輸血相容性檢測課件

關(guān)于輸血相容性檢測第1頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗酶介質(zhì)凝集試驗?zāi)郯吩囼炍⒅z免疫試驗第2頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三鹽水介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)中紅細胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗以及血型的鑒定。當(dāng)特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足夠大時，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。第3頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗第4頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗人球蛋白試驗是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗?？谷饲虻鞍自囼灥慕⒃谘脱鍖W(xué)上有著非常重要的意義。分為直接抗人球蛋白試驗（DAT）和間接抗人球蛋白試驗（IAT）?？谷饲虻鞍自囼灥?頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補體成分在體內(nèi)被紅細胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細胞表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏的紅細胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗?？谷饲虻鞍自囼炘淼?頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三DAT是檢測體內(nèi)致敏紅細胞的一種方法，用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，尤其是IgG和C3d包被的紅細胞。應(yīng)用：HDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷紅細胞被藥物抗體致敏的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查直接抗人球蛋白試驗第7頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第8頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三IAT是檢測血清中不完全抗體的一種，用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。應(yīng)用：血型的鑒定，如Rh血型抗體的檢出和鑒定交叉配血間接抗人球蛋白試驗第9頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第10頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，是紅細胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之間的間距，使IgG抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細胞產(chǎn)生凝集常用的酶（0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶酶介質(zhì)凝集試驗第11頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三優(yōu)點：酶法能顯著增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯缺點：①酶法處理RBC，蛋白酶會使RBC的抗原結(jié)構(gòu)破壞和變性（M、N、Fya、Fyb）②操作繁復(fù)，少數(shù)人對酶液過敏酶介質(zhì)凝集試驗第12頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三原理：凝聚胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷，并借助正負電荷的作用，引起紅細胞的非特異性凝集。當(dāng)紅細胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgG抗體與紅細胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合在凝聚胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。凝聚胺試驗第13頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第14頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠試驗原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。第15頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)：凝集反應(yīng)紅細胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。第16頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠試驗特異性膠：抗A、抗B、抗D中性膠：對照孔、反定型抗人球蛋白膠：抗篩、交叉配血第17頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三幾種方法的比較方法優(yōu)點缺點鹽水法操作方便,費用低廉只能檢出不相配合完全抗體,不能檢出不相配合的不完全抗體抗球蛋白法檢測不完全抗體最靈敏的方法操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作酶法增強Rh、Kidd系統(tǒng)破壞M、N、S、s、Fy(a)、Fy(b)抗原結(jié)構(gòu),易失活,壽命短,反應(yīng)時間長凝聚胺法方便、應(yīng)用最廣Kell系統(tǒng)部分抗體如抗K、抗kp(a)、抗kp(b)檢測不出,需要抗球蛋白試驗.且肝素對其有影響,易引起假陰性.微柱凝膠法國際安全輸血檢查的推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、特異性好、檢測結(jié)果可較長時間保存費用高第18頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體的篩選及鑒定有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細胞存活期減少的在37℃有反應(yīng)的同種異型抗體不規(guī)則抗體：抗A，抗B以外的抗體包括：同種抗體和自身抗體第19頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體篩選方法鹽水介質(zhì)凝集法抗人球蛋白法凝聚胺法微柱凝膠法第20頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三結(jié)果的判讀與解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對照?？贵w篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。第21頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體鑒定通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進一步作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。①自身細胞檢查-

排除非特異性②譜紅細胞檢查第22頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體鑒定譜紅細胞：一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實驗。第23頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三交叉配血主側(cè)：受血者血清+供者紅細胞檢測對供者紅細胞起反應(yīng)的抗體次側(cè)：受血者紅細胞+供者血清檢測對受者紅細胞起反應(yīng)的抗體自身對照：受血者紅細胞+受血者血清排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集第24頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三緡錢狀凝集也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細胞像許多錢幣堆積在一起。血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉擴容。將血清適當(dāng)稀釋。第25頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)交叉配血不相合的原因：

①病人或供血者ABO血型錯誤②病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供血者紅細胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。③供血者紅細胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗人球蛋白試驗陽性。④病人血清異常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗來解決）。⑤試驗系統(tǒng)被污染。

第26頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：-，抗篩：-

①患者或供血者ABO血型錯誤→重新定型②患者血清中可能含ABO抗體→檢查病人亞型、輸血史及移植史③患者血清中有抗體，但篩選細胞上無相應(yīng)抗原→對患者血清進行抗體鑒定

④供血者紅細胞直抗試驗陽性→檢查供血者直抗試驗第27頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：-，抗篩：+

患者血清中的同種抗體與供血者紅細胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)→對患者血清進行抗體鑒定，選擇無相應(yīng)抗原的血第28頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對照：+，抗篩：+

①病人血清中可能同時存在自身抗體和同種抗體→對病人血清進行抗體吸收及鑒定，用吸收后血清配血②病人血清不正常：白/球比不正常、血漿擴容物→鹽水添加試驗

③試驗系統(tǒng)污染→重新抽樣檢測第29頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析次測交叉配血不相合的原因：

①供血者血漿中存在針對患者紅細胞抗原的抗體。②病人與供血者的ABO血型不相合。③病人的紅細胞已經(jīng)包被了抗體，直抗試驗陽性。第30頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三案例分析案例1：患者女，85歲，因重度貧血，申請輸注紅細胞懸液3u。交叉配血結(jié)果為：患者血型為A型Rh陽性，抗篩（+），自身對照（-），交叉配血時主側(cè)凝集程度為（+），次側(cè)不凝集。問：如何處理？第31頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三案例分析案例2：患者，女，