流感嗜血桿菌的實(shí)驗(yàn)活動生物危害評估報(bào)告

流感嗜血桿菌的生物危害評估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病嗜血桿菌是只有在含有血或血制品及其因子的營養(yǎng)條件下才能生長發(fā)育的一群細(xì)菌。目前發(fā)現(xiàn)的嗜血桿菌有16種，可致人類疾病的至少有8種，其中最具代表性的為Ｈｉ。根據(jù)莢膜成分的不同，Ｈｉ又分為ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ6種菌型，其中又以ｂ型流感嗜血桿菌（Ｈｉｂ）最容易引起侵襲性疾病。流感嗜血桿菌主要寄生于人的鼻、咽、眼及陰道黏膜中，常與正常菌群共生，人是唯一的傳染源和帶菌者，病人和鼻咽帶菌者為傳染源。健康人鼻咽部帶菌率可高達(dá)60～80％。帶菌可持續(xù)數(shù)日或數(shù)月。Ｈｉｂ多寄居在鼻咽部黏膜，通過空氣飛沫和密切接觸在人與人之間傳播，新生兒可通過母親的產(chǎn)道感染。流感嗜血桿菌只引起人類感染，對動物無致病性。同樣，寄居于禽類、豬、犬的嗜血桿菌也不感染人類。有研究表明，人群對流感嗜血桿菌普遍易感。新生兒由母體抗體被動免疫，3個(gè)月～3歲兒童的抗體水平最低，對該菌最易感，Ｈｉ在健康學(xué)齡前兒童的帶菌率為10.9％～37.9％，學(xué)齡兒童最高可達(dá)20.9％；Ｈｉｂ在學(xué)齡前兒童帶菌率為5.4％～6.9％。成人可為無癥狀帶菌者，其發(fā)病多有免疫缺陷。Ｈｉ帶菌率與季節(jié)有關(guān)，感染多散發(fā)，一年四季皆可發(fā)病，但多從秋季開始增加，冬季達(dá)高峰。Ｈｉｂ通過飛沫進(jìn)入人的呼吸道，侵入血液繁殖，可擴(kuò)散至人體多個(gè)器官，引起組織、器官的侵襲性感染。流感嗜血桿菌是幼兒腦膜炎,菌血癥,膿毒性關(guān)節(jié)炎,肺炎,氣管支氣管炎,中耳炎,結(jié)膜炎,鼻竇炎和急性會厭炎的主要病原菌，這些感染和心內(nèi)膜炎也可發(fā)生于成人但比較少見。國內(nèi)的臨床調(diào)查顯示，兒童社區(qū)獲得性肺炎中，Ｈｉ占29.0％。Ｈｉ所致的感染以呼吸道感染居多，其中肺炎多通過飛沫傳播。流感病毒或葡萄球菌感染的患者易并發(fā)Ｈｉ肺炎，起病較慢，常有痙攣性咳嗽，全身癥狀重，中毒癥狀明顯，白細(xì)胞明顯增高，有時(shí)伴淋巴細(xì)胞的相對或絕對升高。小嬰兒Ｈｉｂ肺炎常并發(fā)膿胸、腦膜炎及化膿性關(guān)節(jié)炎，易后遺支氣管擴(kuò)張癥。Ｈｉｂ腦膜炎在兒童化膿性腦膜炎中占28.9％～51.7％。在歐美國家，Ｈｉｂ是兒童未使用疫苗前化膿性腦膜炎中居首位的病原菌?；撔阅X膜炎較常見，但危害大，其發(fā)病率僅次于流腦。多數(shù)患者具有明顯的前驅(qū)癥狀，常見流涕、咳嗽等，經(jīng)數(shù)日或1～2周方出現(xiàn)腦膜刺激征，以冬春兩季多發(fā)。10％的兒童有單側(cè)或雙側(cè)性耳聾。其他并發(fā)癥如學(xué)習(xí)能力差、精神發(fā)育遲緩、顱神經(jīng)麻痹、癱瘓等通常為暫時(shí)性的，有望治愈。Ｈｉｂ感染常致會厭炎，表現(xiàn)為會厭部紅腫、吞咽不適，有時(shí)發(fā)生呼吸困難。在中國發(fā)病率較低，但病死率可高達(dá)7％～8％?；撔灾卸椎仍趪鴥?nèi)相對少見。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性流感嗜血桿菌（Hemophilusinfluenzae，Ｈｉ）簡稱流感桿菌，又名費(fèi)佛氏桿菌（Pfeiffer'sbacillus），為革蘭氏陰性短小桿菌，大小為0.8～1.5ｍｍ×0.3～0.4ｍｍ，兩端鈍圓。從病灶中新分離的菌株多呈球桿狀或雙球狀，有時(shí)可呈短鏈。在陳舊培養(yǎng)物中呈多形性，有長桿狀或絲狀體。本菌無動力、無芽孢，粘液型菌株有莢膜。Ｈｉｂ為需氧菌，培養(yǎng)較困難，由于該菌氧化還原酶系統(tǒng)不完善，生長時(shí)需要“Ｘ”和“Ｖ”兩種生長輔助因子?！埃亍币蜃哟嬖谟谘t蛋白中，可耐高溫?！埃帧币蜃哟嬖谘褐?，耐熱性較差。在血液中“Ｖ”因子處于被抑制狀態(tài)，加熱75～100℃，5～10min，抑制物被破壞后才被18～24小時(shí)，菌落微小，無色，透明似露珠，48小時(shí)后形成灰白色較大的菌落、圓形、透明。如以Ｈｉｂ和金黃色葡萄球菌在同一巧克力瓊脂平皿上培養(yǎng)，由于葡萄球菌能合成較多的“Ｖ”因子，并彌散到培養(yǎng)基里，可促進(jìn)Ｈｉｂ的生長，故在葡萄球菌菌落周圍生長的Ｈｉｂ的菌落較大，距離葡萄球菌菌落越遠(yuǎn)的Ｈｉｂ的菌落越小。此稱為“衛(wèi)星現(xiàn)象”。這一特點(diǎn)有助于對此菌的鑒定。由于有些標(biāo)本如痰，有大量雜菌生長，對Ｈｉｂ的分離培養(yǎng)影響較大，在巧克力瓊脂平皿內(nèi)加入該菌可耐受的抗生素（每毫升巧克力瓊脂內(nèi)加萬古霉素50ｍｇ，桿菌肽30ｍｇ，氯林可霉素1ｍｇ）可提高本菌的分離率。根據(jù)莢膜多糖抗原成分的不同，應(yīng)用型特異性免疫血清作莢膜腫脹試驗(yàn)或其它血清學(xué)試驗(yàn)，可以將Ｈｉｂ分成6個(gè)（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）血清型。其中ｂ型對嬰幼兒的致病性最強(qiáng)，且最多見，ｆ型次之。三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查雖然有些病例可根據(jù)病史和臨床表現(xiàn)疑為流感嗜血桿菌感染，但必須通過實(shí)驗(yàn)檢查方可確診。1.血常規(guī)此桿菌感染時(shí)病人血液白細(xì)胞大多增高，通常為15×109/L～30×10９/L，重癥患者的白細(xì)胞總數(shù)可減少。2.細(xì)菌培養(yǎng)可采取病人腦脊液、血液和穿刺抽取液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)予以確診。3.采用對流免疫電泳，膠乳凝集，協(xié)同凝集和ELISA等方法檢查腦脊液、血液和濃縮的尿液中Ｈｉｂ的特異抗原磷酸聚核糖基核糖醇（Polyribosylribitolphosphate，PRP），均可輔助臨床診斷。四、細(xì)菌的防治由于人群對流感嗜血桿菌普遍易感，特別是２個(gè)月至２歲的嬰幼兒，一家中同時(shí)有兩個(gè)小兒患病者，在文獻(xiàn)中屢有報(bào)道，所以在兄弟姐妹或在托兒機(jī)構(gòu)中出現(xiàn)首例病人后有時(shí)亦可再出現(xiàn)新病例，對病人密切接觸者可采取化學(xué)藥物預(yù)防，口服利福平可清除帶菌，20ｍｇ/Kg，每日一次，服４日為一療程。每日最大劑量為600ｍg～900ｍg，孕婦不宜用。對Ｈｉｂ感染最有效的預(yù)防措施是肌肉注射Ｈｉｂ偶聯(lián)菌苗。芬蘭赫爾辛基于70年代后期在0～4歲兒童中Ｈｉｂ腦膜炎的發(fā)病率為43／10萬。注射上述菌苗后到1991年發(fā)病率降為0。Ｈｉｂ的特異抗原磷酸聚核糖基核糖醇（PRP）可與４種蛋白載體（變異性白喉?xiàng)U菌蛋白－Oligosaccharide－CRM197protein，HbOC、白喉?xiàng)U菌類毒素－Diphtheriatoxoids，D、腦膜炎雙球菌外膜蛋白復(fù)合物－Outermembraneproteincompound，OMPC和破傷風(fēng)桿菌類毒素－Tetanustoxoid，T）偶聯(lián)，分別構(gòu)成４種類型的偶聯(lián)菌苗：PRP-HbOC、PRP-D、PRP-OMPC和PRP-T。目前至少有２５個(gè)國家將Ｈｉｂ偶聯(lián)菌苗列入兒童的免疫計(jì)劃。具體的接種方法為：嬰兒從２月齡開始接種，每間隔１～２個(gè)月１次，共３次；６～１２月齡的嬰兒需注射２次，每次間隔１～２個(gè)月；１～５歲的兒童只需注射１次。鑒于Ｈｉｂ肺炎、腦膜炎在低齡組發(fā)病率更高，癥狀及并發(fā)癥更嚴(yán)重，故應(yīng)及早接種疫苗。接種Ｈｉｂ疫苗后，極少數(shù)兒童的接種部位會出現(xiàn)輕微紅腫、疼痛或低熱，一般２～３天內(nèi)消失，只需休息或?qū)ΠY處理。嬰幼兒在患急性發(fā)熱性疾病或嚴(yán)重慢性疾病發(fā)病時(shí)，均應(yīng)暫緩接種。對破傷風(fēng)類毒素過敏者或曾對Ｈｉｂ疫苗過敏者應(yīng)避免接種。此外預(yù)防Ｈｉｂ感染的最重要方法是對５歲以下兒童進(jìn)行大面積免疫接種；對2月齡嬰兒進(jìn)行常規(guī)接種并提倡母乳喂養(yǎng)；減少與無癥狀攜帶者或有侵襲性疾病患者的密切接觸；規(guī)范抗生素使用；改善居住環(huán)境衛(wèi)生等。在對病患進(jìn)行治療時(shí)，由于目前國內(nèi)普遍存在濫用抗生素和不規(guī)律使用抗生素現(xiàn)象，因此Ｈｉ對抗生素的耐藥率逐年上升。所以抗生素的選擇一定要根據(jù)感染部位而定,如腦膜炎和會厭炎.Hib型嗜血流感桿菌結(jié)合的疫苗可用于≥2個(gè)月的兒童,能有效地預(yù)防侵襲性感染如腦膜炎,會厭炎和菌血癥等。對體重在20kg以下兒童可每天按100mg/kg靜脈注射氨芐青霉素,20kg以上兒童和成年人用量為250mg~1g,每6小時(shí)1次。另一種辦法是口服羥氨芐青霉素,20kg以下兒童20~40mg/kg,每日3次；20kg以上兒童和成年人250~500mg,每日3次；約30%的流感嗜血桿菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶且對氨芐西林耐藥。因此,常用的治療方案為：磺胺甲基異啰唑/甲氧芐氨嘧啶(SMX/TMP)兒童每日8mg/40mg/kg,口服或靜脈注射,成人則為口服1~2片(每片為160mg/800mg),每日2次；頭孢呋辛0.25~1g靜脈注射,每6小時(shí)1次；頭孢克羅兒童每日20~40mg/kg,分3次口服,成人500mg口服,每6小時(shí)1次；或強(qiáng)力霉素100mg口服,每日2次(8歲以下兒童忌用).對非耐藥菌株,在小于20kg兒童可予氨芐青霉素每日100mg/kg,分4次靜脈注射(最大劑量為每日2~3g),在大于20kg兒童及成人則為250mg~1g,每6小時(shí)1次靜脈注射.尚可使用阿莫西林,對小于20kg兒童,可予20~40mg/kg口服,每日3次；對大于20kg兒童及成人,可予250~500mg,每日3次。氟喹諾酮和阿奇霉素對流感嗜血桿菌亦有抗菌活性。五、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）流感嗜血桿菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。3、對于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。4、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。5、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。6、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。7、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，如開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以