血細胞分析儀與臨床應(yīng)用

關(guān)于血細胞分析儀與臨床應(yīng)用第1頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三傳統(tǒng)的血細胞檢查完全采用手工方法,不僅操作繁瑣費時,而且由于多種原因,計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度難以保證.20世紀(jì)50年代末,庫爾特采用電阻率變化與電子技術(shù)相結(jié)合的方法,發(fā)明了性能比較穩(wěn)定的電阻抗法血細胞計數(shù)儀,開創(chuàng)了血細胞分析的新紀(jì)元.第2頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三公司創(chuàng)辦人貝克曼儀器公司

始創(chuàng)于1935年

Dr.ArnoldO.Beckman庫爾特電子公司始創(chuàng)于1958年WallaceH.&JosephR.Coulter第3頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三庫爾特先生(1913-1998)“ScienceServingHumanity”(科學(xué)服務(wù)人類)庫爾特原理發(fā)明者，早期單克隆抗體研究者直至1998年，曾獲6項美國科學(xué)榮譽，及多項發(fā)明專利第4頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三主要服務(wù)對象

生物研究診斷醫(yī)療大學(xué)研究所生物技術(shù)生化制藥醫(yī)院臨床實驗室私人實驗室醫(yī)療所第5頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三血細胞分析儀的發(fā)展史

從庫爾特公司的發(fā)展史開始…1947年，華萊士.庫爾特先生發(fā)明庫爾特原理；

“當(dāng)一個不良導(dǎo)體顆粒，例如血細胞，通過兩個電極之間時，導(dǎo)致電路的電阻抗發(fā)生變化。”-華萊士.庫爾特，

1947第6頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三1953年庫爾特家族研制出全世界第一臺血細胞計數(shù)儀：ModelA;現(xiàn)在，95%的血細胞分析儀采用庫爾特原理；第7頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三

庫爾特原理三要素：小孔、負壓、電極

檢測：細胞大小和數(shù)量

負壓血細胞懸液外電極內(nèi)電極小孔小孔管小孔電流樣品杯小孔近觀在等滲電解質(zhì)溶液（稀釋液）中，有一個用于細胞計數(shù)的小孔管，其內(nèi)側(cè)充滿了稀釋液，并有一個內(nèi)電極，其外側(cè)細胞懸液中有個外電極，小孔兩側(cè)的電極之間有穩(wěn)定的電流。細胞為相對不良導(dǎo)體，其導(dǎo)電性質(zhì)比稀釋液低，當(dāng)有個細胞通過小孔，于瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)脈沖信號，脈沖的數(shù)量與細胞的數(shù)量成正比，高度與細胞體積成正比。脈沖信號經(jīng)放大，閾值調(diào)節(jié)，甄別，整形后，送入計數(shù)系統(tǒng)進行處理，得出被測細胞的數(shù)量和體積分布直方圖。第8頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三檢測區(qū)域紅細胞紅細胞通過小孔庫爾特原理Oscilloscope示波鏡第9頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三檢測區(qū)域白細胞白細胞通過小孔庫爾特原理示波鏡第10頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三庫爾特技術(shù)第11頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三高頻度分析-直方圖直方圖-X軸：體積（fL）-Y軸：相對數(shù)量通道劃分RBC直方圖：36-360fLPLT直方圖：2-20fLWBC直方圖：35-450fL第12頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三脈沖編輯（專利技術(shù)）作用：刪除不規(guī)則脈沖對體積測量的影響。第13頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三重疊校正（專利技術(shù)）

小孔近觀

作用：糾正因重疊而導(dǎo)致的對顆粒計數(shù)和體積測量的影響。第14頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三三次計數(shù)/延長計數(shù)血小板計數(shù)以三次擬合的均值為依據(jù)；對血小板濃度小于67X109/L的標(biāo)本，儀器自動延長1-2個三次計數(shù)。三次計數(shù)：統(tǒng)計補償；監(jiān)控計數(shù)過程的穩(wěn)定性。延長計數(shù)：針對低濃度的標(biāo)本。第15頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三掃流技術(shù)(專利技術(shù))測試區(qū)域紅細胞回流示波鏡紅細胞血小板+-第16頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三測試區(qū)域紅細胞被掃流液沖走示波鏡RBCPLT+-掃流液掃流技術(shù)(專利技術(shù))第17頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三掃流技術(shù)(專利技術(shù))作用：防止紅細胞回流對血小板計數(shù)的干擾；防止細胞再度進入感應(yīng)區(qū)被兩次計數(shù)。第18頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三擬合曲線（專利技術(shù)）在血小板的直方圖上可見兩條曲線：一條是2fl-20fl的原始數(shù)據(jù)曲線;另一條是0fl-70fl的擬合曲線.由最小平方回歸法定義出一條對數(shù)正態(tài)曲線，即擬合曲線；第19頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三擬合曲線血小板計數(shù)的干擾主要來自:2fl以下：噪音;細菌的干擾20fl以上：裂紅細胞;小紅細胞;白細胞的干擾第20頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三擬合曲線的作用對曲線下的面積進行積分計算；將該面積值校準(zhǔn)到參考的PLT計數(shù)；獲得與參考方法最具相關(guān)性的血小板數(shù)值.在0-70fL范圍的非血小板脈沖被擬合曲線排除于血小板計數(shù)之外；大大增加了血小板的線性范圍(0-1,500,000)第21頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三燃燒電路（專利技術(shù)）作用：預(yù)防蛋白堆積于計數(shù)孔；取消小孔的日常保養(yǎng)程序。

第22頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三酶清潔劑（專利配方）操作：每24小時浸泡0.5小時。作用：令儀器的流式通道、計數(shù)池、分血片、和血紅蛋白檢測室保持潔凈性。圖示：計數(shù)孔在用CLENZ清潔劑浸泡前后的潔凈度比較。

第23頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三自我清潔的分血片庫爾特另一個免日常保養(yǎng)的關(guān)鍵部件是專利的、是具自我清潔功能的分血片。第24頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三庫爾特CBC分析技術(shù)計數(shù)和體積分析的技術(shù)脈沖編輯重疊校正三次計數(shù)/延長計數(shù)高頻度分析血小板分析的技術(shù)掃流技術(shù)擬合曲線三次計數(shù)/延長計數(shù)免日常保養(yǎng)的技術(shù)燃燒電路酶清潔劑自我清潔的分血片其他技術(shù)第25頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三白細胞分類原理三分類原理：庫爾特直方圖分類五分類原理：VCS三維分析原理第26頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三從三分類到五分類三分類：淋巴細胞單核細胞粒細胞中性粒細胞嗜酸細胞嗜堿細胞五分類：淋巴細胞單核細胞中性粒細胞嗜酸細胞嗜堿細胞第27頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三在進行白細胞分析時,,由于白細胞計數(shù)池中除加入一定量的稀釋液外還加入了溶血劑,此溶血劑一方面使紅細胞溶解,另一方面使白細胞質(zhì)經(jīng)胞膜滲出,胞膜緊裹在細胞核或存在的顆粒周圍,使白細胞成為”膜包核”.儀器將體積在35-450fl的這種顆粒認定為白細胞,并根據(jù)其體積大小在直方圖上從左至右初步確認其相應(yīng)的三個細胞群.第28頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三在正常白細胞直方圖上,小細胞群是位于左側(cè)又高又陡的峰,分布在35-90fl,以成熟淋巴細胞為主要特征細胞,大細胞群是位于右側(cè)較低且分布寬的峰,跨越160-450fl,以中性粒細胞為主要特征細胞,位于大、小細胞群之間的較平坦的區(qū)域，分布在90-160fl，是單個核細胞，也稱為中間細胞，以單核細胞為主要特征細胞。淋巴細胞單核細胞粒細胞第29頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三儀器根據(jù)各細胞群占總體的比例計算出相應(yīng)的百分比，從而得到白細胞三分類結(jié)果，如果再與該標(biāo)本的白細胞總數(shù)相乘，即得到各類細胞的絕對值。電阻抗法的白細胞分類只是根據(jù)加溶血劑后白細胞體積的大小獲得，由于多種因素可影響白細胞分類的真實性，因此，準(zhǔn)確的白細胞分類還不能完全脫離手工顯微鏡檢查。第30頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三白細胞五項分類：VCS技術(shù)分析外周血液中的淋巴細胞單核細胞嗜中性粒細胞嗜酸性粒細胞嗜堿性粒細胞運用VCS技術(shù),對白細胞進行多參量分析大小、核形、顆粒特性第31頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三嗜酸細胞淋巴細胞單核細胞中性粒細胞血小板

嗜堿細胞紅細胞第32頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三淋巴嗜堿單核嗜酸中性粒細胞第33頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三V.C.S.三維分析原理運用V、C、S三種探針,在流式通道的某一位點,對通過的單列白細胞，進行逐個的、同時的、三重的檢測，以及三維分析,以確定其亞群性質(zhì)。V-低頻波，分析細胞體積；C-高頻波，分析細胞核型；S-激光，分析細胞的顆粒特性。第34頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三VCS檢測八千多個白細胞逐個、直接、同時地接受VCS三重檢測，得到各自的三維座標(biāo)值VCS第35頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三增強型流式通道VCS增強型流式通道運用三種獨立的能量探針來分析細胞第36頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三更好的大小測量方法

0-3

(相對大小)V是以參考的直流電阻方法檢測整個細胞的體積普通流式方法根據(jù)激光的前向散射估計細胞的相對大小激光VCS

-DC第37頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三更好的內(nèi)部結(jié)構(gòu)測量方法

7-10(復(fù)雜性)RF運用類似于超聲波的高頻波測量細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)普通流式方法根據(jù)激光的低角度散射估計細胞的復(fù)雜性激光VCS-RF第38頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三射頻(RF)信號的問題細胞越大，它發(fā)出射頻信號所需要的時間就越長；因此，細胞大小對射頻信號具有影響；這種影響可以減弱對LY、MO、和GR的分辨效果。VolumeRF第39頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三將射頻轉(zhuǎn)換為阻光性已知細胞體積，可對射頻信號作體積補償；使信號的變化只受細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的影響；阻光性測量核的密度和分葉性，使更好地區(qū)分細胞。VolumeOpacity第40頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三高頻傳導(dǎo)信號大的細胞嗜中性、嗜酸性、嗜堿性粒細胞高頻傳導(dǎo)信號小的細胞淋巴、單核細胞高頻傳導(dǎo)（阻光性）第41頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三9Odeg.激光VCS-LaserS是運用一個寬角度的散射范圍（10-70）來測量細胞的顆粒特性普通流式方法運用單角度/側(cè)向激光散射測量細胞的顆粒特性更好的顆粒特性測量方法第42頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三激光散射信號大的細胞嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞激光散射信號小的細胞淋巴細胞、單核細胞、嗜堿性粒細胞激光散射第43頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三三維分析技術(shù)將檢測過的8,192個細胞分布到一個以V、C、S為三維坐標(biāo)的空間內(nèi)，顯示出細胞群特征。高智能的計算機軟件分析分析細胞群的位置、相對密度、輪廓、和大小。三維坐標(biāo)的數(shù)據(jù)分析位點多過16×106個。第44頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三三維空間的立體表示第45頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三VCS三維分析的技術(shù)特點接近原態(tài)的白細胞分析一個分類試劑包ScatterPak雙試劑系統(tǒng)的作用去紅細胞:紅細胞溶解劑通過滲透壓差溶解紅細胞；保持白細胞原態(tài):溶解終止液令白細胞恢復(fù)到“接近原態(tài)”大小。第46頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三接近原態(tài)的WBC分析接近原態(tài)的白細胞進入流式通道第47頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三VCS三維分析的技術(shù)特點1流體動力聚焦的流式通道單細胞流在鞘液的包裹下呈最適排列通過流式通道；將重疊限制到最低限度。第48頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三正常壓力差：標(biāo)本壓力小于鞘流壓力第49頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三異常壓力差：標(biāo)本與鞘流壓力差過小第50頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三異常壓力差：標(biāo)本壓力與鞘流壓力相等第51頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三2增強型流式通道，VCS直接、同時、三重檢測分析細胞的視角與手工相似VCS，匯集最全面的物理檢測工具3三維分析的高分辨率(256256256)五分類10種異常細胞第52頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三十種異常細胞的報警提示第53頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三紅細胞檢測原理根據(jù)各參數(shù)的檢測原理不同，大致分為三個部分1紅細胞計數(shù)和血細胞比容測定原理與白細胞檢測相同，當(dāng)紅細胞通過小孔時，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少代表RBC的數(shù)量，脈沖的高度代表單個細胞的體積。脈沖高度疊加，經(jīng)換算即可得血細胞比積（HCT）。第54頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三2血紅蛋白檢測原理在稀釋的血液中加入溶血劑后，紅細胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)，后者與溶血濟中有關(guān)成分結(jié)合形成Hb衍生物，進入Hb測試系統(tǒng)，在特定波長（一般在530-550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成正比，儀器便可顯示其濃度。第55頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三HGB測量庫爾特的HGB測量方法：改良的氰化高鐵血紅蛋白試劑；溶血劑令紅細胞破碎溶解，并將血紅蛋白轉(zhuǎn)換為氰化血紅蛋白一個具寬光譜的鎢燈光源；一個紅外濾光器過濾熱吸收；一個以525nm為中心的寬幅通帶濾光器；沒有來自磺基血紅蛋白的干擾；多重試劑空白。第56頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三窄幅通帶濾光器光吸收波長第57頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三寬幅通帶濾光器波長光吸收第58頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三吸收峰偏移如果吸收峰頻率發(fā)生偏移，窄幅通帶濾光器可能會漏掉曲線的大部分；寬幅通帶濾光器對吸收峰偏移現(xiàn)象會有所補償。光吸收光吸收波長第59頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三3血小板檢測原理隨紅細胞一起在一個系統(tǒng)中進行檢測，根據(jù)不同的域值，計算機分別給出血小板與紅細胞的數(shù)目。第60頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三血細胞分析儀

檢測參數(shù)的臨床意義白細胞計數(shù)的臨床意義

1生理性增多主要見于初生兒，妊娠期與分娩時，運動，疼痛和情緒變化，體力勞動，冷熱水浴，日光或紫外線照射等以及日間變化。第61頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三病理性增多

急性感染（化膿性感染）嚴(yán)重組織損傷或大量血細胞破壞（大手術(shù)）急性大出血（脾破裂，宮外孕輸卵管破裂）急性中毒（安眠藥，敵敵畏）腫瘤性增多（白血?。?/p>

第62頁，講稿共69頁，2023年5月2日，星期三數(shù)量減少革蘭陰性桿菌或病毒感染某些血液?。ㄔ僬希┞岳?、化損傷（電離輻射，長期服用氯霉素）