乙型病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查課件

乙型病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查報(bào)告人：付紅偉檢驗(yàn)中心2011.1.21我國(guó)HBV感染概況一般人群HBsAg攜帶率高達(dá)7.18%；現(xiàn)有慢性HBV感染者約9300萬(wàn)人，占全世界的1/4；其中慢性乙型病毒性肝炎患者超過(guò)

2000萬(wàn)例，占全世界慢性乙肝患者的1/3；15歲以下兒童HBsAg攜帶率下降顯著，1-4歲組僅為0.96%；1~4歲組HBsAb陽(yáng)性率由1992年15.75%升至72.25%;抗HBcAb陽(yáng)性率由1992年30.08%降至3.76%；2HBV基因組HBVDNA是由長(zhǎng)鏈L(負(fù)鏈)

和短鏈S(正鏈)

組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA，短鏈的長(zhǎng)度相當(dāng)于長(zhǎng)鏈的50%～85%。HBVDNA長(zhǎng)鏈載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼，有4個(gè)開放讀碼框架(ORF)，分別稱為S、C、P和X區(qū)。編碼7個(gè)蛋白質(zhì)。HBVDNA易發(fā)生變異，特別是前S或S區(qū)基因較易突變。嗜肝DNA病毒的共同特點(diǎn)：內(nèi)含3~3.3kb松散環(huán)狀、部分雙鏈DNA基因組及DNA聚合酶；病毒的復(fù)制需逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程。3e抗原(HBeAg)：是可溶性蛋白質(zhì)只存在于血液中是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志e抗體(抗-HBe)：對(duì)HBV感染有一定的保護(hù)作用其出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低前C區(qū)C區(qū)前C/C蛋白HBeAgHBcAg表達(dá)切割、加工HBeAg只存在于血清中HBVC基因分泌到細(xì)胞外2.HBeAg和抗-HBe5HBV的三種形態(tài)1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere67HBV自然復(fù)制周期1.乙型肝炎的生物化學(xué)檢測(cè)主要指標(biāo)：ALT,AST,ASTm，血清白蛋白，血清膽紅素，膽堿酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原時(shí)間(PT)及部分凝血因子；9方法學(xué)的發(fā)展ELISA：靈敏性高，成本低，適用于普通病人篩查；膠體金免疫層析法(金標(biāo)法)：簡(jiǎn)便易行，可用于急診病人快速檢測(cè)；化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)：價(jià)格昂貴，可用于HBVMs為臨界值的病人的確證；可間接反映宿主HBV的復(fù)制水平，在評(píng)價(jià)抗病毒治療的病毒學(xué)應(yīng)答、療效和判斷預(yù)后方面有重要意義。新增檢測(cè)指標(biāo)Pre–S1、Pre–S2及其相應(yīng)抗體對(duì)乙肝兩對(duì)半的新認(rèn)識(shí)102.HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)11HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)方法的成本效果分析(1)13Terminal

proteinSpacerReverse

Transcriptase

(RT)RNaseHrt1rt344preS1preS2Ss1s266HBsAgXMutationofS&Pre-SS基因“a”決定簇

G145R

變異，與抗-HBs的親和力降低S基因變異可導(dǎo)致隱匿性HBV感染(occultHBVinfection)，表現(xiàn)為血清HBsAg陰性，但仍可有HBV低水平復(fù)制(血清HBVDNA常<104拷貝/ml)獻(xiàn)血員人群，隱匿性HBV感染的檢出率可達(dá)0.19%141517大三陽(yáng)小三陽(yáng)vsHBV血清學(xué)標(biāo)志檢測(cè)結(jié)果分析1619類型HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb樣本數(shù)(n)構(gòu)成比(%)1＋－－－＋40.212＋－＋－＋231.203＋－－＋＋985.114－－－－＋462.405－－－＋＋683.556－＋－＋＋1849.607－＋－－＋633.298－＋－－－47024.539－－－－－96050.10合計(jì)1257172335048619161001916例HBV血清標(biāo)志物陽(yáng)性類型分布模式2122HBVDNA定量檢測(cè)病毒復(fù)制水平最可靠，最直接的證據(jù)，與傳染性和疾病進(jìn)展密切相關(guān)；主要用于HBV感染的判斷，治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。HBV基因分型基因分型的必要性；基因分型的主要方法；HBV耐藥突變的檢測(cè)3.HBV分子生物學(xué)診斷慢性HBV感染治療適應(yīng)癥的選擇HBeAg陽(yáng)性，HBVDNA載量>105copies/ml,ALT>2×ULN;HBeAg陰性，HBVDNA載量>104copies/ml,ALT>2×ULN;HBVDNA持續(xù)陽(yáng)性，年齡>40歲，ALT大于正常上限，也可給予抗病毒治療；HBVDNA持續(xù)陽(yáng)性，年齡>40歲，ALT持續(xù)正常，應(yīng)密切隨訪，動(dòng)態(tài)觀察疾病進(jìn)展，必要時(shí)行肝組織檢測(cè)，有病變證據(jù)時(shí)，可以給予抗病毒治療；23HBVDNA定量檢測(cè)試劑盒的性能對(duì)比2526同時(shí)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)HCV,HIV-1,衣原體，及淋病的一體化檢測(cè)BackB型特異性“引物對(duì)”的特異度分析B型特異性引物HB（正義鏈）：5’-ACCGTGAACGCCCACMGGAA-3’29Back4.HBV臨床藥物治療監(jiān)測(cè)乙肝病毒的耐藥性檢測(cè)，是精準(zhǔn)治療乙肝的關(guān)鍵??！目前由于治療不夠規(guī)范，造成我國(guó)目前超過(guò)95%的乙肝患者發(fā)生耐藥、病毒變異、病毒耐藥，變異檢測(cè)勢(shì)在必行！拉米夫定是第一個(gè)被批準(zhǔn)治療慢性乙型肝炎的口服抗病毒藥,已在全世界廣泛應(yīng)用。但其耐藥發(fā)生率高,治療1年時(shí)耐藥發(fā)生率為23%,2年為46%,3年為55%,4和5年分別為65%和71%。30耐藥---核苷(酸)類似物(NA)治療失敗最重要原因31拉米夫定LMV阿德福韋酯ADV替比夫定LdT恩替卡韋ETVHBV替諾福韋TDVNAs：抑制病毒復(fù)制長(zhǎng)期使用耐藥變異臨床耐藥表型耐藥基因耐藥耐藥研究323334PolymeraseTerminal

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(RT)RNaseHrt1rt344逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)某些位點(diǎn)變異與耐藥相關(guān)preS1preS2HBsAgs1s266可同時(shí)分析：耐藥變異，HBsAg變異，基因型，血清型全長(zhǎng)RT區(qū)分析技術(shù)路線HBVDNA提取snPCR擴(kuò)增RT區(qū)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序生物信息學(xué)分析與數(shù)據(jù)信息挖掘血清與資料收集Neg.BCkb可