二氯熒光素量子產(chǎn)率的測定

二氯熒光素量子產(chǎn)率的測定一、 實驗目的1、 了解熒光分析法及測量熒光物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率的基本原理。2、 掌握二氯熒光素量子產(chǎn)率的測量方法和相關影響因素。二、 方法原理熒光分析法在有機電致發(fā)光、生物醫(yī)藥、臨床診斷等領域得到廣泛應用。高性能熒光材料的制備已成為這些領域的研究熱點與前沿，而這些熒光材料的熒光量子產(chǎn)率的高低直接影響它們的性能優(yōu)劣。熒光量子產(chǎn)率（YF）即熒光物質(zhì)吸光后所發(fā)射的熒光的光子數(shù)與所吸收的激發(fā)光的光子數(shù)之比值。它的數(shù)值在通常情況下總是小于1。YF的數(shù)值越大則化合物的熒光越強，而無熒光的物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率卻等于或非常接近于零。熒光量子產(chǎn)率一般采用參比法測定。即在相同激發(fā)條件下，分別測定待測熒光試樣和已知量子產(chǎn)率的參比熒光標準物質(zhì)兩種稀溶液的積分熒光強度（即校正熒光光譜所包括的面積）以及對一相同激發(fā)波長的入射光（紫外-可見光）的吸光度，再將這些值分別代入特定公式進行計算，就可獲得待測熒光試樣的量子產(chǎn)J-ifAsWXFFYu、Ys—待測物質(zhì)和參比標準物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率；Fu、Fs—為待測物質(zhì)和參比物質(zhì)的積分熒光強度；Au、As—為待測物質(zhì)和參比物質(zhì)在該激發(fā)波長的入射光的吸光度（A=￡bc）。運用此公式時一般要求吸光度As、Au低于0.05。參比標準樣最好選擇其激發(fā)波長值相近的熒光物質(zhì)。有分析應用價值的熒光化合物的Yu一般常在0.1-1之間。三、 儀器和試劑1、 分子熒光光譜儀；紫外一可見分光光度計；2、 二氯熒光素（5.0pg?mL-1）待測試樣溶液（含1.0mol?L-1NaOH水溶液）；羅丹明B（5.0pg?mL-1）參比標準溶液（溶劑為無水乙醇）；3、 熒光比色皿一個，紫外石英比色皿一對；10mL具塞比色管、移液管。四、 實驗步驟1、 移取所需濃度的二氯熒光素與羅丹明B溶液，用相應溶劑稀釋至10.0mL（A505nm<0.05），在紫外一可見分光光度計上測定其吸收光譜曲線；分別測定它們在505nm處的吸光度。2、 移取上述相同的溶液于熒光比色皿中，在熒光儀上分別掃描其熒光激發(fā)光譜及發(fā)射光譜；分別測定它們以505nm為激發(fā)波長時的熒光發(fā)射光譜。五、 結(jié)果處理1、 計算二氯熒光素和標準物質(zhì)羅丹明B的熒光光譜的相對積分面積。2、 從相關資料查閱參比標準物質(zhì)羅丹明B在乙醇溶劑中的量子產(chǎn)率。3、 將所獲得的各相關數(shù)據(jù)代入熒光量子產(chǎn)率計算公式計算二氯熒光素溶液的量子產(chǎn)率數(shù)值。六、注意事項1、 如何測定某物質(zhì)的熒光激發(fā)光譜與發(fā)射光譜曲線？2、 測量某熒光物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率時，如何選擇熒光參比標準物質(zhì)，它的作用是什么？3、 吸光度的測定與測定熒光光譜的面積時的激發(fā)波長為什么要一致？4、 為什么要求待測物質(zhì)與熒光參［學術討論］量子點熒光量子產(chǎn)率的測定方法最近看了些文獻，發(fā)現(xiàn)一個問題，量子點的熒光量子產(chǎn)率(QY)的測定方法可為大不相同。大家普遍采用的還是參比法，即與有機熒光染料的QY比較求出量子點的QY。應該說不同發(fā)光波長的量子點所采用的參比完全不同，比如：發(fā)藍光的量子點應該用coumarin540做參比，綠-黃-橙色應該用R6G做參比，近紅外量子點(NIRQDs)大多用LD690染料做參比。但最近看到一些文章(比如：Nanotechnology18(2007)485611(7pp))，竟然用R6G來做NIRQDs的參比，結(jié)果QY達到了60%以上。雖然測定QY，表面上看是個小問題，但真的能測好，測準，恐怕還是個問題。而且，公說公有理，婆說婆有里，隨便一寫QY達到60以上，真是這樣的嗎？更何況這只是個數(shù)字，具體過程根本沒法在文章中寫出來。所以突然想到這兒，拿出來跟各位蟲子討論討論。作者：refnew不用看就知道中國人的文章，現(xiàn)在雜志那么多，沒必要參考這個雜志作者：無敵烽火輪其實與什么相比并不重要，重要的是比法有沒有偷換概念。簡單的說，r6g可以用來和任何東西比較，前提是要在488nm下激發(fā)才能達到95%，其他的染料也一樣，必須在特定波長下激發(fā)，如果波長不同的話很可能激發(fā)出的積分峰面積變化很大。另外一個不錯的方法就是用斜率比較法，這樣多點描述得更加可靠。當然最準確地還是用積分球來計算。作者：nanodaydream直接可以測試量子效率，用Fluoromax-4spectrofluorometer(HORIBAJobinYvonInc.)作者：bobhyQUOTE:Originallypostedby無敵烽火輪 at2009-01-0320:08:03:其實與什么相比并不重要，重要的是比法有沒有偷換概念。簡單的說，r6g可以用來和任何東西比較，前提是要在488nm下激發(fā)才能達到95%，其他的染料也一樣，必須在特定波長下激發(fā)，如果波長不同的話很可能激發(fā)出的積...“前提是要在488nm下激發(fā)才能達到95%”兄臺這個488nm