椒目油對哮喘豚鼠白細胞介素4-5及氣道反應(yīng)性的影響

椒目油對哮喘豚鼠白細胞介素4,5及氣道反應(yīng)性的影響【摘要】目的：探討椒目油對哮喘豚鼠模型白細胞介素4,5(IL4,5)水平及氣道高反應(yīng)性(AHR)的影響，為椒目油治療哮喘提供理論依據(jù).方法：實驗分為4組：正常對照組、哮喘模型組、地塞米松治療組和椒目油治療組，每組各10只豚鼠.用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和霧化吸入激發(fā)建立哮喘豚鼠模型，三通管做氣管插管進行機械通氣，測定氣道內(nèi)壓力(IP)以反映氣道反應(yīng)性，ELISA法檢測豚鼠血清中IL4,5含量.結(jié)果：哮喘模型組豚鼠血清IL4,5含量［分別為(±)和(±)ng/L］顯著高于正常對照組［分別為(±)和(±)ng/L］()；椒目油組IL4,5含量［分別為(±)和(±)ng/L］和地塞米松組IL4,5含量［分別為(±)和(±)ng/L］均明顯低于哮喘模型組()；椒目油組豚鼠IL4含量與地塞米松組比較無統(tǒng)計學意義()，但IL5含量顯著低于地塞米松組().哮喘豚鼠模型組氣道反應(yīng)性(±g/L)與正常對照組(±g/L)比較顯著升高()；椒目油治療組與地塞米松治療組氣道反應(yīng)性［分別為(±)和(±)g/L］與哮喘模型組比較均顯著降低()，與正常對照組比較無統(tǒng)計學意義()；椒目油組氣道反應(yīng)性與地塞米松組相比無顯著性差異().結(jié)論：椒目油能有效降低哮喘豚鼠AHR，其機制可能是抑制哮喘豚鼠體內(nèi)IL4,5的生成.

【關(guān)鍵詞】椒目油；哮喘；白細胞介素4；白細胞介素5；氣道高反應(yīng)性

支氣管哮喘是一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，IL4,5在其發(fā)病機制中占重要地位［1］.目前臨床上治療哮喘多以對癥為主.中藥椒目治療哮喘歷史悠久，療效顯著，但對其止哮平喘的作用機制還不清楚.我們旨在通過探究椒目油對哮喘豚鼠血清IL4,5含量及氣道高反應(yīng)性(Hyperresponsiveness,AHR)的影響，揭示椒目治療哮喘的作用機制，為椒目油運用于臨床提供理論依據(jù).

1材料和方法

材料健康雄性豚鼠40只，體質(zhì)量(250±50)g；椒目油(第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院藥劑科，批號：20050221)；卵白蛋白(OVA,Sigma公司)；磷酸組胺(上海麗珠東風生物技術(shù)有限公司)；戊巴比妥鈉(國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20041117)；豚鼠IL4,5ELISA試劑盒［美國Repidbio(RB)公司］；401AI超聲霧化器(上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)；動物呼吸機DH140B(浙江醫(yī)科大學醫(yī)學儀器實驗廠)；PTM9醫(yī)用微機實控儀(二道生理儀)，RM6280多道智能生理信號記錄系統(tǒng)(第四軍醫(yī)大學病理生理學教研室).

方法

豚鼠支氣管哮喘模型的建立參照文獻［1］.每日激發(fā)豚鼠1次，共7d.每次激發(fā)直到豚鼠出現(xiàn)咳嗽、呼吸急促、腹肌緊張等哮喘癥狀時為止.

實驗分組及處理用隨機數(shù)字表法將豚鼠分為4組：正常對照組、哮喘模型組、地塞米松治療組和椒目油治療組，每組各10只.正常對照組用等量生理鹽水致敏和霧化激發(fā).哮喘模型組用OVA致敏激發(fā).地塞米松治療組致敏激發(fā)方法同哮喘模型組，但激發(fā)后立即給予5g/L地塞米松溶液霧化吸入5min.椒目油組致敏方法同哮喘模型組，激發(fā)后立即給予椒目油和熟精油的混合物(按1∶1混合)，以3mL/kg灌胃.

氣道反應(yīng)性的測定參照文獻［2］，以氣道內(nèi)壓力(IP)上升至基線值的20%時所對應(yīng)的磷酸組胺濃度(PC20)做為體現(xiàn)氣道反應(yīng)性高低的指標.

測定IL4,5含量氣道反應(yīng)性測定完畢后，從豚鼠心臟直接抽血5mL，靜置30min后以2000r/min離心.收集上層血清，運用ELISA法測定血清IL4,5的含量，具體步驟參照試劑盒說明書.

統(tǒng)計學處理：所有數(shù)據(jù)均以x±s表示.將原始數(shù)據(jù)輸入SPSS統(tǒng)計軟件包，氣道反應(yīng)性的組間比較運用KruskalWallisH法和Nemenyi法檢驗；IL4,5含量的組間比較運用SNKq法檢驗.顯著性水平均為

2結(jié)果

模型動物大體表現(xiàn)哮喘組豚鼠在誘喘過程中出現(xiàn)哮喘發(fā)作癥狀，不同程度地表現(xiàn)為咳嗽、呼吸急促、腹肌緊張、四肢癱軟、行動遲緩或俯臥不動.椒目油組和地塞米松組豚鼠激發(fā)后癥狀的表現(xiàn)程度較同期哮喘組明顯減弱.

病理學表現(xiàn)與正常對照組相比，哮喘模型組豚鼠肺外觀體積增大，表面略腫脹，有不規(guī)則暗紅色充血區(qū)及多處小米粒大小的紅色出血點，支氣管和肺泡腔內(nèi)黏液分泌明顯增多.哮喘組肺組織切片(圖1B)與正常對照組(圖1A)對比顯示：支氣管壁及支氣管周圍組織有多處紅細胞聚集區(qū)，且有大量炎細胞浸潤，包括淋巴細胞、嗜酸粒細胞(EOS)、單核細胞等；氣道黏膜上

皮增厚，氣道變窄，嚴重者可見脫落.上述病理表現(xiàn)證明哮喘模型建立成功.椒目油組豚鼠肺大體表現(xiàn)：體積無明顯變化，表面充血區(qū)及出血點有明顯吸收的痕跡，面積明顯小于哮喘組，出血點數(shù)量也明顯減少；切片表現(xiàn)為小氣道及肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，支氣管和肺泡腔內(nèi)分泌物顯著減少，肺組織炎性細胞浸潤明顯減少，無氣道狹窄及氣道上皮細胞脫落等現(xiàn)象(圖1C).地塞米松組病理表現(xiàn)(圖1D)與椒目油組相似，但炎性細胞的減少較椒目油組弱.

各組間豚鼠血清IL4,5含量及AHR水平的比較哮喘組豚鼠IL4,5含量與正常對照組相比均顯著升高(，表1)；椒目油和地塞米松組IL4含量較哮喘組均顯著降低()，但與正常對照組相比無統(tǒng)計學意義()；兩治療組IL5含量較哮喘組均顯著降低()，椒目油組降低更為明顯，已接近正常對照組，然而地塞米松組的IL5下降幅度較小，其水平雖低于哮喘組，但仍高于正常對照組()；椒目油與地塞米松兩組之間IL4含量比較無統(tǒng)計學意義()，但兩組IL5含量比表1各組豚鼠IL4,5及AHR水平

3討論

AHR是哮喘的重要特征，也是臨床診斷哮喘的主要依據(jù).氣道炎癥、氣道平滑肌細胞反應(yīng)性及氣道重建是哮喘發(fā)病機制的三個主要因素，其中氣道炎癥為首發(fā)因素.與哮喘關(guān)系密切的IL4,5是多種炎癥細胞所釋放的細胞因子，在AHR的發(fā)生和發(fā)展中占有重要地位.豚鼠肺組織病理切片的結(jié)果表明椒目油能夠減輕哮喘發(fā)展過程中引起的組織充血水腫、炎性細胞浸潤甚至出血壞死等病理改變.椒目油的上述作用可能與其減少IL4,5合成及釋放有關(guān).

IL4是一種多功能細胞因子，主要由活化T細胞和單核細胞分泌，是Th2細胞的特征性細胞因子.它可通過對B細胞受體的去抑制作用而活化B細胞，從而介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答反應(yīng)［3］.IgE是介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)的重要介質(zhì)，IL4對IgG向IgE轉(zhuǎn)型有促進作用［4］；IL4與受體結(jié)合可引發(fā)受體異源二聚化并激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6(STAT6)，誘導(dǎo)MHCⅡ類抗原及免疫球蛋白受體基因等表達［5］，從而產(chǎn)生

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