免疫學(xué)檢測原理及臨床應(yīng)用

相關(guān)幫助需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問Fantibody全球抗體搜索引擎:fantibodyfantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺需要相關(guān)的實(shí)驗室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待您的加入*目前一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)內(nèi)容提要：概念基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測方法免疫細(xì)胞檢測免疫分子檢測免疫學(xué)診斷與檢測掌握：原理臨床應(yīng)用*目前二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)概念：免疫學(xué)細(xì)胞生物學(xué)分子生物學(xué)

應(yīng)用：免疫相關(guān)疾病的診斷、病情檢測和療效評價等?？乖贵w免疫細(xì)胞細(xì)胞因子檢測理論和方法定性定量*目前三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)第1節(jié)基于抗原-抗體反應(yīng)

（antigenantibodyreaction）的檢測方法一、原理二、反應(yīng)的特點(diǎn)三、影響因素四、基本檢測方法*目前四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)

一、原理1、抗原抗體反應(yīng)的特異性2、抗原抗體反應(yīng)的可見性

抗原抗體按適當(dāng)比例結(jié)合，形成肉眼可見的現(xiàn)象。*目前五頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)應(yīng)用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾?。簜?、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體——診斷自身免疫?。篠LE、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關(guān)抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原：確認(rèn)運(yùn)動員是否服用興奮劑*目前六頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)特異性帶現(xiàn)象與可見性可逆性取決于抗原表位與抗體高變區(qū)結(jié)合部位空間構(gòu)型的互補(bǔ)的程度親和力（affimity）親合力（avidity）*目前七頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見性（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)*目前八頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)可逆性：（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)低pH值高濃度鹽凍融等AgAb解離取決于親和力大小*目前九頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)*目前十頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素電解質(zhì)酸堿度溫度抗原抗體的性質(zhì)*目前十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)1.電解質(zhì)：親水性---------疏水性失去電荷------發(fā)生凝集（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)2、酸堿度：最適pH值：6—8假陽性假陰性（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)3.溫度：適當(dāng)溫度------增加碰撞機(jī)會加快結(jié)合速度37℃（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)4、抗原和抗體的性質(zhì)關(guān)鍵因素---特異性和親和力決定因素---二者的比例（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素*目前十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（三）抗原或抗體的檢測方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與的反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)*目前十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（一）凝集反應(yīng)（agglutination）顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見的凝集塊。*目前十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)1、直接凝集(directagglutination)2、間接凝集（indirectagglutination）

3、間接凝集抑制試驗（indirectagglutinationinhibitiontest）4、協(xié)同凝集試驗（co-agglutinationtest）

（一）凝集反應(yīng)（agglutination）*目前十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）可溶性抗原（免疫球蛋白、細(xì)胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進(jìn)行，形成白色的沉淀。*目前十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)1、單向免疫擴(kuò)散

（singleimmunodiffusion）常用于測定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。沉淀環(huán)抗體混于瓊脂凝膠中制板環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān)*目前二十頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)2、雙向免疫擴(kuò)散（douleimmunodiffusion）：常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關(guān)性分析。*目前二十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis)*目前二十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)4、免疫比濁法（immunonephelomtry）：快速簡便。用于血清IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4含量測定*目前二十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（三）補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)1、50%補(bǔ)體溶血試驗（CH50測定）——血清總補(bǔ)體量測定2、補(bǔ)體結(jié)合試驗(complementfixationtest)：檢測抗原或抗體。原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體進(jìn)行診斷試驗原理？檢測系統(tǒng)：待測樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補(bǔ)體*目前二十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)用標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)借以提高免疫學(xué)診斷的敏感性熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA）

（四）免疫標(biāo)記技術(shù)液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）*目前二十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)1、免疫熒光法

（immunofluorescence,IF）用熒光標(biāo)記抗體，再與待檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)那個，所形成的抗原抗體復(fù)合物在熒光顯微鏡下散發(fā)熒光，借此對抗原進(jìn)行定性和定量。*目前二十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)間接ELISA雙抗夾心法2、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA法）*目前二十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)

抗細(xì)胞因子的抗體包被（1）（2）（3）（4）抗原包被用于效應(yīng)細(xì)胞分泌的單一細(xì)胞因子的測定，也可測定分泌特異抗體的B細(xì)胞的頻數(shù)。*目前二十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)BAS-ELISA法（

biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、RNA的檢測。卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì)*目前二十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)3、免疫組化

(immunohitochemistry)應(yīng)用標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞抗原反應(yīng)，借助形態(tài)學(xué)觀察，對組織或細(xì)胞表面抗原進(jìn)行定性、定量、定位檢測。*目前三十頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)4、放射免疫測定法

（radioimmunassay,RIA）用發(fā)射性核素標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行免疫學(xué)檢測。*目前三十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)5、化學(xué)發(fā)光免疫分析

（chemiluminescenceimmunoassay）將發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)回復(fù)至穩(wěn)定的基態(tài)時發(fā)射光子，通過自動發(fā)光分析儀測定管子參量，可反應(yīng)樣品中抗體或抗原含量。*目前三十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)6、免疫印記法

（immunoblotting）又稱western印記法：結(jié)合凝膠電泳和固相免疫技術(shù)，將借助電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，在應(yīng)用酶免疫、放射免疫等技術(shù)進(jìn)行檢測。*目前三十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)第2節(jié)免疫細(xì)胞檢測機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)免疫細(xì)胞來源---外周血*目前三十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（一）免疫細(xì)胞及其亞類計數(shù)1、淋巴細(xì)胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法白膜層單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞BT吸附分離過尼龍毛柱分離*目前三十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（1）尼龍棉柱分離法

B細(xì)胞滯留與柱上T細(xì)胞流出（2）E花環(huán)分離法成熟人T細(xì)胞表面有CD2，綿羊紅細(xì)胞的受體2、淋巴細(xì)胞亞群的分離*目前三十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（3）洗淘法（panning）

（4）流式細(xì)胞儀（flowcytometry,FCM）（5）磁珠分離法：用抗CD4交聯(lián)的微珠可將T細(xì)胞中的CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞分。*目前三十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)3、淋巴細(xì)胞亞群計數(shù)免疫熒光計數(shù)微量細(xì)胞毒試驗*目前三十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)

（二）淋巴細(xì)胞功能測定1、測定淋巴細(xì)胞功能的體外試驗（1）T細(xì)胞增殖試驗（淋轉(zhuǎn)）：絲裂原、抗CD3單克隆抗體等能非特異地激活T細(xì)胞，使之發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖，計算淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（正常值65~80%）*目前三十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)1、細(xì)胞增殖試驗具體方法①形態(tài)學(xué)觀察法②3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測定樣品的β射線放射活性③MTT法*目前四十頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)——檢測CTL、NK、LAK、TIL細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的功能①51Cr釋放法②乳酸脫氫酶釋放法③細(xì)胞凋亡檢查法：TUNEL法（TdTdependentdUTP-biotinnickendlabeling）、FACS測定法（2）淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗（LMC）*目前四十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（3）分泌功能測定檢測細(xì)胞因子分泌細(xì)胞檢測抗體形成細(xì)胞2、測定淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗結(jié)合菌素試驗—遲發(fā)型超敏反應(yīng)*目前四十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)：舊結(jié)核菌素試驗（OT試驗）皮試（+）——有一定的細(xì)胞免疫能力皮試（—）——細(xì)胞免疫功能缺損*目前四十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)第3節(jié)免疫分子檢測（一）免疫球蛋白測定1、體外用已知抗原檢測相應(yīng)抗體2、用已知抗體定性、定量測定各類免疫球蛋白*目前四十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（二）補(bǔ)體測定免疫比濁法ELISARIA*目前四十五頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（三）細(xì)胞因子檢測1.免疫學(xué)測定法鑒定分離的淋巴細(xì)胞亞群，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN、TNF等檢測①ELISA法②生物活性測定法③聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法*目前四十六頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（三）細(xì)胞因子檢測2.生物活性測定法原理：不同細(xì)胞因子具有特定的生物學(xué)活性，借助相應(yīng)指示系統(tǒng)與之反應(yīng)，從結(jié)果得知細(xì)胞因子的活性*目前四十七頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)2.生物活性測定法

促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法抗病毒活性測定法直接殺傷法趨化活性測定法3.分子生物學(xué)測定法PCR*目前四十八頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（四）CD分子、表面受體和粘附分子的測定（五）HLA分型*目前四十九頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)第23章免疫學(xué)防治免疫學(xué)預(yù)防免疫學(xué)治療*目前五十頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（一）人工主動免疫（artificialactiveimmunization）——用疫苗、類毒素接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性的免疫，從而預(yù)防感染的措施。一、人工免疫免疫預(yù)防*目前五十一頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)

人工主動免疫

常用制劑——疫苗、類毒素

死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。

減毒活疫苗：是用減毒或無毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。

類毒素：細(xì)菌外毒素經(jīng)甲醛處理后，失去毒性而保留其免疫原性即為類毒素。常用的類毒素有破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素等。目前五十二頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!死疫苗和活疫苗的比較*目前五十三頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)（二）新型疫苗亞單位疫苗—乙肝表面抗原制備乙肝疫苗結(jié)合疫苗合成肽疫苗基因工程疫苗（三）核酸疫苗*目前五十四頁\總數(shù)六十頁\編于二點(diǎn)