實驗三超氧化物歧化酶的提取及活性測定

實驗三超氧化物歧化酶的提取及活性測定第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六一、目的和要求通過植物材料（玉米）超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活性測定，掌握硫酸銨鹽析沉淀蛋白質(zhì)及超濾濃縮蛋白質(zhì)的方法和原理。

第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六二、實驗原理超氧化物歧化酶（SOD）廣泛存在于植物體內(nèi)，它是一種重要的自由基清除劑，對生物體有多種保護作用。超濾是一種蛋白質(zhì)濃縮方法，只要選擇適當?shù)臑V膜可將玉米漿中的SOD與其他小分子雜蛋白、可溶性糖等分離。第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六三、材料與試劑1.材料

玉米籽粒2.主要試劑1、0.05mol/L磷酸緩沖液（pH7.8）,500mL2、氯仿-乙醇混合液：氯仿:無水乙醇=3:53、丙酮：用前需預冷至4-10℃4、0.05mol/L碳酸鹽緩沖液（pH10.2）5、0.1mol/LEDTA溶液第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六2.3儀器恒溫水浴鍋、冷凍高速離心機、可見分光光度計、研缽、玻棒、燒杯、量筒，等。第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六四、操作步驟

4.1SOD粗提液的制備1、組織細胞破碎：稱取5g大蒜蒜瓣或玉米種子，置于研缽中研磨。2、SOD的提?。浩扑楹蟮慕M織中加入2-3倍體積的0.05mol/L磷酸緩沖液（pH7.8），繼續(xù)研磨20min，使SOD充分溶解到緩沖液中，然后在5000rpm下離心15min，取上清液。3、除雜蛋白：上清液加入0.25體積的氯仿-乙醇混合液攪拌15min，5000rpm離心15min，得到的上清液為粗酶液。第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六4、SOD的沉淀分離：粗酶液中加入等體積的冷丙酮，攪拌15min，5000rpm離心15min，得SOD沉淀。將SOD沉淀溶于0.05mol/L磷酸緩沖液（pH7.8）中，于55-60℃熱處理15min，得到SOD酶液。第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六3.2SOD活性測定試劑（mL）空白對照管樣品管碳酸緩沖液5.05.0EDTA溶液0.50.5蒸餾水0.5—樣品液—0.5混合均勻，在30℃水浴中預熱5min，測定OD480第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六3.3結果計算總酶活力=酶液總體積X稀釋倍數(shù)/抑制50%的酶液量X樣品重第9頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六五、本實驗教學內(nèi)容的重點和難點

重點：粗提液的獲得玉米SOD的提取難點：提取條件的控制第10頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六六、本實驗教學內(nèi)的深化和拓展

通過本實驗的學習，使學生明確實驗的意義