2023年７３種中草藥提取物對香蕉炭疽病菌的抑菌試驗(yàn)

2023年７３種中草藥提取物對香蕉炭疽病菌的抑菌試驗(yàn)香蕉采后極易腐爛，其中由芭蕉炭疽菌［Colletotrichummusae(Berk．&Curt．)Arx．］引起的香蕉炭疽病、軸腐病是香蕉采后腐爛的重要病害，該病菌可潛伏侵染，在幼果期即可侵入果皮內(nèi)，以附著胞及菌絲形式潛伏于果皮中[1]，在香蕉后熟之后癥狀才逐漸顯現(xiàn)，造成香蕉果實(shí)在貯運(yùn)過程中的大量腐爛。劉秀娟[2]、楊葉[3]等曾對海南、廣東香蕉上的潛伏芭蕉炭疽菌進(jìn)行研究，在田間未發(fā)現(xiàn)對苯并咪唑類殺菌劑產(chǎn)生高抗的菌株。我們近年來對采自廣東、海南、云南、廣西四省區(qū)的芭蕉炭疽菌進(jìn)行對多菌靈的敏感性測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，田間存在高抗的菌株。

植物源殺蟲劑研究相對深入，并取得了一些顯著的成果[4-5]，但植物源殺菌劑的開發(fā)研究相對滯后，真正投入到市場的不多，應(yīng)用于采后病害防治的植物源殺菌劑則更少[6-9]。由于中草藥對人類毒性小，用中草藥來防治果蔬采后病害，可大大減少農(nóng)藥殘留對人類的影響。本研究選取了73種中草藥，采用生長速率法測定其丙酮提取物對2株對多菌靈敏感性不同的芭蕉炭疽菌的抑制作用，旨在探索中草藥在香蕉防腐保鮮中的應(yīng)用前景。

1材料和方法

1．1材料

香蕉炭疽菌來源為﹕排砂3和中坦3，前者2023年9月采自云南省紅河市；后者2023年9月采自廣東省中山市。排砂3多菌靈的EC50為0．07μg/mL；中坦3多菌靈的EC50為44．13μg/mL，二者的EC50之比為1∶630。中草藥購于中藥店或采自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物園。將收集的中草藥于70℃左右的條件下烘干，并用植物粉碎機(jī)磨成粉狀備用。對照藥劑為98％多菌靈原藥（蘇化集團(tuán)新沂農(nóng)化有限公司生產(chǎn)）。中草藥種類及提取部位見表1。

1．2方法

（1）植物活性物質(zhì)的提取準(zhǔn)確稱取25g中草藥粉末，用丙酮提取3次，提取時(shí)間分別為48、24、24小時(shí)，濾液合并，并在50℃下用LABOROTA4001-efficient旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮并定容至25mL，即質(zhì)量濃度為1000mg/mL，然后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。中草藥提取物抑菌活性初選將中草藥提取物加入PDA培養(yǎng)基中，制成含藥平板，經(jīng)初選，使藥劑終濃度為0．02g/mL。將在PDA平板上培養(yǎng)7天的2株芭蕉炭疽菌用0．5cm的打孔器備菌塊，然后接種于含藥平板上，以加入無菌水和20μg/mL多菌靈的PDA培養(yǎng)基為對照。每處理3皿。置于（28±0．5）℃的恒溫箱中培養(yǎng)，3天后測量菌落大小,重復(fù)3次，計(jì)算中草藥提取液對2菌株的抑制率，比較其抑菌活性差異，并篩選出抑菌率大于70％的中草藥提取物進(jìn)行毒力測定。

抑菌率（%）=［（對照菌落直徑-0．5）-（處理菌落直徑-0．5）］/（對照菌落直徑-0．5）×100

（3）中草藥提取物的室內(nèi)毒力測定將抑菌率大于70％的中草藥提取物按系列稀釋法稀釋后，加至一定量的PDA培養(yǎng)基中，配成不同濃度的PDA帶藥平板，將2菌株的菌塊接種于平板中央，采用生長速度法測定不同濃度對不同菌株的抑菌率，篩選不同中草藥的適宜濃度梯度，并在適宜濃度梯度下進(jìn)行不同中草藥對2菌株的毒力測定。每個(gè)處理3皿，置于（28±0．5）℃的恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)72小時(shí)后測量菌落直徑，重復(fù)3次，求平均值，以濃度的對數(shù)值(x)和抑菌率的機(jī)率值(y)求回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)、EC50（抑菌中濃度）和EC75，比較不同中草藥提取物對2菌株的抑菌活性差異。

2結(jié)果與分析

2．1中草藥提取物對2菌株菌絲生長的影響在0．02g/mL的濃度下，供試的73種中草藥提取物對香蕉炭疽病排砂3和中坦3均有抑制作用，平均抑菌率分別達(dá)到52．6％和55．5％，二者的抑菌率無顯著差異。但不同的中草藥提取物對2菌株的抑制作用有所不同，其中，28種中草藥提取物對2菌株的抑制作用無顯著差異，20種對排砂3的抑制作用顯著或極顯著高于對中坦3的抑制作用，25種對排砂3的抑制作用顯著或極顯著低于對中坦3的抑制作用；17種中草藥提取物對排砂3的抑菌率在70．0％以上，16種對中坦3的抑菌率在70．0％以上，其中12種中草藥提取物對2菌株的抑菌率均超過70．0％，大茴香、丁香、花椒和肉桂4種中草藥提取物對2菌株的抑菌率達(dá)100％(表2)。

2．2中草藥對2菌株的毒力測定和比較研究結(jié)果表明，對于排砂3而言，供試的17種中草藥提取物的EC50值和EC75值分別為0．55～15．29mg/mL和2．17～80．55mg/mL，其中丁香的抑菌效果最好，其次為胡椒、花椒和肉豆蔻。對于中坦3而言，供試的16種中草藥提取物的EC50值和EC75值分別為0．38～9．52mg/mL和1．05～45．20mg/mL，其中花椒的抑菌效果最好，其次為丁香、蛇床子和肉豆蔻。但不同中草藥提取物對不同菌株的毒力存在一定的差異，在12種對2菌株的抑菌率均超過70．0％的中草藥提取物中，花椒和七葉一枝花對排砂3和中坦3的抑菌作用相差較大，EC50值之比分別為1∶0．42和1∶3．19，EC75值之比分別為1∶0．44和1∶6．04,其它中草藥提取物的EC50值和EC75值之比介于二者之間，所有中草藥提取物的EC50和EC75之比遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于多菌靈對二者之比（表3）。

3結(jié)論與討論

本研究供試73種中草藥的丙酮提取物對2株香蕉炭疽病菌絲體生長均有一定的抑制作用，說明從中草藥中開發(fā)新型香蕉采后防腐保鮮劑具有一定的潛力。

通過2株對多菌靈敏感性不同菌株的毒力比較，73種中草藥提取物對2菌株的平均抑菌率無顯著差異。在0．02g/mL下抑菌率高于70％的21種中草藥提取物，EC50值高于多菌靈對排砂3和中坦3的EC50值。七葉一枝花對2菌株的EC50值之比達(dá)到了1∶3．19，低于多菌靈對2菌株的EC50值之比1∶630?；ń返?種中草藥提取物對中坦3的EC50值比對排砂3的EC50值還低，說明應(yīng)用中草藥提取物在理論上可用來治理香蕉采后病害的抗藥性。本研究僅用中草藥的粗提物對抗藥性不同的菌株進(jìn)行抑菌研究，至于中草藥提取物中有效成分的作用機(jī)理及在治理采后病害抗藥性方面的研究還需進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

1MirheadIF．Theroleofappressorialdormancyinlatentinfection．In:MicrobialEcologyofthePhylloplane．NewYork:AcademicPress,1981,155-167

2劉秀娟，黃圣明，楊葉．不同地區(qū)潛伏侵染香蕉果實(shí)的炭疽菌生物學(xué)特性研究．熱帶作物學(xué)報(bào)，1996，17(1)﹕38-44

3楊葉，唐廣緣，黃意毅，等．海南省香蕉果實(shí)潛伏炭疽菌生物學(xué)特性研究．植物病理學(xué)報(bào)，2000，30（4）﹕337-342

4盧繼榮，李孟樓．植物源殺蟲劑的研究開發(fā)進(jìn)展．西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2023，19(3)﹕109-112

5王進(jìn)忠，孫淑玲，蘇紅田．植物源殺蟲劑的研究利用現(xiàn)狀及展望．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，15)﹕72-75

6張應(yīng)烙，尹彩萍，馮俊濤，等．植物源殺菌劑的研究進(jìn)展．西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2023，31(3)﹕402-409

7王秀玲，唐蕊