微生物標(biāo)本處理及藥敏試驗(yàn)自動(dòng)保存的

微生物標(biāo)本處理及藥敏試驗(yàn)自動(dòng)保存的第1頁(yè)/共47頁(yè)微生物標(biāo)本處理及藥敏試驗(yàn)第2頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理1、細(xì)菌室標(biāo)本接收后應(yīng)及時(shí)處理：為什么？第3頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理所有細(xì)菌室標(biāo)本均要求2小時(shí)內(nèi)送到細(xì)菌室進(jìn)行處理。痰標(biāo)本：不及時(shí)處理可導(dǎo)致痰液中的肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡。另外，痰液標(biāo)本在室外放置過(guò)久，會(huì)導(dǎo)致口腔的雜菌生長(zhǎng)和病人體內(nèi)定植菌生長(zhǎng)過(guò)快，而影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。第4頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理血培養(yǎng)：采血后2小時(shí)內(nèi)不及時(shí)放進(jìn)血培養(yǎng)儀培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致假陰性。另外，采血后禁止將血培養(yǎng)瓶置4℃保存。

第5頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理無(wú)菌液體（包括腦脊液、胸腹水、心包積液、膿液和關(guān)節(jié)液等）：由于腦膜炎奈瑟氏菌、肺炎鏈球菌和嗜血桿菌對(duì)外界環(huán)境抵抗力很低，對(duì)寒冷和干燥均敏感，如不及時(shí)接種，病原菌可能死亡，導(dǎo)致培養(yǎng)陰性。第6頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理尿液標(biāo)本：由于尿液標(biāo)本采集容易受到外生殖道正常菌群污染，而且尿液是細(xì)菌的最好培養(yǎng)基，因此，采集標(biāo)本后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)處理完畢，否則置4℃冰箱保存，時(shí)間不能超過(guò)8小時(shí)。第7頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理生殖道分泌物：由于淋球菌離體后，很快會(huì)自溶死亡；另外，生殖道標(biāo)本采集容易污染外生殖道的正常菌群，如果不及時(shí)接種，會(huì)由于這些正常菌群大量繁殖，導(dǎo)致結(jié)果假陽(yáng)性。第8頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理大便標(biāo)本：由于志賀菌屬對(duì)理化因素抵抗力較弱，對(duì)酸性環(huán)境也較敏感，在糞便中由于其他菌屬產(chǎn)酸可使本菌屬的細(xì)菌在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。另外，霍亂弧菌對(duì)熱，干燥，日光和酸均很敏感，同樣離體后不及時(shí)處理，則容易死亡。第9頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌室各種標(biāo)本處理常見(jiàn)標(biāo)本接種及培養(yǎng)標(biāo)本平板環(huán)境痰液、咽拭子、肺泡灌洗液血平板、巧克力平板35℃、有氧環(huán)境、CO2環(huán)境血、骨髓需氧培養(yǎng)瓶，厭氧培養(yǎng)瓶35℃、有氧環(huán)境、血培養(yǎng)儀尿血平板35℃、有氧環(huán)境大便SS平板、中國(guó)藍(lán)平板、血平板35℃、有氧環(huán)境腦脊液、胸水、腹水、引流液等血平板35℃、有氧環(huán)境、巧克力平板35℃、CO2環(huán)境、第10頁(yè)/共47頁(yè)痰培養(yǎng)結(jié)果判讀第11頁(yè)/共47頁(yè)痰培養(yǎng)結(jié)果判讀第12頁(yè)/共47頁(yè)痰培養(yǎng)結(jié)果判讀第13頁(yè)/共47頁(yè)痰培養(yǎng)結(jié)果判讀第14頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌結(jié)果發(fā)出時(shí)間細(xì)菌結(jié)果發(fā)出時(shí)間。一般標(biāo)本的培養(yǎng)+藥敏時(shí)間：3～4天。血液標(biāo)本：7天(有菌生長(zhǎng)即電話報(bào)告)。真菌培養(yǎng)+藥敏：3天。第15頁(yè)/共47頁(yè)紙片擴(kuò)散法（K-B）藥敏試驗(yàn)第16頁(yè)/共47頁(yè)紙片擴(kuò)散法（K-B）藥敏試驗(yàn)第17頁(yè)/共47頁(yè)紙片擴(kuò)散法（K-B）藥敏試驗(yàn)第18頁(yè)/共47頁(yè)紙片擴(kuò)散法（K-B）藥敏試驗(yàn)第19頁(yè)/共47頁(yè)紙片擴(kuò)散法（K-B）藥敏試驗(yàn)第20頁(yè)/共47頁(yè)怎樣才能做到正確選用抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)抗菌藥物分類(lèi)（一）β—內(nèi)酰胺類(lèi)A、青霉素類(lèi)抗生素1、青霉素G：主要使用在鏈球菌、腦膜炎雙球菌、螺旋體、梭狀芽孢桿菌等的感染。對(duì)葡萄球菌及許多革蘭陰性菌如大腸桿菌等大多耐藥（產(chǎn)生各種β-內(nèi)酰胺酶滅活青霉素G)。2、半合成耐酶青霉素（甲氧西林、苯唑西林等）：主要使用于產(chǎn)青霉素酶的葡萄球菌感染。3、半合成廣譜青霉素：因?qū)Ω鞣Nβ-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性差，臨床使用逐漸減少。氨芐西林：對(duì)腸球菌、李斯特菌屬優(yōu)于青霉素阿莫西林：作用較氨芐強(qiáng)，常用HP治療。哌拉西林：主要用于綠膿桿菌及腸桿菌科。主要作用革蘭氏陰性桿菌的青霉素：美洛西林、替卡西林等。第21頁(yè)/共47頁(yè)B、頭孢菌素類(lèi)抗生素一代頭孢菌素對(duì)G+菌（除腸球菌、MRSA外）有良好作用，G-菌作用差對(duì)β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性差常用品種：頭孢氨芐，頭孢唑啉，頭孢拉定頭孢唑啉用于外科手術(shù)切口感染預(yù)防第22頁(yè)/共47頁(yè)二代頭孢菌素兼顧G+及G-菌（銅綠假單胞菌、陰溝腸桿菌、沙雷菌、枸櫞酸桿菌、MRSA、腸球菌等無(wú)效）β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性增加常用品種頭孢呋辛、頭孢克羅、頭孢丙烯、頭孢孟多（有腎毒、出血）第23頁(yè)/共47頁(yè)三代頭孢菌素G-菌作用強(qiáng)，尤其是腸桿菌科細(xì)菌、奈瑟菌屬、流感桿菌均有強(qiáng)大抗菌活性，但對(duì)G+作用大多較差，對(duì)腸球菌耐藥。大多數(shù)β-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定常用品種：頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢甲肟、頭孢唑肟、頭孢地嗪、頭孢哌第24頁(yè)/共47頁(yè)四代頭孢菌素比三代頭孢菌素抗菌譜更廣，活性更強(qiáng)。β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定更強(qiáng)。對(duì)G+球菌作用增強(qiáng)，對(duì)陰溝、枸櫞酸桿菌強(qiáng)常用品種：頭孢匹羅、頭孢吡肟第25頁(yè)/共47頁(yè)頭孢菌素類(lèi)抗生素作用特點(diǎn)特征第一代第二代第三代第四代對(duì)G+菌活性+++++++++/++對(duì)G-菌活性+++++++++/++++對(duì)綠膿桿菌活性---/++++++酶穩(wěn)定性差中強(qiáng)更強(qiáng)腎毒性有小無(wú)無(wú)第26頁(yè)/共47頁(yè)非典型β內(nèi)酰胺類(lèi)1、頭霉素類(lèi)：①抗需氧菌作用與頭孢菌素類(lèi)似；②對(duì)厭氧菌作用強(qiáng)；③適用于需氧、厭氧的混合感染，如盆腔、腹腔、婦科感染。常用有：頭孢西丁、頭孢美唑、頭孢替坦、頭孢米諾。2、碳青霉烯類(lèi)：①抗菌譜最廣，抗菌作用最強(qiáng)；②對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌及洋蔥假單胞菌（伯克霍爾德）、黃桿菌等作用差。常用品種：亞胺培能、美洛培能、帕尼培能（克蓓寧）。3、單環(huán)類(lèi)：對(duì)G-菌包括綠膿有強(qiáng)效，對(duì)G+菌、厭氧菌無(wú)效。主要品種：氨曲南。4、氧頭孢烯類(lèi)：拉氧頭孢、氟氧頭孢5、β內(nèi)酰胺酶抑制劑：克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦，如阿莫西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦。第27頁(yè)/共47頁(yè)（二）氨基糖甙類(lèi)：常用有慶大霉素、丁胺卡那、妥布霉素和奈替米星等。屬殺菌藥，對(duì)G-菌有強(qiáng)效對(duì)部分G+菌（葡萄球菌）有效，對(duì)鏈球菌、腸球菌無(wú)效。對(duì)厭氧菌無(wú)效水溶性好，性質(zhì)穩(wěn)定。某些品種對(duì)結(jié)核及分枝桿菌有效。第28頁(yè)/共47頁(yè)（三）喹諾酮類(lèi)是近年來(lái)發(fā)展最快的化學(xué)合成抗菌藥物，作用于細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶。對(duì)G+，G-菌均有較強(qiáng)的作用，對(duì)厭氧菌也有一定的作用。第29頁(yè)/共47頁(yè)喹諾酮類(lèi)第一代：萘丁酸、吡哌酸.因副作用大已基本淘汰。第二代：諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星左旋氧氟沙星。用于腸道感染。第三代：司巴沙星、托氟沙星、加替沙星、格帕沙星。

對(duì)肺炎球菌等革蘭陽(yáng)性菌活性增大。第四代：曲伐沙星、莫西沙星、克林沙星

對(duì)革蘭陽(yáng)性菌和厭氧菌具強(qiáng)的活性大第30頁(yè)/共47頁(yè)喹諾酮類(lèi)的適應(yīng)證1.最適合用于腸道感染：如傷寒、痢疾、霍亂。2.對(duì)布氏桿菌、軍團(tuán)菌、結(jié)核桿菌也有效。3.對(duì)綠膿桿菌感染有效。一、二代喹諾酮對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌無(wú)效，對(duì)厭氧菌、奴卡菌無(wú)效，對(duì)MRSA不如萬(wàn)古霉素。三、四代喹諾酮對(duì)革蘭陽(yáng)性球菌和厭氧菌有效第31頁(yè)/共47頁(yè)（四）大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)為快速抑菌藥，對(duì)G-、G+菌抗菌活性不強(qiáng)。主要使用在β—內(nèi)酰胺抗生素?zé)o效的非典型病原體：支原體、衣原體、軍團(tuán)菌、彎曲菌、某些厭氧菌、奴卡菌、分枝桿菌和弓形體等。第32頁(yè)/共47頁(yè)其他抗菌藥物磷霉素：是化學(xué)合成的廣譜抗生素、作用于細(xì)胞壁合成的早期，很少引起過(guò)敏。與β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)有協(xié)同增效作用。萬(wàn)古霉素（去甲萬(wàn)古霉素）對(duì)G+菌有強(qiáng)效，對(duì)G-菌無(wú)效。替考拉寧：新的糖肽類(lèi)抗生素，半衰期長(zhǎng)（27-37h），一天一次給藥，僅用于G+菌感染。第33頁(yè)/共47頁(yè)林可霉素類(lèi)：林可霉素、克林霉素等：骨關(guān)節(jié)組織中濃度較高為其特點(diǎn)。但透過(guò)血-腦脊液屏障的能力差，腦組織濃度低。小于4歲兒童慎用，主要作用于G+菌。多粘菌素類(lèi)：多粘菌素B，主要作用于G-菌。第34頁(yè)/共47頁(yè)四環(huán)素類(lèi)1、由于目前常見(jiàn)致病菌對(duì)四環(huán)素類(lèi)耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，僅在病原菌對(duì)本品敏感時(shí)，方有應(yīng)用指征。2、主要適用于支原體肺炎、衣原體感染、立克次體病、布氏桿菌病、霍亂、回歸熱。3、因影響影響牙齒和骨發(fā)育，8歲以下小兒、孕婦、乳婦禁用第35頁(yè)/共47頁(yè)不同抗菌藥物的抗菌譜抗菌藥物 G(+)球菌 G(-)桿菌 非典型菌大環(huán)內(nèi)酯類(lèi) + - +β-內(nèi)酰胺類(lèi) + + -氟喹諾酮類(lèi)(新)+ + +第36頁(yè)/共47頁(yè)細(xì)菌耐藥性MRSA和MRCNS的定義MRSA：耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌。MRCNS：耐甲氧西林的凝固酶陰性葡萄球菌。第37頁(yè)/共47頁(yè)MRSA和MRCNS的檢測(cè)第38頁(yè)/共47頁(yè)金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）Antimicrobic抗生素MIC(mg/l)敏感度BetalactamaseAmpicillinClindamycinErythromycinGentamicinNitrofurantoinOxacillinMICPenicillin-GRifampinTetracyclineTrimethoprim/SulfaVancomycinLevofloxacinLinezolidMoxilfloxacinCefoxitinTeicoplanimβ-內(nèi)酰胺酶氨芐青霉素/舒巴坦克林霉素紅霉素慶大霉素呋喃妥因苯唑青霉素MIC青霉素G利福平四環(huán)素復(fù)方新諾明萬(wàn)古霉素左旋氧氟沙星力奈唑烷莫昔沙星頭孢西丁替考拉寧POS>=32>=8>=8>=16<=32>=8>=162>=16>=3202>=8<=2>=8＋耐藥耐藥耐藥耐藥敏感耐藥耐藥中介耐藥耐藥敏感耐藥敏感耐藥耐藥敏感評(píng)價(jià)：頭孢西丁耐藥的葡萄球菌，可對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)，頭孢菌素類(lèi)，碳青酶烯類(lèi)，β-內(nèi)酰胺類(lèi)酶抑制劑復(fù)合物耐藥。第39頁(yè)/共47頁(yè)廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2007~2011年MRSA和MRSCN的檢出率%第40頁(yè)/共47頁(yè)大腸埃希菌、克雷伯菌屬產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBL）。

第41頁(yè)/共47頁(yè)ESBL的檢測(cè)第42頁(yè)/共47頁(yè)肺炎克雷伯氏菌（Klebsiellapneumoniae）Antimicrobic抗生素MIC(mg/l)敏感度CefotaximeMeropenemCefoperazone/SulbactamAmikacinAmpicillinCefazolinCefepimeCeftazidimeESBLGentamicinImipenemPiperacillin/tazobactamLevofloxacinCefoxitinCefuroxime-AxetilCefuroxime-Sodium頭孢噻肟美羅培南（美平）頭孢哌酮/舒巴坦丁胺卡那（阿米卡星）氨芐青霉素頭孢唑啉（先鋒V號(hào)）頭孢吡肟復(fù)達(dá)欣（頭孢他啶）超廣譜β-內(nèi)酰胺酶慶大霉素亞胺培南（泰能）呱拉西林/他唑巴坦左旋氧氟沙星頭孢西丁頭孢呋新－酯頭孢呋新－鈉>=64<=2>=64>=64>=32>=32>=32>=32Pos>=16<=4>=128>=88>=32>=32耐藥敏感耐藥耐藥耐藥耐藥耐藥耐藥+耐藥敏感耐藥耐藥敏感耐藥耐藥評(píng)價(jià)：該細(xì)菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，對(duì)青霉素類(lèi)，頭孢菌素類(lèi)及氨曲南不論藥敏結(jié)果如何都視為耐藥。第43頁(yè)/共47頁(yè)廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2007~2011年大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌ESBL檢出率%第44頁(yè)/共47頁(yè)葡萄球菌

肺炎

鏈

球

菌β-溶血

鏈

球

菌草綠色

鏈

球

菌腸

球

菌青霉素（PG)紅霉素(E)頭孢西丁（FOX）克林霉素(CM)萬(wàn)古霉素（VA）利福平（RA）環(huán)丙沙星（CIP）慶大霉素（GM）力奈唑烷（LZ）青霉素（PG)紅霉素(E)頭孢曲松(CRO)克林霉素(CM)左旋氧氟沙星（LEV）萬(wàn)古霉素（VA）亞胺培南（IMP）力奈唑烷（LZ）青霉素（PG）紅霉素(E)克林霉素(CM)頭孢曲松(CRO)左旋氧氟沙星（LEV）萬(wàn)古霉素（VA）力奈唑烷（LZ）氨芐西林（AMP）青霉素（PG）紅霉素(E