天然產(chǎn)物制備技術(shù)戴富寶

戴富寶2007年2月天然產(chǎn)物制備技術(shù)制備色譜所謂制備色譜是指待分離的樣品數(shù)量在g與g之間，分為分析型、半制備、制備型三種。制備色譜對于制備型高壓液相色譜分類方法有不同觀點：例如對于高壓液相色譜snyder和kirkland（1979）根據(jù)色譜柱能分離樣品的量將其分為分析型（多孔型吸附劑，1～2mg，15min可分開兩個分辨率Rs＝1.25的化合物，回收純度>99%）,半制備型（100～200mg）和制備型（0.5～1.0g）三種。還可增加生產(chǎn)型色譜，即指那些樣品量在幾百克到幾千克之間的分離。Herbert（1991）限定制備型色譜為樣品量在克數(shù)量級，柱直徑在25～150mm之間的分離，而生產(chǎn)型色譜為所用柱直徑大于150mm的分離。所以對制備型一詞范圍，分離樣品量之間存在顯著的差別。制備色譜選擇制備型分離系統(tǒng)時，不僅僅要考慮待分離樣品的量，還應(yīng)考慮擬進行的分離的種類。充分考慮上述因素并正確選擇色譜柱、尺寸、固定相種類以及流動相流速等參數(shù)才能保證分離和制備的成功。根據(jù)以往工作經(jīng)驗，往往采用兩個步驟來完成分離工作，選用低分辨率、快速分析柱進行粗分（其中可除去色素、鞣質(zhì)等雜質(zhì)）再用HPLC高分辨率色譜柱進行細分。一、基本原理液相色譜的效能取決于分離速度和分辨率，對于制備型加壓液相色譜而言，上樣量是一個重要指標(biāo)。分辨率速度載樣量基本原理對于某個分離參數(shù)進行優(yōu)化，往往會影響其它分離參數(shù)，例如：增加洗脫液流速會降低分辨率（Rs），分辨率會因上樣量過大而下降，上樣量過大的原因包括樣品溶液的體積過大或濃度過大，色譜柱的載樣量又取決于柱的直徑、長度、固定相顆粒大小以及裝填的緊密程度。對于偶爾的一次分離而言，其主要的目的是得到一定量的某個化合物，達到一定純度和回收率。而對于生產(chǎn)規(guī)模的色譜分離而言，單位時間內(nèi)可分離的樣品量是一個關(guān)鍵指標(biāo)，單位時間獲得樣品量即產(chǎn)量，取決于色譜柱直徑和洗脫液流速等參數(shù)，生產(chǎn)能力和樣品純度是兩個相互矛盾的因素，也就是說分辨能力并不是制備液相色譜考慮的首要因素。制備液相色譜應(yīng)首先具有經(jīng)濟快速地生產(chǎn)所需產(chǎn)品的能力。加壓液相色譜中可發(fā)揮下列兩方面的作用（a和b）或其中之一：a、加快洗脫液流速，提高分離速度，因為敏感化合物在長時間色譜分離時，其結(jié)構(gòu)可能會發(fā)生變化，縮短分析時間最大優(yōu)點在于避免這種變化。b、允許在分離過程中使用顆粒度更小的固定相，獲得更高分辨率。微克級至毫克級樣品一般用于波譜測試確定結(jié)構(gòu)毫克級樣品可用于進一步的結(jié)構(gòu)鑒定，化學(xué)反應(yīng)和某些生物活性測試，克數(shù)量級樣品可用于進一步生物活性測試、藥理、毒理實驗，作為合成或半合成工作原料及標(biāo)準(zhǔn)品。此外，所介紹的制備液相色譜技術(shù)也可用于分離超純標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)記化合物，痕量雜質(zhì)，藥物分解產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物，還可用于生物高分子（蛋白質(zhì)、多糖等）及多肽類化合物的分離。二、分離方法的建立和優(yōu)化為選擇制備型加壓液相色譜的分離條件可采用下列操作步驟：選擇液相色譜系統(tǒng)。在某些情況下，可以薄層色譜分析來初步確定分離條件（Heyward和munro,1980），即用硅膠薄層來確定正相柱條件，用反相硅膠薄層來確定反相柱條件。當(dāng)選擇該方法時，要牢記薄層色譜中硅膠的表面積是柱色譜中硅膠表面積的兩倍，所選的展開劑條件應(yīng)使樣品Rf值不大于0.3少量樣品在分析型液相色譜柱上的分離。在找到適當(dāng)?shù)谋由V分離的展開條件后，應(yīng)將該條件轉(zhuǎn)用于分析型液相色譜。利用這種初步的分析來獲得正確分離條件的方法可以節(jié)省時間、樣品和溶劑。操作步驟優(yōu)化分析型液相色譜條件，應(yīng)尋求較小容量因子（K’），其理由在于分析型液相色譜洗脫劑系統(tǒng)轉(zhuǎn)換為制備型液相色譜系統(tǒng)時，經(jīng)常導(dǎo)致分離效能（分離度）下降。小的容量因子意味著分離時間縮短和出峰體積縮小。良好的分析型液相色譜分離通常是成功進行制備型液相色譜分離的先決條件。在找到分析型液相色譜分離條件后，通常將分離度調(diào)至高于分析型色譜所需水平。這樣可以與制備型色譜分離過程中的過載相適應(yīng)（圖5.3）。在進行反相液相色譜分離時，增加溶劑系統(tǒng)中水的含量可達到這一目的。操作步驟操作步驟轉(zhuǎn)換至制備液相色譜系統(tǒng)。（Gareil1982b；Cox1988）將分析型液相色譜條件直接用于制備型液相色譜分離時，所用壓力應(yīng)為分析型色譜的三分之一左右（Johnson1978）。Bidlingmeyer（1987）詳細介紹了經(jīng)過薄層色譜→分析型高壓液相色譜→制備型高壓液相色譜，來選擇分離條件的方法。近期出現(xiàn)一種趨勢，將分析型大小填料直接用于制備型液相色譜柱，這將無需對流動相作較大的改變。Waters公司生產(chǎn)的Symmetry系列柱（內(nèi)裝100?。┣蛐翁盍?，即是這種色譜柱的代表。操作步驟純化物質(zhì)的回收。所得物質(zhì)的分析，可以薄層色譜或分析型高壓液相色譜進分離物質(zhì)進行純度和定性分析。分離結(jié)束后，可采用如下程序洗脫色譜柱（Simpson,1982）。正相柱：丙酮→水→甲醇→丙酮→四氫呋喃→二氯甲烷。反相柱：甲醇：四氫呋喃（1：1）或用純甲醇沖。三、色譜柱制備型加壓液相色譜系統(tǒng)的關(guān)鍵部件是色譜柱。所選用色譜柱大小應(yīng)取決于待分離樣品的量（Hupe1981；Verzele1988）。幾種經(jīng)典色譜柱的直徑和上樣量的關(guān)系列于表5.1中。色譜柱色譜柱的其它一些參數(shù)對于分離的成功也至關(guān)重要（圖5.4）。影響分辨率Rs的主要參數(shù)是選擇性α和容量因子k’，增大α值（選擇性或相對保留時間）對分離的成功非常主要。色譜瞎柱增大斧柱的情直徑笨意味攔著可母以承攏載更標(biāo)多樣垃品、間增加鳴產(chǎn)量過。增呼加色隊譜柱州長度底，意嬸味著洽可以拆加入美樣品的量和絹分辨筋率增素大。悟半制察備色臭譜柱嘗我們扎認(rèn)為Bo懸nd溜ep訪ak10m（3.鉗9掙x銀30園0究mm）色芹譜柱狐效能功較佳匙。當(dāng)處時天燒然藥黑化教耐研室槐做了雕七個聰研究搭生，蛇得了蛾好幾能個大容獎，號立下帥了汗負馬功搭勞。四、界固定幅相常用鳥固定侮相可扇分為家液－澆固（矩吸附萍），取例如兼硅膠瞧、氨粒基、藥二乙僻醇等鴿液－妥液和C1虎8,曉C域8,溉C潔4鍵合奪相等書，凝璃膠和櫻離子旦交換撫，前精者為基排阻楚色譜停，后慮者為借陽離徒子、駱陰離唇子交滿換色河譜（演強酸窗、弱暮酸、錦強堿邊、弱景堿等方）另帆外還雪有NH蒜2柱等使。選擇薄固定社相應(yīng)捷注意吉以下陽幾點坡：顆?？薮笮”考捌溲涂讖缴V晉柱長旋度操作州壓力固定牙相固定杯相恰當(dāng)餐地綜棕合考焰慮上妨述因主素，賽才能蟲得到辣好的吊分離部效果呀。增辨加色井譜柱扭長度朽可提祥高分自辨率殲，但尊需施宇加更屬大壓雖力，夢減少給固定苦相顆嫌粒，咬增加餡分離忽度，灣樣品庸載樣站量但協(xié)增加語操作仿壓力績。一般覺來說紋，球甲形顆每粒優(yōu)插于不健規(guī)則御形狀慎顆粒祥。它諒具有騙較高前機械丸強度突，不擇易破峽碎，液裝柱滴重現(xiàn)骨性好塘，可開增加錫樣品斗在柱搭中的酷滲透貌性，字峰對蓬稱較番好、右壽命呆長等遺優(yōu)點味。但辜球形遭固定蘭相價耍格較為高。柱層板析顆筑粒在40－63m較易儀于干辰法裝框柱，慌載樣嶺量大金，價碰格適籃中，狹能進暴行有騎效分踩離，菜最適四宜顆細粒大禽約為15m左右佩，顆憐粒減棚小增勤加N,Rs，但沿裝柱脊時需銷更高響壓力皆。HP且LC系統(tǒng)受中顆嫌粒大森小為10m，5m，3m，1.抖8m等，興其分壓離度煌好，允易于概純化稀樣品數(shù)，對疲眾多釣天然腸藥物平樣品煉分離椒、純近化和寨制備萍是一讓條較監(jiān)好途務(wù)徑。五、培裝柱原方法裝柱桶方法薯一般取來說灑，顆侵粒度泊大，食干法顛（頓右擊法旅）裝獄柱（20－30m），射小于牧此顆鴉粒裝鄰柱較脊困難帽，一孫般采澆用濕大法裝渴柱（喜即勻罵漿裝芹柱）腫。勻只漿裝帶柱需霉一個突高壓徑裝置青、勻顧漿罐駝、與點填料酬比重筑相近肢溶劑嗚（二哄氧六學(xué)環(huán)、拖四氯搞化碳飛），壯其方遠法根俊據(jù)柱汗子內(nèi)幸徑和瞞長度昂算出助裝填娛量，祖加入嚼溶劑串，超威聲，匠使成偏均勻傻勻漿蔥（近寫透明再），角將柱賭子上蘭螺絲筆卸下講（經(jīng)煌清洗晃、烘南干、帳干凈姨空柱盤），幼連到掀勻漿雕罐，寇然后妖將勻習(xí)漿到鍵入勻塑漿罐揚，擰露緊灌州蓋，夾連接疼氣動氏泵螺幫絲，坑一瞬泄間壓捧下勻案漿（40保0公斤韻），鐮勻漿俯中溶鬧劑經(jīng)門柱子大從柱零下口搜濾網(wǎng)絕快速醋濾出塔，而工填料陳均勻東下沉炸至柱亂中，排再補裳打一恨次高淹壓（40凳0公斤域），族放置與半小泄時直朗到打棍緊為者止。丘柱裝地好后溉，放糊入高陵效液啟相色甘譜儀賴測試歌柱效甩和分旺離度床，柱鑄子即侵制備條完成切。以起上是介裝分擊析柱蠻方法奪，制桌備柱芹也可末用同列法裝嫩柱。六、爺加樣在將淘樣品帽加到柜制備鉛柱之菜前，縮慧需考走慮以墻下因束素：樣品代的制盆備方節(jié)法；溶劑魂樣品路的溶撥劑；樣品斥重量茂；樣品擾體積甚；上樣游方法左；色譜迷柱。加樣通常佛應(yīng)盡匪可能用選用怠流動屋相來怪溶解揚樣品英，樣穴品在白流動構(gòu)相中纖要有暗良好孩的溶抹解度琴。如質(zhì)果樣亞品體姜積太撫大，矩分辨滲能力爬就會帝下降東；另橫一方懸面，堡如果澇樣品加過濃翠，則沖有可糖能在輪柱頂榜部形蝴成沉逐淀，旦壓力堅飆升枯而停伏泵。責(zé)為了巾每次物能得批到更河多的仰樣品奇，還哀是應(yīng)芬在小閣體積勻的流波動相擋中溶泰解較將多的宅樣品捆。將哈成功緊的分距析型努分離球放大覆為制因備型份分離塊時，逆可能戀會遇昂到樣危品的即溶解簽度問本題。文對于壯一些剪在水夕中難納溶的冤樣品雁，在帖進行忌反相HP蓄LC分離哨時，瓣就經(jīng)府常遇釀到上治述問磁題。例如株植物弄毛兜情鈴根枯部的衣粗提晚物在霜甲醇順－水哲系統(tǒng)挺中溶堆解度箭差，舉為從跨提取換物中膽獲得哨馬兜盆鈴酸鳥，在HP受LC分離時前，陳先將努樣品擴溶于擺甲醇海－四畜氫呋奮喃1:夾1的溶鋼液中規(guī)。加樣際量如叔何放趙大當(dāng)分匹析規(guī)錄模的涂分離蠻優(yōu)化徹后，殘就要塘研究踐在分機析柱稼上的炎上樣徐量，駕以確押定某塌種填疑料的椒容量科。因資為大綁規(guī)模廚的分港離應(yīng)塘該與景小規(guī)擠模的勞分離姜相同教，所預(yù)以樣弱品最棚大上央樣量昂將取絮決于金分析割規(guī)模遺分離圾的復(fù)饑雜程理度要決州定待況純化凳或分蓋離的擊樣品望含量條是多駕少需要恰純化慘的樣春品含先量一贏旦確柜定后賠，可草以用公簡單寇的方盜程式忙求出需純化茂所需志色譜慨柱的鋒大小不同羞規(guī)格階柱上周樣品躬量應(yīng)用介求得糧的放書大因殊子乘曠以分杠析型素柱的卡上樣賭量，豆以預(yù)工測大洗直徑敞柱的軟上樣挺量。勇表1列出房誠了?；赜貌恍Ｍ?guī)章格柱抗上樣姿品量診的指舉南。很多覆因素慌可影陣響制彼備柱象的容淹量。疼下列闖一些懼影響浩因素側(cè)需加赤以考拼慮：保留域值大市的物份質(zhì)容卻量高樣品霸混合積物簡我單容囑量高阿（例拘如商研陸皂頌苷甲瓜、乙徹、丙斤、丁……）梯度桌分離磨比等托度分炸離時卸容量秤要高分離適度要聚求越知高，士容量孤越低上樣驅(qū)體積帳會限塑制容惕量大鵲小樣品未的溶寄解度東會限侄制容辨量大兼小選擇周不同聰?shù)臉硬ㄆ啡芑I劑也鼓會影胡響容趁量大往小以3.狠9×濾15困0m震m色譜裹柱放賄大到19允×1腦50烏mm色譜砌柱的滴情況導(dǎo)舉例弱：用放旋大因影子可自以預(yù)應(yīng)測大攏柱上滑（填割充柱筍與分粱析柱晃內(nèi)裝舍相同狼的填儲料）卵大約燒可負聽載24～14疤2m傭g樣品紫，此起范圍漫是根吼據(jù)分橡析柱勒（內(nèi)料徑3.秒9m鑄m）負盲載量1～6m居g由放阻大因影子計絮算而傲來。流量壩的選胡擇計算辱的流舟量用促于制跡備柱顧時，近可使氧流動雕相用唇在分珍析柱軌上有絕相同想的線拍速度糕。但是襪合適他的流泛量還徐取決飛于色割譜柱色的內(nèi)爛徑大續(xù)小。享色譜麗系統(tǒng)習(xí)還受梁柱長莫增加歐及填謊料更溉細引股起反室壓增突加的掉制約魚。梯度伶分離階時間(G聯(lián)D)得到孟的梯斷度分忌離時狀間可認(rèn)以輸碗入制飄備泵廚，使歐制備痕分離郊在此休時間蛛內(nèi)流晌經(jīng)制餡備柱廣，柱屋的柱犧體積袍數(shù)與余相應(yīng)咽時間臉流經(jīng)暈分析罷型柱肌的體受積數(shù)掠相同棋。上樣嶼方法約：用注卻射器肢進樣;靜止對進樣鳳（泵訪停）;六通掩閥進科樣;主動賠閥進執(zhí)樣;輔助戒泵進折樣;固體扣上樣系。上樣畫方法固體順上樣賴是解悄決樣槽品低驗溶解供度的攏一種困方法估，可贈將樣血品的葵干粉蚊與柱鵲填料歸混和顯，加秤入分獎離柱于前的棚前置遲柱中餅。對總于難蜻溶的碧樣品見（5m廊g/化ml以下袍，每耗份樣山品需黑混入5～10份填愉料）Mi叫l(wèi)l結(jié)er等（19牙89）曾戒報道軌用前零置柱控方法個分離0.濕1～1g的樣倘品。七、使高效稱液相冒色譜簡制備橡色譜買儀器1、高河壓泵勤（略哨）2、檢襲測器絕大蓮多數(shù)勻商品前檢測噴器都秩用于掘分析醫(yī)型工佩作，美它們丟存在諷易飽延和的傘問題央（負則載量緣瑞受到鐘限制估）并袖不適經(jīng)合制瞧備型償分離匪。一悉些專趟門為句制備開型分究離而破設(shè)計騎的帶朱有樣岔品槽呢的檢帝測器藏也有幫出售朋，如Go益wM追AS公司霞出產(chǎn)芒的80－80昂0L溫C-應(yīng)UV檢測剝器，歡其中晨洗脫挪液以賓薄膜薄形式綿流經(jīng)蜂石英笛槽（Le蒙ut哀er啄t19孝84），阿使用床此檢秧測器薪流速器可達50皂0m遍l/鮮mi霉n。高效躲液相宮色譜章制備船色譜芬儀器帶有0.烤05肚mm長度熔的樣醋品槽魚的紫孝外檢誓測器笑可承童受高但達20夠0塵ml霞/m熟in的洗唯脫液叼流速毫。這出種流跪速適判合中斃壓液允相色虎譜分祥離。含而我蚊們研茂究半重制備鑰高效躁液相步色譜該流量絡(luò)一般核在20－30侵ml之間洲，尤萄其是2－8m陣l之間暫最佳統(tǒng)。目明標(biāo)化福合物器分離繁度高己，分番離純譽化樣掏品量古也較他高。疤例如裙商陸少皂苷俊甲，籃收集賽了一千個星自期，絹得到40男0m伙g，除騰了作居波譜你分析工外，什還提樣供作就藥理遷實驗附。高效跳液相慢色譜夕制備授色譜繼儀器HP急LC的檢濫測器勻種類物不多逮，兩技種最府常用枕的技拍術(shù)——紫外屬和示宅差檢免測器婚在使我用上丟有其經(jīng)局限語性。蛋示差乎檢測錢器當(dāng)抱然對乳無UV吸收欠物質(zhì)論能檢墨測，此但對泳溫度喇很敏守感，修靈敏核度低監(jiān)，對團少量丹物質(zhì)扮檢測熔不理駁想而息且不奪能采太用梯噸度洗止脫方坐式。戰(zhàn)對于耗無紫樂外吸往收的孟物質(zhì)轉(zhuǎn)一種圈日益弄受到顆歡迎選的檢煙測方咳法是暗蒸發(fā)蕉光散味射檢荷測器泡（EL丘SD）,可用秒于揮度發(fā)性優(yōu)成分茶，并狂可在辜梯度坑洗脫艇條件坐下檢能測。訊該檢片測方蘋法需窄要通葵過加永熱的具方法羅使溶俗劑揮非發(fā)，完因此肅需要茅安裝晃一分?jǐn)亓餮b倒置，嚴(yán)對易披分解叮的成見分另然外收作集。也可妙用薄爹層色望譜對士高濃強度的獸流出店液各荷流分自進行飽檢測客。另毀外也紀(jì)可用特質(zhì)譜蜘對各經(jīng)流分卷進行金定性歉和定舊量檢向測。八、灣流動預(yù)相的句選擇1、流英動相斤的選鞏擇是乖分離斥目標(biāo)崗化合擇物的犧關(guān)鍵謠。根蹦據(jù)，堤只要攻選擇弄最佳失配比罩流動足相，增加糊就可搶大大僻增加怠混合潛物分戲離度賞，其Rs>1恐.2暮5以上飯，有憂如下碧好處母：分離詞得目令標(biāo)化位合物遵純度溝高上柱萬樣品蠅量大收集技到純齊的目擺標(biāo)化青合物山量多波譜腐鑒定黨一次睛成功流動便相的須選擇2、選疼擇流巾動相烘分方枕法。配例如特反相C1己8柱，貝流動秧相如逐甲醇項和水樂的比旺例可歲用0～90％梯阿度的默方式女來確倉定，煤找到甘最佳舍分離百時的棚甲醇逮－水揪配比家，然范后用屑該比饑?yán)苁┫磪捗撨M南行樣穩(wěn)品分典離、控收集丸。3、選求擇洗梨脫溶車劑純美度要示高，夠否則躲會帶駁來雜掩質(zhì)，逮干擾堡分離任純化蘿。另暴外溶長劑在策末端壩透過蝴率一攪定要悲高，夏一般緞來說啊，使底用HP咐LC溶劑饒可達存到上榮述要削求，轎如使利用分供析純鉗甲醇義，在25正4n悄m后透彈過率插還可顫以，>2館30孔nm時基書線就極會漂遮移。閉特別按在梯股度時程更為毀嚴(yán)重運。4、流斷動相伯中非朋揮發(fā)送性添游加劑筐（如統(tǒng)離子膝對色于譜、賣置換呢色譜您）會典在產(chǎn)宗物回避收時握引起吉麻煩疲。要磨采用本揮發(fā)律性緩予沖液葛來改辦進分返離效換果，售又易香于將金其除出去。棗例如性，Mi復(fù)er跟zw鋤a等（19春85）利六用半承制備制型18烷基悟硅膠愁柱，依以乙摧腈－0.貌01料mo諒l/鐘L乙酸刪銨（PH尿4嘉.0緩沖查液）掙（40：60）為史洗脫六劑，女分離疾得到亡大環(huán)備內(nèi)酯烤抗生嫩素。九、售被分竊離色啞譜圖裕的收殺集方感法1、邊孤緣切揮割和騰循環(huán)碰色譜開分離當(dāng)對潤兩個朽多多嚷個相柿距很虜近的宵主要紹成分坊進行包分離你時，悠若色啄譜系袍統(tǒng)的苗選擇煤性不趙足以盆將該墻混合少物分恨開，府此時元可采筒用循和環(huán)色惜譜分扭離（Ch翁ar蛇to臣n等19猴94，圖5.皮6）。被分怠離色社譜圖懂的收鑼集方孩法在確敬定最顏佳分鼻析型嗚分離籮條件折后進來行制蝴備型妙色譜輝分離冤，通買過切插割相醒應(yīng)色貸譜圖休的前墻部和雞后部儲可獲嫩得純鐘的a和b成分稿。利位用此廈法，洲對a和b成分捐的混梁合物猛（循肯環(huán)組定分）告重新野進行圓分離叼，可趁進一藏步獲鎮(zhèn)得純鼻品。財如果夠一次輛循環(huán)獲分離縮慧還不牽能將a和b完全可分離卵，則提可重峽新進牌行循枯環(huán)色役譜分醬離。胡實際孔上，星循環(huán)增色譜盞分離扇與增戒加柱付長度俱的效獵果類氧似。圖5.蔽6中，喉看到法循環(huán)緞組分歐分離捉色譜盡帶變護寬是棋因泵輔內(nèi)溶街劑體獸積過嘩大等燥柱外劫因素航引起挖，應(yīng)艦將其蠻檢測裙在最武低限肉度。短循環(huán)成色譜濟分離印中最暗先被逗洗脫杰的峰嶄不應(yīng)那與上暈次分乒離中于最后暢出的雀峰重耽疊。被分恒離色月譜圖雀的收吊集方江法循環(huán)香色譜金分離煉需具吳備兩孤個基欠本裝之置：－密稅閉進竟樣－交個換柱鏈循環(huán)前一嗚種是障將流慌經(jīng)檢衰測器割的色浪譜柱做流出糕液通移過多很向閥服連于始泵的礦入口凳。后宰一種框是連彼接兩斗根色術(shù)譜柱侮，使暢洗脫以液從車第一們根柱近直接蒙流入婆第二陷根柱性。必雅要時浙，在河收集侄到純葬的樣肯品前午，通饞過閥陶門控若制，許可將墻由第侮二根啟色譜忌柱切微割得調(diào)到的闊樣品觀再加型到第爐一根剖柱上切。該給方法慚的優(yōu)津點在軍于樣跟品只滲流經(jīng)侍泵一凝次。2、色澡譜柱搭的過漫載和姐中心詠切割為提抄高制揭備型妄分離寨能力旬，可賣使色顛譜柱洽超載膏（含另量和括濃度寄超載匹，非督容積私超載賞），充由于刷分離徑不是婦在線絞性條嗽件下嘴進行融，最綿佳的襲分離咸條件吊無法暗再從薯分析能型數(shù)害據(jù)來架控制遺。在打利用聞“中蛙心切魯割”塔技術(shù)叨進行肥分離絹時，欣需避且免主女要色鎖譜峰懸前后死兩端迎微量毫組分扭的污促染（描圖5.漠7）。被分鳴離色仙譜圖吹的收酬集方壓法被分臥離色妹譜圖傅的收料集方鈴法用這秘種方陵法進澆行分暖離，稻可能艷損失健少量a，但a的產(chǎn)怪量卻丟可提銹高。除在實搖際分由離過瞧程中脅，可碗逐漸冠加大抗上樣上量直旨到達證到適腎當(dāng)?shù)膸斐d置程度演，并塌通過覽中心遭切割授得到愁一個吳不受勢色譜欄峰前碰后雜舒質(zhì)的勻污染租的產(chǎn)仍物。為了年達到我最大科承載篩目的熊，樣躬品應(yīng)涼盡可旬能溶散在比再流動牽相溶依解能役力差煮的溶協(xié)劑中貴。被分店離色荒譜圖含的收情集方廈法Fa牌rm煤aKa窯li而di窮s和Mu后rp懷hy（19付84）利添用中便心切逆割法耐，從癥大豆所中分嫌離異械黃酮央類成丹分染董料本鮮苷ge僑ni練st深in和大占豆苷de勉id射zi五n。如儲圖5.互8所示追，通喇過切槍割超坡載上貿(mào)樣的撿色譜叔得到這一富挎含a的成田分，撿對其品進行蕉一次奧分離膝即可吊得到鼻純化羽合物a。被分孫離色間譜圖讀的收漿集方乎法3、柱牢切換柱切閉換一怕詞包纖括改榴變流佛動相拜方向模的所芹有技徒術(shù)。嫌利用撿這類冬技術(shù)標(biāo)可使助一根什色譜瞎柱的決洗脫憂液流跪入另廣一根梳色譜差柱（Ra迅ms希te六rn般er19年88）。謎該技岔術(shù)具飛有以旅下優(yōu)舍點：分辨公能力薯和選旁擇性裝得到升提高樣品噸可在排運轉(zhuǎn)能中純肝化將第召一根趙柱得凝到的傳部分非純化逝的流陳分通簽過后鼠續(xù)的累柱色欄譜分袋離（毅包括聯(lián)循環(huán)題色譜趴可得嶺到10議0％純縱度的您樣品抹）微量南樣品證可得局到富持集減少珍用于波清洗拾色譜么柱等洗所花傷的時脊間。被分愿離色派譜圖裙的收芹集方愉法利用源轉(zhuǎn)換氏閥可懼將第榴一根湖柱的注流分嗽注入蛇第二鋼根柱葉。在克第二伙根柱繁進行找分離誼時，閥可同蝦時用基溶劑膏清洗喇第一跑根柱升（Ra胸ms尚te村in婦er19繪84），膨用該腎法進蓄行超驗載分糾離時罪十分葬有用債。因湯中心徐切割擋所得葉組分熔可立墾刻被瘡?fù)度胧返诙案遥箠Z其得節(jié)到進厘一步剖純化玻。Li獎tt區(qū)le和St角ah討el（19則84）利劣用該村方法勉從菊談科植巖物甜漢葉菊慕葉子死的水貍－甲亡醇提蠢取物淚中直峰接分艱得甜棵味劑眼甜葉尾菊苷蛙（St津ev跡io領(lǐng)si拋de）被分箭離色圣譜圖遷的收制集方晨法被分扣離色象譜圖燦的收冷集方御法關(guān)于也循環(huán)斤高壓枯液相語色譜踏儀，桶日本在東京Ja莖pa疼n珠An經(jīng)al余yt飛ic調(diào)al筐I騰nd竭us詢tr黑y公司椒已能絨生產(chǎn)LC安-2迷0型。乳利用慣這種鳳型號繳的儀閱器進望行分虜離已釘有報部道，屆例如Fi畏rm悟an等（19塊88）利透用兩飼根Ja興ig譜el聚苯董乙烯盯色譜鉗柱以旨氯仿留為洗續(xù)脫劑柄，經(jīng)驅(qū)過95次循夸環(huán)分侵離，封從姜漸科植光物根擾莖的毅精油廉中分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