專題綜合檢測一　基因工程

eq\o(\s\up7(),\s\do5())eq\o(\s\up7(),\s\do5())專題綜合檢測一基因工程時間：90分鐘滿分：100分一、選擇題(每小題2分，共20分)1．[2019·烏魯木齊市第四高二期中]基因工程是DNA分子水平的操作，下列有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是()A．限制酶作用能使堿基對之間的氫鍵斷裂B．載體與目的基因通常用同種限制酶處理C．基因工程所用的工具酶包括限制酶和DNA連接酶D．帶有目的基因的載體是否進入受體細(xì)胞需檢測解析：限制酶作用能使DNA兩條鏈上特定的脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，A錯誤；載體與目的基因通常用同種限制酶處理，以便形成相同的黏性末端，B正確；基因工程所用的工具酶包括限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DNA連接酶，C正確；帶有目的基因的載體是否進入受體細(xì)胞需檢測，如采用DNA分子雜交技術(shù)，D正確。答案：A2．[2019·河北高二期末]下列有關(guān)基因組文庫和cDNA文庫的說法，正確的是()A．基因組文庫中的基因都可在不同物種間進行交流B．基因組文庫只包含生物的部分基因C．構(gòu)建cDNA文庫需要逆轉(zhuǎn)錄酶D．cDNA文庫的基因中有內(nèi)含子解析：從基因組文庫中獲取的基因只有部分可在物種間進行交流，A錯誤；基因組文庫包含某種生物所有的基因，B錯誤；根據(jù)以上分析可知，構(gòu)建cDNA文庫需要逆轉(zhuǎn)錄酶，C正確；cDNA文庫的基因是mRNA經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄形成的，無內(nèi)含子，D錯誤。答案：C3．[2019·北京高二期末]下列關(guān)于DNA分子雜交和抗原－抗體雜交的敘述，正確的是()A．DNA分子雜交是指兩條脫氧核苷酸鏈的雜交B．抗原－抗體雜交的原理為堿基互補配對原則C．DNA分子雜交可檢測目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄D．抗原－抗體雜交中目的基因產(chǎn)物常作為抗體解析：DNA分子雜交是指兩條核苷酸鏈的雜交，A正確；抗原－抗體雜交的原理為抗體與抗原特異性結(jié)合，B錯誤；DNA分子雜交可檢測目的基因的存在，檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，用分子雜交技術(shù)，C錯誤；抗原－抗體雜交中目的基因產(chǎn)物常作為抗原，D錯誤。答案：A4．[2019·延安市寶塔區(qū)第四高二期末]關(guān)于下圖所示黏性末端的敘述中，正確的是()A．①與③由相同限制酶切割產(chǎn)生B．連接酶可催化①與③的拼接C．經(jīng)酶切形成④需要消耗2個水分子D．①－④中的化學(xué)鍵均為相同化學(xué)鍵解析：A項和B項、①與③的末端不能進行堿基互補配對，不是由相同限制酶切割產(chǎn)生，不能由DNA連接酶連接，A項、B項錯誤；經(jīng)酶切形成④打開兩個磷酸二酯鍵，需要消耗2個水分子，C正確；①－④中的化學(xué)鍵有氫鍵和磷酸二酯鍵，D錯誤。答案：C5．[2019·黃陵高新部高一期末]在基因工程技術(shù)中，限制性核酸內(nèi)切酶主要用于()A．目的基因的提取和導(dǎo)入B．目的基因的導(dǎo)入和檢測C．目的基因與運載體的結(jié)合和導(dǎo)入D．目的基因的提取和運載體切割解析：目的基因的提取需要限制酶，而導(dǎo)入需要載體，A錯誤；目的基因的導(dǎo)入需要載體，目的基因的檢測不需要限制酶，B錯誤；目的基因與運載體的結(jié)合即基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要限制酶，而導(dǎo)入不需要，C錯誤；獲取目的基因需要限制酶切割DNA分子，目的基因與運載體結(jié)合是基因表達(dá)載體構(gòu)建過程，此時需要同一種限制酶切割目的基因和運載體，使它們露出相同的黏性末端或平末端，之后用DNA連接酶連接成基因表達(dá)載體(重組DNA分子)，D正確。答案：D6．下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述正確的是()A．培育抗蟲棉，導(dǎo)入抗蟲基因時只能以受精卵為受體細(xì)胞B．重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、DNA連接酶、運載體C．常選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因為細(xì)菌繁殖快D．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞就能成功表達(dá)解析：植物細(xì)胞的全能性較高，目的基因可導(dǎo)入植物體細(xì)胞或受精卵，A錯誤；運載體不是工具酶，B錯誤；常用細(xì)菌作為受體細(xì)胞，原因是其繁殖快、代謝快，C正確；目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，不一定能成功表達(dá)，需要進行檢測和鑒定，D錯誤。答案：C7．[2019·福建省泉州市泉港區(qū)第一高二期末]下面關(guān)于多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的敘述正確的是()A．PCR過程中只需要兩個引物分子B．PCR的循環(huán)過程分為變性、復(fù)性和延伸三步C．PCR擴增儀需保持在37°C以維持Taq酶最佳活性D．PCR過程中邊解旋邊復(fù)制解析：PCR過程中需要兩種引物，引物的數(shù)目需要根據(jù)擴增的次數(shù)確定，A錯誤；PCR的循環(huán)過程分為高溫變性(DNA雙鏈打開)、復(fù)性(模板鏈與引物結(jié)合)和延伸(合成子鏈)三步，B正確；PCR擴增儀溫度會達(dá)到90－95℃答案：B8．[2019·遼寧高二期中]下列有關(guān)基因治療的敘述中，正確的是()A．基因治療可以治愈所有人類的遺傳類疾病B．對有基因缺陷的細(xì)胞提供營養(yǎng)，從而使其恢復(fù)正常，達(dá)到治療疾病的目的C．運用基因工程技術(shù)，把有缺陷的基因切除，達(dá)到治療疾病的目的D．用于治療的基因有的是編碼可以殺死癌變細(xì)胞的蛋白酶基因，又稱自殺基因解析：目前在基因水平上治療遺傳病尚處于試驗研究階段，仍不能達(dá)到治愈所有人類遺傳病，A錯誤；基因治療只是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，沒有對有基因缺陷的細(xì)胞額外提供營養(yǎng)，B錯誤；基因治療是把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，達(dá)到治療疾病的目的，并沒有切除基因，C錯誤；用于基因治療的基因可以是編碼可以殺死癌變細(xì)胞的蛋白酶基因，導(dǎo)入受體細(xì)胞后誘導(dǎo)其編程性死亡，即自殺基因，D正確。答案：D9．利用蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因培育出的抗蟲棉是否成功，需要檢測()A．是否能分離到目的基因B．是否有抗蟲的性狀出現(xiàn)C．是否有抗生素產(chǎn)生D．目的基因是否得到表達(dá)解析：能否分離出目的基因為基因?qū)胧欠癯晒Φ臋z測標(biāo)志，A錯誤；抗蟲棉培育成功的標(biāo)志是目的基因成功表達(dá)，且表現(xiàn)出抗蟲性狀，B正確，D錯誤；抗蟲棉是否表現(xiàn)抗蟲性狀與抗生素產(chǎn)生與否無關(guān)，C錯誤。答案：B10．[2019·遼源市田家炳高級高二期中]下列關(guān)于基因工程及其產(chǎn)品的說法中，不正確的是()A．基因工程的一項關(guān)鍵技術(shù)是構(gòu)建基因表達(dá)載體B．基因工程的優(yōu)勢是可定向地改造生物遺傳性狀C．消費者對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品應(yīng)該有選擇權(quán)D．基因工程中產(chǎn)生的可遺傳變異屬于染色體變異解析：基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，故A正確；基因工程可以按照人們的意愿，定向地改造生物的遺傳性狀，故B正確；消費者對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品應(yīng)該有知情權(quán)和選擇權(quán)，故C正確；基因工程中產(chǎn)生的可遺傳的變異屬于基因重組，故D錯誤。答案：D二、非選擇題(每小題10，共80分)11．胰島素可以用于治療糖尿病，但是胰島素被注射到人體中后，會堆積在皮下，要經(jīng)過較長的時間才能進入血液，而進入血液的胰島素又容易被分解，因此，治療效果受到影響。如圖是用蛋白質(zhì)工程設(shè)計速效胰島素的生產(chǎn)過程，據(jù)圖回答下列問題：(1)蛋白質(zhì)工程的目標(biāo)是根據(jù)人們對________________的特定需求，對蛋白質(zhì)的__________進行分子設(shè)計。(2)人工合成的新的胰島素基因在導(dǎo)入受體細(xì)胞前要先構(gòu)建________，其目的是使目的基因在__________中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠________________。在這個過程中需要________________酶的參與。成熟的基因表達(dá)載體除了含有新的胰島素基因外，還必須有啟動子、終止子以及________________等。(3)在將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌時，一般要用________________處理該菌，使之成為______________細(xì)胞，以便吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。(4)在大腸桿菌中直接生產(chǎn)的胰島素還不具有生物活性，原因是________________________________。解析：(1)蛋白質(zhì)工程的流程：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有氨基酸序列→找到對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。(2)基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞，可以使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用，在這個過程中需要DNA連接酶和限制性核酸內(nèi)切酶；基因表達(dá)載體由啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成。(3)用Ca2＋(或氯化鈣)處理大腸桿菌，使之處于一種能吸收環(huán)境中DNA的生理狀態(tài)即感受態(tài)。(4)大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對胰島素原進行加工，因此不能產(chǎn)生具有活性的胰島素。答案：(1)蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)(2)基因表達(dá)載體受體細(xì)胞表達(dá)和發(fā)揮作用限制酶和DNA連接標(biāo)記基因(3)Ca2＋感受態(tài)(4)大腸桿菌是原核生物，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能加工出有活性的胰島素12．[2019·天津高考模擬]研究發(fā)現(xiàn)，從錐形蝸牛體內(nèi)提取出的錐形蝸牛毒蛋白(Con－InsGI)能加速受體細(xì)胞信號轉(zhuǎn)換，比人類胰島素更加快速的發(fā)揮作用，因此制造這類“速效胰島素”以及利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)實現(xiàn)批量生產(chǎn)為Ⅰ型號糖尿病治療的新思路。(1)利用基因工程制造速效胰島素過程中，構(gòu)建的基因表達(dá)載體一般包括目的基因、啟動子、________、標(biāo)記基因和復(fù)制原點，標(biāo)記基因的作用是______________________。(2)為了獲得目的基因，可以通過提取分析毒蛋白中的__________序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成儀直接合成?；蚬こ讨行枰狣NA連接酶，根據(jù)酶的來源不同分為兩類，其中“縫合”雙鏈DNA片段平末端的是__________。(3)將人工合成的目的基因?qū)氪竽c桿菌體內(nèi)，一般先用____________處理大腸桿菌使之成為__________細(xì)胞，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于________________中與該類細(xì)胞混合，在一定溫度下促進細(xì)胞吸收DNA分子完成轉(zhuǎn)化過程。(4)經(jīng)過目的基因的檢測和表達(dá)，獲得Con－InsGI毒蛋白活性未能達(dá)到期待的“速效胰島素”的生物活性，導(dǎo)致這種差異的原因可能是____________________________________________。解析：(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心內(nèi)容，一個基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還有啟動子、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點，標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來，所以說標(biāo)記基因的作用是鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞。(2)蛋白質(zhì)的氨基酸序列就是蛋白質(zhì)的組成分子，即氨基酸的排列順序，為了獲得目的基因，可以通過提取分析毒蛋白中的氨基酸序列推知毒蛋白基因的核苷酸序列，再用DNA合成儀直接合成?；蚬こ讨行枰狣NA連接酶，根據(jù)酶的來源不同分為E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶兩類，E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端，而T4DNA連接酶既可以連接黏性末端，也可以連接平末端。(3)用Ca2＋處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。將人工合成的目的基因?qū)氪竽c桿菌體內(nèi)，一般先用Ca2＋處理大腸桿菌使之成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與該類細(xì)胞混合，在一定溫度下促進細(xì)胞吸收DNA分子完成轉(zhuǎn)化過程。(4)大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)沒有復(fù)雜的細(xì)胞器，不能對蛋白質(zhì)進行加工，不能形成具有功能的蛋白質(zhì)，獲得Con－InsGI毒蛋白活性未能達(dá)到期待的“速效胰島素”的生物活性，所以是大腸桿菌中基因表達(dá)獲得的蛋白質(zhì)未加工。答案：(1)終止子鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞(2)氨基酸T4DNA連接酶(3)Ca2＋感受態(tài)緩沖液(4)大腸桿菌中基因表達(dá)獲得的蛋白質(zhì)未加工13．[2019·烏魯木齊市第四高二期中]某轉(zhuǎn)基因抗病植物的培育過程如圖1所示，圖2表示PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ和ApaⅠ四種限制酶的識別序列及酶切位點。請據(jù)圖回答下列問題：(1)圖中限制酶切割DNA時破壞的是兩個________之間的化學(xué)鍵。(2)在構(gòu)建圖1中的重組質(zhì)粒時要保證目的基因被連接在質(zhì)粒上特定的________和終止子之間才能保證目的基因在受體細(xì)胞中被成功________________。(3)將抗病基因從含抗病基因的DNA中切割下來，使用的限制酶是________，同時也應(yīng)該用相同的酶對質(zhì)粒進行切割，這樣處理的原因是________________。請寫出單獨用PstⅠ切割質(zhì)粒后的片段：________________________________________________________________________。(4)轉(zhuǎn)基因抗病植物的培育是否發(fā)生了可遺傳變異？________________。藥物A會抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長，根據(jù)這一原理可以利用含藥物A的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。由此推斷，重組質(zhì)粒中應(yīng)含有________________基因作為標(biāo)記基因。解析：(1)限制酶切割的是DNA分子中特定的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。(2)為了保證目的基因在受體細(xì)胞中能夠成功表達(dá)(或轉(zhuǎn)錄)，在構(gòu)建圖1中的重組質(zhì)粒時，目的基因上游和下游必須連接有特定的啟動子和終止子。(3)根據(jù)以上分析可知，切割圖示目的基因和質(zhì)粒采用的限制酶都是PstⅠ和EcoRⅠ，這樣才能使得質(zhì)粒和目的基因的兩端具有相同的黏性末端，便于二者進行正確的拼接。根據(jù)圖2分析限制酶的識別序列和切割位點可知，單獨用PstⅠ切割質(zhì)粒后的片段為：和。(4)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組，屬于可遺傳變異；根據(jù)題意分析，欲利用含藥物A的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因(目的基因或重組質(zhì)粒)的香蕉細(xì)胞，則重組質(zhì)粒中應(yīng)含有抗藥物A基因作為標(biāo)記基因。答案：(1)脫氧(核糖)核苷酸(2)啟動子轉(zhuǎn)錄(或表達(dá))(3)PstⅠ和EcoRⅠ用相同的酶切割質(zhì)粒才能產(chǎn)生與目的基因相同的末端，便于二者進行拼接和(4)是抗藥物A14．[2019·河北高二期末]利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使外源DNA片段在組織或器官中特異性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因生物叫生物反應(yīng)器。請回答下列問題：(1)利用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)生長激素時，若要使生長激素在動物的乳汁中批量生產(chǎn)，應(yīng)選擇性染色體組成為________的哺乳動物的________作為受體細(xì)胞。(2)外源基因在血液中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動物叫血液生物反應(yīng)器，血液生物反應(yīng)器中的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物應(yīng)從________中提取。不宜用血液生物反應(yīng)器生產(chǎn)動物激素，原因是________________________________________________________________________。(3)葉綠體生物反應(yīng)器是通過將目的基因?qū)肴~綠體基因組實現(xiàn)的，葉綠體基因組有基因區(qū)和基因間隔區(qū)，為了保證原有基因的功能不受影響，外源基因應(yīng)導(dǎo)入________________區(qū)。葉綠體基因工程能避免外源基因隨花粉擴散，原因是________________________________________________________________________。解析：(1)只有雌性動物具有分泌乳汁的功能，因此若要使生長激素在動物的乳汁中批量生產(chǎn)，應(yīng)選擇性染色體組成為XX的哺乳動物的受精卵作為受體細(xì)胞。(2)血液生物反應(yīng)器中外源基因在血液中表達(dá)，因此應(yīng)該在血液或血漿中提取轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物；由于外源基因表達(dá)的動物激素可能影響受體動物的生理代謝，所以不宜用血液生物反應(yīng)器生產(chǎn)動物激素。(3)已知葉綠體基因組有基因區(qū)和基因間隔區(qū)，為了保證原有基因的功能不受影響，則外源基因應(yīng)導(dǎo)入基因間隔區(qū)；由于花粉中不含葉綠體，因此也不含已導(dǎo)入葉綠體的外源基因，所以葉綠體基因工程能避免外源基因隨花粉擴散。答案：(1)XX受精卵(2)血清或血漿外源基因表達(dá)的動物激素可能影響受體動物的生理代謝(3)基因間隔花粉中不含葉綠體，因此也不含已導(dǎo)入葉綠體的外源基因15．[2019·江蘇高二期末]中科院動物研究所利用CRISPR/Cas9技術(shù)，向豬的基因組內(nèi)插入一個解耦聯(lián)蛋白基因(UCP1)經(jīng)過基因改造的豬瘦肉率高、脂肪少、抗寒能力強。下圖是基因改造過程中涉及的相關(guān)限制酶及酶切位點。請回答下列問題：(1)圖中的抗生素抗性基因的作用是作為________基因，以便于篩選。為了獲取重組質(zhì)粒，除了使用限制酶外，還需使用________酶。(2)重組質(zhì)粒上應(yīng)有________識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動解耦聯(lián)蛋白基因(UCP1))轉(zhuǎn)錄，該部位稱為________。(3)在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，為避免出現(xiàn)質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化，常用________________兩種限制酶同時切割質(zhì)粒和UCP1基因。(4)獲得目的基因后，常采用PCR技術(shù)擴增目的基因，在此過程中，由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA單鏈，只能從________端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。(5)科研人員通過________法，將基因表達(dá)載體導(dǎo)入豬的受精卵中?？赏ㄟ^________技術(shù)，來檢測UCP1基因是否已導(dǎo)入到豬受精卵細(xì)胞。解析：(1)圖中的抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因，以便篩選含有目的基因的受體細(xì)胞。為了獲取重組質(zhì)粒，除了使用限制酶外，還需使用DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒連接。(2)重組質(zhì)粒的組成包括目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因等，其中的啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動解耦聯(lián)蛋白基因(UCP1)轉(zhuǎn)錄出mRNA。(3)圖中質(zhì)粒上和含UCP1基因的外源DNA中含有的酶切位點相同，而且在UCP1基因的兩端分別存在BamHⅠ和HindⅢ的識別位點，因此在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，使用BamHⅠ和HindⅢ這兩種限制酶同時切割質(zhì)粒和含UCP1基因的外源DNA，可以避免出現(xiàn)質(zhì)粒和目的基因(UCP1基因)自身環(huán)化。(4)利用PCR技術(shù)擴增目的基因的過程中，由于DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA單鏈，因此需要加入引物。(5)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入豬的受精卵中，應(yīng)采用顯微注射法。UCP1基因?qū)儆谀康幕?，檢測目的基因是否己導(dǎo)入到豬受精卵細(xì)胞中，應(yīng)采用DNA分子雜交技術(shù)。答案：(1)標(biāo)記DNA連接(2)RNA聚合酶啟動子(3)BamHⅠ和HindⅢ(4)3′(5)顯微注射DNA分子雜交16．[2019·浙江高二期中]嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β－葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶，開展了以下試驗。(圖中啟動子與RNA聚合酶結(jié)合，終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號的DNA序列)(1)________擴增BglB基因時，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。(2)如圖為質(zhì)粒限制性核酸內(nèi)切酶切圖譜，為使獲得的BglB基因與質(zhì)粒載體連接，BglB基因兩端需分別含有________和________不同限制酶的識別序列。(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，為了促進該過程，應(yīng)該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是________________________________。(4)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為________________________________。(5)下列有關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶的敘述中正確的是()A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有2個B．限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大C．—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的黏性末端堿基數(shù)不同D．只有用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，才能形成重組質(zhì)粒解析：(1)PCR技術(shù)可在體外大量擴增目的基因。(2)圖中質(zhì)粒上有多個限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點，但用PstⅠ切割會破壞抗生素抗性基因(標(biāo)記基因)，用KpnⅠ切割會破壞復(fù)制原點，用XbaⅠ切割會去除終止子，用EcoRⅠ切割會破壞終止子，用HindⅠ切割會破壞啟動子，為使獲得的BglB基因與質(zhì)粒載體連接，為了防止目的基因和運載體自身環(huán)化，應(yīng)該用兩種限制酶切割，則BglB基因兩端需分別含有NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識別序列。(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，為了促進該過程，應(yīng)該用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，是大腸桿菌處于感受態(tài)。(4)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。(5)用限制性核酸內(nèi)切酶切割一個DNA分子中部，獲得一個目的基因時，被水解的磷酸二酯鍵有4個，A錯誤；限制性核酸內(nèi)切酶識別的序列越短，則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大，B正確；—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制性核酸內(nèi)切酶切出的黏性末端堿基數(shù)相同，都是4個，C錯誤；用不同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒，也能形成重組質(zhì)粒，D錯誤。答案：(1)PCR(2)NdeⅠBamHⅠ(3)增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性(4)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(5)B17．[2019·湖北高二期末]某植物抗蟲基因轉(zhuǎn)錄的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知?，F(xiàn)利用PCR技術(shù)擴增該基因，簡要流程如下圖所示，其中①～③表示有關(guān)過程，Ⅰ～Ⅲ表示有關(guān)物質(zhì)。請回答下列問題：(1)過程①反應(yīng)體系中需要加入________酶，生成雜合雙鏈物質(zhì)Ⅰ。(2)利用DNA末端轉(zhuǎn)移酶催化過程②，使cDNA單鏈左側(cè)末端增加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列AAA(A)n，進而利于過程③擴增獲得目的基因序列Ⅲ。在過程③反應(yīng)體系中還需要添加新的引物，新引物的堿基序列應(yīng)該是________________。(3)得到物質(zhì)Ⅲ后，通常還需在其兩端增加________________序列，以便切割后與相應(yīng)的運載體重組。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌之前，還需用________________處理大腸桿菌。(4)在利用PCR技術(shù)擴增某DNA中的某一目的基因時，需要用到的酶是________________，依據(jù)的原理是________________。解析：(1)過程①以mRNA為模板合成DNA屬于逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶催化，生成雜合雙鏈物質(zhì)Ⅰ(一條脫氧核苷酸鏈，一條核糖核苷酸鏈)。(2)利用DNA末端轉(zhuǎn)移酶催化過程②，使cDNA單鏈左側(cè)末端增加AAA(A)n，故在過程③PCR反應(yīng)體系中還需要添加新的引物，即與左側(cè)AAA(A)n互補的TTT(T)n作為引物。(3)得到物質(zhì)Ⅲ即目的基因后，通常還需在其兩端增加限制酶序列，以便利用限制酶和DNA連接酶構(gòu)建基因表達(dá)載體。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌之前，還需用鈣離子處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)。(4)PCR擴增時需要耐高溫的DNA聚合酶參與，PCR的原理是DNA雙鏈復(fù)制。答案：(1)逆轉(zhuǎn)錄(2)TTT(T)n(3)限制酶識別Ca2＋(CaCl2溶液)(4)熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)DNA雙鏈復(fù)制(DNA復(fù)制)18．[2019·河北開灤第二高二期末]某植物細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因，可以合成一種抗TMV蛋白，使葉片對TMV具有抗感染性。煙草是重要的經(jīng)濟作物，由于TMV的感染會導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如下圖所示：(1)①過程涉及有____________酶。獲得的DNA必須在兩側(cè)添加________。(2)在過程⑤培養(yǎng)基中除含有卡那霉素及植物必需的各種營養(yǎng)成分外