陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)

陰道微生態(tài)評價

及其適宜技術(shù)

個舊市人民醫(yī)院檢驗科王銳

陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)1/32護(hù)理生殖道關(guān)注微生態(tài)

最主要！陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)2/32陰道粘膜陰道正常菌群陰道免疫系統(tǒng)陰道微生態(tài)概念陰道防御系統(tǒng)陰道微生態(tài)是陰道最主要防御系統(tǒng)陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)3/32陰道原籍菌(乳酸桿菌)數(shù)量:8x107cfu/ml5%95%123

正常育齡婦女陰道菌群由六種不一樣種類細(xì)菌以及念珠菌、支原體等組成。正常陰道內(nèi)有100種微生物存在。這些微生物在陰道內(nèi)形成生態(tài)平衡。陰道菌群（陰道微生態(tài)系統(tǒng)）陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)4/32CFU(Colony-FormingUnits)經(jīng)培養(yǎng)所得菌簇形成單位英文縮寫。細(xì)菌（可見）和真菌測量單位。cfu:colony-formingunit，菌落形成單位，將稀釋后一定量菌液經(jīng)過澆注或涂布方法，讓其內(nèi)微生物單細(xì)胞一一分散在瓊脂平板上，待培養(yǎng)后，每一活細(xì)胞就形成一個菌落。與常規(guī)利用顯微鏡對微生物數(shù)量進(jìn)行測量不一樣，主要是對可見（即多數(shù)情況下形成菌落）細(xì)菌數(shù)量進(jìn)行測量單位。意思就是每毫升菌液中含有多少單細(xì)胞！陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)5/32陰道粘膜上皮細(xì)胞縱切面示意圖（過路菌）乳桿菌（原籍菌）（條件致病菌）是由不一樣種屬宿主傳來是其本身宿主個體對其無免疫反應(yīng)或低免疫反應(yīng)，是宿主個體固有菌群是由同種屬不一樣宿主個體傳來陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)6/32乳桿菌作用機(jī)制分解糖原，維持陰道酸性環(huán)境。產(chǎn)生各種抑菌物質(zhì)：乙酸、16-18碳脂肪酸H202、乳酸菌素、硬脂酸等。競爭粘附：也稱占位性保護(hù)。競爭營養(yǎng)物質(zhì)：大量定位于陰道中乳桿菌處于競爭優(yōu)勢狀態(tài)，利用陰道上皮細(xì)胞中糖原，降低其它細(xì)菌碳源供給，經(jīng)過競爭營養(yǎng)物質(zhì)而干擾一些厭氧菌如白色假絲酵母菌（白念）生長。陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)7/32維持酸性環(huán)境形成保護(hù)性菌膜殺滅致病菌乳酸桿菌正常陰道菌群作用陰道微生態(tài)平衡關(guān)鍵：維持乳酸菌尤其是產(chǎn)H2O2乳酸菌在陰道菌群中優(yōu)勢地位！

在陰道粘膜表面形成一層保護(hù)性菌膜，預(yù)防入侵微生物在陰道粘膜上定植

乳酸菌產(chǎn)生乳酸使陰道分泌物維持酸性環(huán)境；乳酸菌產(chǎn)生H2O2可殺滅入侵致病菌。陰道微生態(tài)概念陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)8/32

乳桿菌數(shù)量降低，生化指標(biāo)改變，

陰道微生態(tài)破壞陰道菌群失調(diào)各類陰道炎加重陰道菌群失調(diào)各種誘因各類陰道炎共性---源于或伴有微生態(tài)破壞！為何要關(guān)注陰道微生態(tài)陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)9/32菌群演變造成菌群結(jié)構(gòu)改變，特點：1、厭氧菌需氧菌、等條件致病菌大量增加2、乳酸菌尤其是產(chǎn)過氧化氫乳酸菌降低或消失全部陰道感染都源于或伴有陰道微生態(tài)改變陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)10/32

乳酸菌%厭氧菌%加德納菌%支原體%LB-LB正常80-10070-100

10-400-3020-40宮頸炎10-4010-3030-5020-4060-80BV0-200-1040-7060-8040-60滴蟲陰道炎10-400-2010-300-3020-40霉菌陰道炎20-500-4020-3010-4020-30

老年性陰道炎0-200-1040-6020-4050-60陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)11/32經(jīng)過形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)等方法所取得陰道菌群數(shù)量和功效方面信息分析陰道菌群結(jié)構(gòu)演替正常優(yōu)勢菌菌群數(shù)量與功效改變條件致病微生物菌群數(shù)量與功效改變外來致病微生物菌群數(shù)量與功效改變

機(jī)體反應(yīng)水平怎樣評價陰道微生態(tài)？--陰道微生態(tài)評價內(nèi)涵為何要關(guān)注陰道微生態(tài)陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)12/32形態(tài)學(xué)＋生物標(biāo)志物菌群數(shù)量與功效改變形態(tài)學(xué)評價---菌群數(shù)量改變：

形態(tài)學(xué)方法系統(tǒng)方法----------陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)13/32

標(biāo)本中細(xì)菌分布、排列密集程度，即每克或每毫升標(biāo)本中菌落數(shù)。分級標(biāo)準(zhǔn)(放大倍10×100觀察每視野平均細(xì)菌數(shù))I級（記為“+”）1個～9個

II級（記為“++”）

10個～99個

III級（記為“+++”）100個以上

IV級（記為“++++”）細(xì)菌聚集成團(tuán)

(涂片中所見細(xì)菌種類)

I級（記為“+”）能區(qū)分1～3種細(xì)菌；

II級（記為“++”）

能區(qū)分4～6種細(xì)菌；

III級（記為“+++”）能區(qū)分7～10種細(xì)菌；

IV級（記為"++++"）能區(qū)分11種以上細(xì)菌。(局部有沒有炎癥---菌群致病性)有沒有白細(xì)胞、膿細(xì)胞滲出，有沒有吞噬現(xiàn)象等。？菌群密集度機(jī)體炎性反應(yīng)菌群多樣性優(yōu)勢菌陰道微生態(tài)形態(tài)學(xué)評價

存在問題

形態(tài)學(xué)評價結(jié)果可靠性與試驗室人員技能和責(zé)任相關(guān)不能了解陰道菌群中正常優(yōu)勢菌和有害菌功效陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)14/32

A、正常優(yōu)勢菌功效生物學(xué)標(biāo)志B、致病微生物與條件致病微生物增殖生物學(xué)標(biāo)志C、機(jī)體反應(yīng)性生物學(xué)標(biāo)志了解菌群數(shù)量改變形態(tài)學(xué)評價生物標(biāo)志物了解菌群數(shù)量與功能改變陰道微生態(tài)系統(tǒng)評價陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)15/32

唾液酸苷酶BV↑門冬酰胺蛋白酶霉菌性陰道炎↑胱胺酰蛋白酶滴蟲性陰道炎↑乳酸脫氫酶急性化膿性陰道炎↑透明質(zhì)酸酶BV、淋菌性陰道炎↑白細(xì)胞酯酶宮頸炎及各種陰道感染↑

短鏈脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加單胺和多胺增加（胺試驗陽性）菌胞壁糖類（如阿拉伯醇糖）增加

陰道微生態(tài)評價方法生物化學(xué)方法微生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法免疫學(xué)方法1優(yōu)勢菌(乳酸菌)功效生化標(biāo)志物2致病與條件致病微生物增殖生化標(biāo)志物3機(jī)體反應(yīng)性生化標(biāo)志物

乳酸菌代謝包含：過氧化氫、乳酸乳酸菌素微生物代謝產(chǎn)物

細(xì)菌、衣原體等病原體大量增殖→白細(xì)胞吞噬病原體過多→病原體釋放水解酶和毒素分解白細(xì)胞壁→白細(xì)胞酯酶釋放到胞外→分泌物中白細(xì)胞酯酶活性增高。陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)16/32過氧化氫濃度SNA活性LE活性生態(tài)優(yōu)勢菌指標(biāo)致病菌指標(biāo)宿主反應(yīng)指標(biāo)衛(wèi)生部十年百項計劃推廣項目江西省星火計劃項目浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技重點推廣項目了解陰道菌群結(jié)構(gòu)和功效改變，評價陰道微生態(tài)情況陰道微生態(tài)評價適宜技術(shù)

陰道微生態(tài)評價適宜技術(shù)--------細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測定技術(shù)介紹

陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)17/32標(biāo)本采集要規(guī)范

各種病原體性質(zhì)和檢測要求不一樣，決定了標(biāo)本種類、取材部位、和保留條件標(biāo)本運(yùn)輸方式等都有不一樣，采集標(biāo)本上如有錯誤或疏忽，都會影響檢驗結(jié)果。標(biāo)本采集規(guī)范陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)18/32

普通陰道感染診療取材，須取陰道后穹隆部位分泌物。取材前，要用一支棉簽揩去取材部位堆積膿液，用另一支棉簽取材，為提升陽性率，還可采取重復(fù)兩次取材或兩個部位標(biāo)本混合后檢驗方法。

要盡可能使用大一些棉簽取樣，要將棉簽在取材部位旋轉(zhuǎn)并停留20秒

要使用試劑盒配套保留液保留標(biāo)本。標(biāo)本在2-8℃保留不宜超出2天。取材之前二十四小時內(nèi)，應(yīng)無性交、無盆浴或陰道沖洗；在48小時內(nèi)未使用陰道潤滑劑或陰道“興奮劑”等化學(xué)物質(zhì)普通要求取材部位要準(zhǔn)確取材方法要得當(dāng)標(biāo)本量要充分標(biāo)本要正確保留及時檢驗正確取材要把握一下幾點標(biāo)本采集規(guī)范陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)19/32檢驗原理H2O2——陰道乳酸桿菌標(biāo)志物唾液酸苷酶NAase——加德納菌、游動彎曲桿菌等BV致病菌標(biāo)志物。白細(xì)胞酯酶——炎性細(xì)胞標(biāo)志物。陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)20/32H2O2（反應(yīng)裝置上部反應(yīng)孔）陰道液中過氧化氫經(jīng)過過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羥基苯磺酸氧化成紅色或紫色，在反應(yīng)系統(tǒng)中加入3,5-二氯-2-羥基苯磺酸拮抗物，當(dāng)標(biāo)本中H2O2濃度≥2μmol/L，反應(yīng)結(jié)果呈紅色或紫色，呈色深度與H2O2

濃度成正比，標(biāo)本中H2O2濃度＜2μmol/L，反應(yīng)結(jié)果呈藍(lán)色。結(jié)果判讀：陰性：顯紅色、紫色或藍(lán)紫色陽性：藍(lán)色參考范圍：≥2μmol/L為陰性陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)21/32唾液酸苷酶活性測定

（反應(yīng)裝置中部反應(yīng)孔）唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基遇重氮鹽起反應(yīng)呈紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性呈正比。結(jié)果判讀：陰性：不顯色或黃色陽性：紅色、紫色或藍(lán)色，顯藍(lán)色表示唾液酸苷酶活性濃度很高。參考范圍：＜7U/ml為陰性陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)22/32白細(xì)胞酯酶（反應(yīng)裝置下部反應(yīng)孔）白細(xì)胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧條件下呈藍(lán)色或綠色，呈色深度與白細(xì)胞酯酶活性成正比。結(jié)果判讀：參考比色板比色判讀結(jié)果陰性：“-”或“±”陽性：“+”、“++”、“+++”參考范圍：白細(xì)胞酯酶＜7U/ml為陰性陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)23/32

產(chǎn)過氧化氫乳酸菌占優(yōu)勢地位

粘膜修復(fù)炎癥消失

無引發(fā)BV細(xì)菌繁殖正常正常陰性異常增

高陽性過氧化氫濃度LE活性SNa活性乳酸菌降低或消失各種陰道感染致病菌、條件致病菌增加陰道微生態(tài)評價適宜技術(shù)陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)24/32糾正了以白細(xì)胞升高才為“炎癥”生殖道感染概念陰道感染診療治療思緒新突破臨床用途指導(dǎo)婦產(chǎn)科臨床醫(yī)師從微生態(tài)角度重新審閱婦科感染性疾??；關(guān)注感染及治療后陰道微生態(tài)情況，樹立“將陰道微生態(tài)恢復(fù)正常作為陰道炎治療最終目標(biāo)”理念。A、填補(bǔ)現(xiàn)有白帶常規(guī)檢驗只做形態(tài)學(xué)檢驗、不做生化檢驗，不能準(zhǔn)確判斷感染程度及陰道微生態(tài)、不能評價預(yù)后等不足；B、陰道微生態(tài)評價C、從微生態(tài)角度評價陰道炎是否治愈；D、陰道生態(tài)制劑用藥指標(biāo)；E、了解產(chǎn)后陰道生態(tài)，確定是否恢復(fù)性生活；F、BV診療與療效評價，需氧菌陰道炎、衣原體感染篩查。陰道微生態(tài)評價意義陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)25/32機(jī)體反應(yīng)生化標(biāo)志物白細(xì)胞對細(xì)菌吞噬過程陰道微生態(tài)評價內(nèi)容陰道微生態(tài)評價和其適宜技術(shù)26/32