4種中藥體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的研究

4種中藥體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的研究

【關(guān)鍵詞】夏枯草；,積雪草；,筋骨草；,青蒿素；抗結(jié)核

摘要：目的研究中藥夏枯草、積雪草、筋骨草和青蒿素的體外抗結(jié)核分枝桿菌H37RV的活性。方法采用改良羅氏固體培養(yǎng)基試管培養(yǎng)法進行活性檢測。結(jié)果夏枯草醇提物抗結(jié)核效果明顯；積雪草苷片、筋骨草及青蒿素均無效。結(jié)論夏枯草醇提物抗結(jié)核菌效果優(yōu)于水提物；積雪草醇提物有微弱抑制結(jié)核桿菌活性，但其有效成分可能不是積雪草苷；青蒿素及二氫青蒿素無抑制結(jié)核分枝桿菌的活性。

關(guān)鍵詞：夏枯草；積雪草；筋骨草；青蒿素；抗結(jié)核

StudiesontheAnti-mycobateriumTuberculosisActivityof4ChineseMedicinalHerbs

Abstract：ObjectiveToexploretheeffectiveantimycobateriumtuberculosisactivityofPrunellavulgarisL.，Centellaasiatica(L.)Urb，AjugadecumbensThunb.andtuberculosisactivitiesinvitrooftheextractswereperformed.ResultsThealcoholicextractofPrunellavulgarisL.hadobviouslyantimycobateriumtuberculosiseffect,whiletheextractofAjugadecumbensThunb.andartemisininwereofnoeffectagainstresultssuggestedthattheantimycobateriumtuberculosisactivityofPrunellavulgarisL.alcoholicextractwasmoresignificantthanwatersolubleextractofit,andasiaticosideswerelikelytobenoneffectiveconstituentsofCentellaasiatica(L.)Urbtotuberclebacillus.

Keywords：PrunellavulgarisL.;Centellaasiatica(L.)Urb；AjugadecumbensThunb.；Artemisinin；Antimycobateriumtuberculosis

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，以肺結(jié)核最為常見。近20年來，由于受艾滋病的流行、耐藥結(jié)核病及流動人口增多等因素的影響，全球結(jié)核病疫情呈明顯上升趨勢。肺結(jié)核近來又成為世界上殺傷力最大的傳染病。數(shù)十年來,國際上針對結(jié)核菌已開發(fā)出近二十種藥物,但均存在副作用大,易產(chǎn)生耐藥性等缺點。特別是耐藥及多重耐藥菌株(multipledrugsresistantbacillustuberculosis,MDR-TB)的出現(xiàn),更是對現(xiàn)有的抗結(jié)核藥物提出了挑戰(zhàn)。同時,從化學合成物中尋找有效藥物的難度日益增大。因此,近年來從我國豐富的中藥資源中尋找有效的抗結(jié)核藥物,已引起越來越廣泛的重視。本文對4種傳統(tǒng)中藥進行體外抗結(jié)核桿菌活性的研究。

1材料

菌種與培養(yǎng)基人型結(jié)核分枝桿菌H37RV(來源于廣州市胸科醫(yī)院)；實驗采用改良羅氏固體培養(yǎng)基,配制方法參考文獻［1］。

提取物及藥品夏枯草水提物：夏枯草藥材(產(chǎn)地:湖北)粗粉,以水為溶劑加熱回流提取，過濾，20%乙醇沉淀除去雜質(zhì),濃縮,凍干得到粉末,收率%。夏枯草醇提物:同批次夏枯草藥材粗粉,以乙醇加熱回流提取，濃縮，凍干得提取物，收率%。積雪草醇提物:積雪草藥材(產(chǎn)地：安徽)粗粉，75%乙醇加熱回流提物,過濾，濃縮，凍干得提取，收率%。筋骨草醇提物:筋骨草藥材(產(chǎn)地：安徽)粗粉乙醇加熱回流濃縮至無醇味,加熱水溶后，冷卻沉淀除去雜質(zhì),濃縮凍干得提取物，收率%。積雪草苷片：上海雷允上藥有限公司利福平膠囊：廣東華南制藥廠青蒿素,二氫青蒿素：純度＞98%,陳祥飛博士贈送。熊果酸：中國藥品生物制品檢定所。

2方法

提取物薄層鑒別夏枯草TLC鑒別條件：展開劑∶環(huán)己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶冰醋酸20∶5∶8∶，顯色條件：10%硫酸乙醇溶液105℃加熱顯色。積雪草TLC鑒別條件：展開劑∶氯仿∶甲醇∶水7∶3∶，顯色條件：10%硫酸乙醇溶液105℃加熱顯色。筋骨草TLC鑒別條件：展開劑∶醋酸乙酯∶乙醇4∶1，顯色條件：10%香草醛硫酸乙醇溶液105℃加熱顯色。以上薄層均采用硅膠G板展開。

含藥培養(yǎng)基的制備取各提取物及積雪草苷片用%吐溫-80水溶液溶解或混懸，制成含藥濃度分別為5，2，，，mg/ml共五個濃度的含藥培養(yǎng)基；及mg/ml的青蒿素和二氫青蒿素培養(yǎng)基；5mg/ml的利福平培養(yǎng)基，每個濃度平行裝2支試管，以%吐溫80水溶液作為空白對照培養(yǎng)基。取適量無藥改良羅氏培養(yǎng)基上20~30d后生長良好的H37RV結(jié)核桿菌菌株。取上述菌種適量,置盛%(v/v)Tween80生理鹽水的瑪瑙研缽中,研磨成混懸液,將濃度調(diào)整至1mg/ml，再用生理鹽水稀釋，使之濃度為×101mg/ml，供接種用。取該菌液ml，在無菌條件下分別接種于不同濃度的各培養(yǎng)基中,使接種菌量約為×103mg/ml。放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)，1周后開始觀察培養(yǎng)基表面菌落生長情況。

［1］趙奎君，徐國鈞，金蓉鸞,等.狼毒類中藥對結(jié)核桿菌抗菌作用的比較［J］.中國藥科大學學報，1995，26：122.

［2］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京：化學工業(yè)出版