高效液相色譜法檢測苯磺酸氨氯地平有關(guān)物質(zhì)

高效液相色譜法檢測苯磺酸氨氯地平有關(guān)物質(zhì)

苯磺酸氨基丙烯酸酯是一種廣泛用于臨床應(yīng)用的抗高血壓藥物。國家藥品標(biāo)準中已對苯磺酸氨氯地平片的含量均勻度以及溶出度作出了相關(guān)質(zhì)量規(guī)范,但無有關(guān)物質(zhì)檢查標(biāo)準1藥品、化學(xué)品和儀器LC-10A型高效液相色譜儀,配備SPD-10A型紫外可見光檢測器、Solution色譜工作站(日本島津公司);BS110S型電子天平(德國Sartorius公司);As3120B型超聲波清洗器(天津奧特賽恩司儀器有限公司);HHS21-4型電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)。苯磺酸氨氯地平對照品(中國藥品生物制品檢定所);苯磺酸氨氯地平片(共5個廠家產(chǎn)品,批號分別為20100122,20100106,20100215,20100129,20100301);甲醇、水以及其他試劑均為色譜純。2方法和結(jié)果2.1在鉻條件下進行系統(tǒng)適用性試驗色譜柱:DiamonsilC2.2供試品溶液的配制取本品10片,研細,精密稱取片劑粉末適量(約相當(dāng)于氨氯地平5mg),置25mL量瓶中,用適量流動相溶解,超聲處理30min,放冷至室溫,用流動相稀釋至刻度,濾過,得到氨氯地平質(zhì)量濃度為200μg/mL的供試品溶液。取供試品溶液1mL,置100mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,得質(zhì)量濃度為2μg/mL的對照溶液。2.3專業(yè)試驗2.3.1空白試驗按照處方比例配制空白輔料溶液,取此溶液20μL進樣,記錄色譜圖。結(jié)果表明,空白輔料對測定無干擾(圖1A)。2.3.2樣品溶液的配制酸、堿破壞:分別取片劑粉末適量(約相當(dāng)于氨氯地平1mg),置10mL試管中。酸破壞條件為0.1mol/L的鹽酸溶液,100℃水浴加熱20min。堿破壞條件為0.1mol/L氫氧化鈉溶液,100℃水浴加熱20min。再分別用相應(yīng)濃度的堿或酸中和破壞溶液,流動相定容至5mL,濾過,作為供試品溶液。色譜圖見圖1B和圖1C。光照破壞:取片劑粉末,用水配制成質(zhì)量濃度約為200μg/mL的氨氯地平溶液,于自然光下光照96h,濾過,作為供試品溶液。色譜圖見圖1D。氧化破壞:取片劑粉末,置10mL試管中,加入3%過氧化氫0.5mL,100℃水浴20min,用流動相定容至5mL,搖勻,得質(zhì)量濃度為200μg/mL的氨氯地平氧化破壞溶液,濾過,作為供試品溶液。色譜圖見圖1E。高溫破壞:取片劑粉末,在100℃下加熱1h(樣品粉末微黃,略黏附于管壁),精密稱取適量,用流動相溶解制成氨氯地平質(zhì)量濃度約為200μg/mL的溶液,濾過,作為供試品溶液。色譜圖見圖1F。2.4線性關(guān)系、檢測限和重復(fù)性試驗線性關(guān)系考察:精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品適量,用流動相溶解并稀釋制成氨氯地平質(zhì)量濃度為7.10μg/mL的溶液。精密量取上述溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,置10mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,得到氨氯地平系列對照品溶液。取20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線,得線性回歸方程A=28169C+1968,r=0.9997(n=5)。結(jié)果表明,氨氯地平溶液質(zhì)量濃度在0.71~3.57μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。檢測限確定:取氨氯地平系列對照品溶液,逐級稀釋,注入液相色譜儀,當(dāng)信噪比為3時,測得氨氯地平的最低檢測限為0.4ng;當(dāng)信噪比為10時,測得氨氯地平的定量限為1.7ng。穩(wěn)定性試驗:將對照品溶液在室溫下避光放置,分別于0,2,4,6,8h時進樣,測得峰面積的RSD為1.4%(n=5)。結(jié)果表明,溶液在室溫下避光放置8h穩(wěn)定。重復(fù)性試驗:取批號為20100129的片劑,按2.2項下方法平行制備6份供試品溶液,依法測定,計算有關(guān)物質(zhì)含量。結(jié)果的RSD為1.8%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。2.5測定主成分峰保留時間取本品10片,研細,用流動相制成每1mL中約含200μg氨氯地平的溶液,作為供試品溶液;精密量取適量,用流動相制成每1mL中含2μg氨氯地平的溶液,作為對照溶液。精密量取對照溶液20μL,注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)儀器檢測靈敏度,使主成分的峰高約為滿量程的10%~20%;再精密量取供試品溶液20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰,各雜質(zhì)峰峰面積之和不得大于對照品溶液主峰面積。按有關(guān)物質(zhì)檢查方法對市售5個廠家生產(chǎn)的苯磺酸氨氯地平片進行了檢查,有關(guān)物質(zhì)含量分別為0.08%,0.79%,0.27%,0.61%,0.21%,均符合規(guī)定。批號為20100106的片劑的有關(guān)物質(zhì)檢查色譜圖見圖2。3檢測波長的選擇。對于檢測雜質(zhì)以高效液相色譜法為分離手段,光電二極管陣列檢測器為檢測手段,考察苯磺酸氨氯地平的紫外吸收特性。結(jié)果表明,在200~400nm波長范圍內(nèi),苯磺酸氨氯地平在208,238,360nm波長處有最大吸收值。360nm波長處的吸收值較小,靈敏度較低,不適合作為有關(guān)物質(zhì)的檢測波長;208nm波長靠近紫外吸收末端,試驗中空白輔料在此波長下有干擾。故選擇238nm作為檢測波長。專屬性試驗結(jié)果表明,在建立的色譜條件下,氨氯地平可與各破壞試驗產(chǎn)生的降解產(chǎn)物和樣品中的相關(guān)雜質(zhì)得到良好分離,方法專屬性良好。在本研究中,采用不加校正因子的主成分自身對照法進行有關(guān)物質(zhì)檢查,可以比較直觀地反映有關(guān)物質(zhì)含量,符合藥典規(guī)定?！痘瘜W(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定,最大日劑量為1