPhotoproductsinDN