免疫學(xué)免疫血清學(xué)技術(shù)

關(guān)于免疫學(xué)免疫血清學(xué)技術(shù)第一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第1節(jié)免疫血清學(xué)技術(shù)概述免疫血清學(xué)技術(shù)類型：凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)（免疫熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)記技術(shù)、放射免疫測(cè)定）、中和試驗(yàn)等第二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)特異性和交叉性抗原與抗體結(jié)合機(jī)理血清學(xué)反應(yīng)的影響因素：電解質(zhì)、溫度、酸堿度帶現(xiàn)象：前帶后帶第三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第2節(jié)細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)

檢測(cè)機(jī)體血液中的T細(xì)胞數(shù)量E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)T細(xì)胞酸性α醋酸萘酯酶測(cè)定

檢測(cè)機(jī)體血液中T細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)T細(xì)胞活化試驗(yàn)第六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第3節(jié)血清學(xué)技術(shù)的應(yīng)用及發(fā)展趨勢(shì)疫病診斷動(dòng)植物生理活性物質(zhì)研究物種及微生物鑒定動(dòng)植物形狀的免疫標(biāo)記生物制品研究致病機(jī)理研究分子生物學(xué)研究發(fā)展趨勢(shì)第七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第14章凝聚性試驗(yàn)

第1節(jié)凝集試驗(yàn)

直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原間接凝集試驗(yàn)：間接血凝實(shí)驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、炭素凝集試驗(yàn)第八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日直接凝集試驗(yàn)：顆粒性抗原基本原理：電解質(zhì)顆粒性抗原+相應(yīng)抗血清抗原顆粒凝集(細(xì)菌、紅細(xì)胞)

比例適合凝集原凝集素過多前帶現(xiàn)象（稀釋血清）方法：玻片法、試管法、微量法第九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日間接凝集試驗(yàn)：基本原理可溶性抗原（或抗體）+惰性載體（聚苯乙烯乳膠微粒、炭粒、綿羊紅細(xì)胞等）抗原（或抗體）致敏載體

抗原（抗體）致敏載體+相應(yīng)抗體（或抗原）被動(dòng)載體凝集（間接乳膠凝集、間接炭素凝集、間接紅細(xì)胞凝集等）第十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第2節(jié)沉淀實(shí)驗(yàn)

電解質(zhì)可溶性抗原+免疫血清出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象(血清蛋白、病毒)（抗體）比例適合

沉淀原沉淀素

比例不適合

不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象容易過多后帶現(xiàn)象（稀釋）第十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日環(huán)狀沉淀試驗(yàn)雙向單擴(kuò)散（輻射擴(kuò)散）雙向雙擴(kuò)散免疫電泳對(duì)流免疫電泳火箭免疫電泳第十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：小試管內(nèi)，下層沉淀素與上層沉淀原在界面應(yīng)，形成白色沉淀環(huán)。用途：檢測(cè)皮毛中的炭疽桿菌抗原（Ascoli試驗(yàn)）第十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日免疫熒光抗體技術(shù)原理：異硫氰酸熒光素（FITC）原理：熒光素（F）+AbAbF(FITC)

AbF+AgAg-AbF紫外光Ag-AbF第二十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日標(biāo)記抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物抗體提取IgG標(biāo)記標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定熒光抗體染色：標(biāo)本制備染色（直接法、間接發(fā)）應(yīng)用：用AbF檢測(cè)抗原（定性、定位）特點(diǎn)：敏感，需熒光顯微鏡第二十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第二十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第三十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日免疫酶標(biāo)記技術(shù)原理：常用標(biāo)記酶：辣根過氧化物酶（HRP）酶標(biāo)抗體的制備：抗原免疫動(dòng)物抗體提取IgG標(biāo)記（戊二醛法、過碘酸鈉法）標(biāo)記抗體的提純標(biāo)記抗體的鑒定常用免疫酶技術(shù)：免疫酶組織化學(xué)染色技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）應(yīng)用：第三十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第三十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第三十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日放射免疫分析原理：競(jìng)爭性RIA固相夾心RIAAg*(F)+AbAg*-Ab(B)+Ag

Ag-Ab標(biāo)記用同位素：3H、125I、32P、35S常用方法：液相放射免疫測(cè)定、固相非競(jìng)爭放射免疫測(cè)定應(yīng)用：用于藥物、激素、酶、腫瘤抗原等測(cè)定第三十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第三十五頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日

中和試驗(yàn)（病毒、毒素中和試驗(yàn)）原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感染易感動(dòng)物、雞或鴨胚、細(xì)胞活性例1-NDV9～11d雞胚24～48h雞胚死亡-NDV+抗血清9～11d雞胚雞胚不死亡第三十六頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日例2口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡例3

FMDV仔豬腎傳代細(xì)胞(IB-RS-2)單層細(xì)胞細(xì)胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解FMDV+抗血清IB-RS-2單層細(xì)胞細(xì)胞無病變CPU第三十七頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日用途：1.用已知血清鑒定病毒——診斷病毒病2.用已知病毒檢測(cè)血清抗體——診斷病毒感染，測(cè)定病毒免疫血清效價(jià)（中和價(jià)）第三十八頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日免疫檢測(cè)新技術(shù)SPA免疫檢測(cè)技術(shù)免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)：免疫膠體金光鏡染色法、免疫膠體金電鏡染色法、膠體金免疫層析法等免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)免疫核酸探針技術(shù)第三十九頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日細(xì)胞免疫技術(shù)一．E玫瑰花環(huán)試驗(yàn)原理：人、豬、牛、羊等的T細(xì)胞膜上的CD2是綿羊紅細(xì)胞受體，馬、豬的T細(xì)胞膜上的CD2是豚鼠紅細(xì)胞的受體。第四十頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日E花環(huán)第四十一頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日二.酸性α醋酸萘酯酶測(cè)定原理：酸性α醋酸萘酯酶

醋酸萘酯 α萘酚+醋酸離子+六偶氮副品紅

紅色反應(yīng)物+甲基綠

紅黑色顆粒用途：1.鑒別T、B細(xì)胞；2.血液中T細(xì)胞計(jì)數(shù)第四十二頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日

三．淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（一）形態(tài)學(xué)試驗(yàn)法原理：PHA+T細(xì)胞（有PHA受體）

轉(zhuǎn)化大的淋巴母細(xì)胞

顯微鏡觀察計(jì)算轉(zhuǎn)化率

轉(zhuǎn)化率=(過渡型細(xì)胞+母細(xì)胞)/200個(gè)淋巴細(xì)胞×100%特點(diǎn)：簡便，準(zhǔn)確性較差第四十三頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日第四十四頁，共四十六頁，編輯于2023年，星期日（二）3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）摻入法原理：試驗(yàn)管對(duì)照管PHA+T細(xì)胞+3H-TdRPHA+T細(xì)胞

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)