放大染色胃鏡下氬氣刀治療胃黏膜隆起糜爛的臨床研究

放大染色胃鏡下氬氣刀治療胃黏膜隆起糜爛的臨床研究【摘要】目的建立反相高效液相色譜法測(cè)定奧扎格雷的含量。采用KromasilC18(×150mm,5μm)色譜柱以/L磷酸二氫鉀-乙腈為流動(dòng)相，流速為/min，以左羥丙哌嗪為內(nèi)標(biāo)物，檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。結(jié)果奧扎格雷的回歸方程Y=+(r=)，其線性范圍為～416μg/ml，平均回收率為%。結(jié)論本法可用于奧扎格雷的含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確。

【關(guān)鍵詞】反相高效液相色譜法；奧扎格雷；含量測(cè)定

Abstract:ObjectiveTodevelopaRP-HPLCprocedureindeterminationthequantityofozagrel.MethodsHPLCwascarriedoutusingaKromasilC18column(×150mm,5μm)with/LPotassiumdihydrogenphosphate()-acetonitrile(85∶15)asthemobilephase,theflowratewas/min,theinternalstandardwaslevodropropzine.TheUVwavelengthwas274nm.ResultsTheregressionequationwasY=+(r=).Thelinearrangedfromto416μg/ml.Themeanrecoverywas%andRSDwas%.ConclusionTheproposedmethodissimple,selectiveaccurateandprecise.

Keywords:reversed-phasehighperformancechromatography;ozagrel;quantitydetermination

奧扎格雷為高效、選擇性血栓素合成酶抑制劑，通過(guò)抑制血栓烷A2的產(chǎn)生及促進(jìn)前列環(huán)素的生成而改善兩者間的平衡失調(diào)，具有抗血小板聚集和擴(kuò)張血管作用。能抑制大腦血管痙攣，增加大腦血流量，改善大腦內(nèi)微循環(huán)障礙和能量代謝異常，從而改善蛛網(wǎng)膜下腔出血術(shù)后患者的大腦局部缺血癥狀和腦血栓患者的運(yùn)動(dòng)失調(diào)。用于急性血栓性腦梗塞和腦梗塞所伴隨的運(yùn)動(dòng)障礙。國(guó)內(nèi)有采用高效液相色譜法(HPLC)外標(biāo)法測(cè)定奧扎格雷及其制劑的含量［1,2］，及奧扎格雷中有關(guān)物質(zhì)的報(bào)道［3］。筆者采用內(nèi)標(biāo)法對(duì)該藥進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)將其測(cè)定方法報(bào)道如下。

1材料與方法

材料SYSTEM,JASCOPU-980IntelligentHPLCPump,JASCOUV-975型紫外檢測(cè)器；7725手動(dòng)進(jìn)樣閥，JASCOLIBRORL-200SM十萬(wàn)分之一光學(xué)天平；TDX高速離心機(jī)；渦旋震蕩儀，PHS-3CPH儀；超聲震蕩儀。奧扎格雷，內(nèi)標(biāo)左羥丙哌嗪。注射用奧扎格雷鈉為市售。乙腈、甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水。

方法與結(jié)果

色譜條件色譜柱：KromasilC18(×150mm,5μm)；流動(dòng)相為/L磷酸二氫鉀-乙腈，冰醋酸調(diào)至pH；檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm；柱溫為室溫；流速：/min；進(jìn)樣量：20μl。流動(dòng)相經(jīng)μm的微孔濾膜濾過(guò)后使用。

對(duì)照品溶液準(zhǔn)確稱取奧扎格雷對(duì)照品，置于10ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液取本品，準(zhǔn)確稱定，置于10ml量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋成每1ml中含1mg的溶液，作為供試品溶液。

內(nèi)標(biāo)溶液準(zhǔn)確稱取左羥丙哌嗪適量置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得內(nèi)標(biāo)液440mg/L。

在上述色譜條件下，通過(guò)對(duì)奧扎格雷、溶劑及輔料進(jìn)行HPLC分離檢測(cè)，結(jié)果見圖1～3。

線性關(guān)系考察精密稱取奧扎格雷對(duì)照品適量，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為奧扎格雷標(biāo)準(zhǔn)貯備液416μg/ml，精密量取1，，，5，分別置于10ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，與奧扎格雷標(biāo)準(zhǔn)貯備液416μg/ml各進(jìn)樣20μl，依法測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積積分值做為縱坐標(biāo)，奧扎格雷濃度做為橫坐標(biāo)，得線性回歸方程為：Y=+，r=。表明濃度在～416μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與測(cè)定濃度成良好線性關(guān)系。

精度度試驗(yàn)取同一樣品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果樣品含量的RSD為%。

重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，精密稱定，按照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，測(cè)定奧扎格雷的含量，RSD為%，表明本法重復(fù)性較好。

樣品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品溶液于室溫避光放置0，2，4，12，24，48h分別進(jìn)行測(cè)定，峰面積比基本不變，RSD為%。結(jié)果表明，樣品溶液48h內(nèi)可保持穩(wěn)定。

圖1奧扎格雷對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)的HPLC色譜圖

1.奧扎格雷2.左羥丙哌嗪

圖2奧扎格雷及內(nèi)標(biāo)的HPLC色譜圖

1.奧扎格雷2.左羥丙哌嗪

圖3空白樣品的HPLC色譜圖

回收率試驗(yàn)采用加樣回收的，取已測(cè)定含量的同批樣品適量共9份，3份為一組，分別加入奧扎格雷對(duì)照品4，5，6mg，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻后按測(cè)定項(xiàng)下的方法分別測(cè)定含量，減去樣品本底，回收率，測(cè)得3種濃度奧扎格雷的平均回收率分別為%，%，%，RSD分別為%，%，%。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品含量測(cè)定取3批奧扎格雷，精密稱定，置10ml容量瓶中，加甲醇稀至刻度，搖勻。經(jīng)μm濾膜濾過(guò)，精密量取1ml，加內(nèi)標(biāo)物100μl，置10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取20μl進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中奧扎格雷的含量，見表2。

表2奧扎格雷含量測(cè)定結(jié)果

2討論

乙腈含量對(duì)色譜行為的分別配制乙腈含量為20%，15%，10%的流動(dòng)相，考察乙腈含量對(duì)色譜峰的影響。結(jié)果表明，乙腈含量為20%時(shí)，主峰與雜質(zhì)峰的出峰時(shí)間相近，雜質(zhì)峰對(duì)主峰影響較大。乙腈含量為10%時(shí)，檢測(cè)靈敏度降低，峰高明顯降低。采用乙腈含量為15%的流動(dòng)相較為適宜。

用甲醇代替乙腈對(duì)色譜行為的影響鑒于乙腈成本高、毒性大，故在上述的基礎(chǔ)上，將流動(dòng)相體系的組成成分進(jìn)行改變，試驗(yàn)以甲醇代替乙腈的分離效果。結(jié)果顯示，醇羥基對(duì)奧扎格雷有影響，造成峰拖尾嚴(yán)重。

【】

［1］姚秀瓊，程華.HPLC測(cè)定奧扎格雷及其制劑的含量［J］.廣東藥學(xué)，2005,15(4):1